普通遗传学实验指导书.docx
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普通遗传学实验指导书
《普通遗传学》实验指导书
生命科学与技术实验教学中心
目录
实验一植物细胞减数分裂
实验二玉米一对相对性状的遗传分析
实验三果蝇的生活史及形态观察
实验四果蝇唾腺染色体的观察
实验五果蝇的双因子杂交实验
实验六果蝇的伴性遗传
实验七果蝇的连锁交换与基因定位
实验八细胞核内脱氧核糖核酸的定性鉴定
实验九植物多倍体的诱发与鉴定
实验十蚕豆根尖微核检测技术
实验十一 人群中PTC味盲基因频率的分析
实验十二植物基因组DNA的提取
实验课是普通遗传学课程教学中的一个重要环节,遗传学实验的目的主要有两方面:
一是验证遗传学的基本规律,帮助理解和记忆遗传学的基本理论;二是学习和掌握遗传学研究的基本操作技能,为将来从事遗传研究或继续深造打好基础。
本实验指导书是参考有关资料,结合农学、园艺专业的特点编写而成,所选材料主要是植物,在教学过程中,根据实验条件和学时数,从中选开有关实验,实验的顺序视材料的准备情况会有变动。
实验一植物细胞减数分裂
一、实验目的与要求
1.掌握植物花粉母细胞减数分裂的取材、固定和染色制片方法。
2.了解减数分裂各个时期染色体变化特征。
二、实验原理
减数分裂是保证各物种世代间染色体数目恒定的基础,仅在配子形成过程中发生,包括连续两次细胞分裂,而染色体只复制一次,结果形成四个核,每个核只含有单倍数的染色体,即染色体数目减少一半,所以称作减数分裂。
减数分裂的连续两次分裂都包括前期、中期、后期、末期等各个时期,但第一次分裂的前期的变化最为复杂,又可分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期,出现同源染色体的配对、交换等现象。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
玉米、小麦、蚕豆的花序固定材料。
2.用具:
显微镜、解剖针、镊子、刀片、恒温箱、载玻片、盖玻片、染色缸、试剂瓶、酒精灯、纱布、吸水纸等。
3.药品:
无水乙醇、冰醋酸、卡诺固定液、蒸馏水、醋酸洋红、改良品红。
四、实验方法与步骤
1.取材固定:
掌握各植物的最适时期和最适时间,保证大量花粉母细胞处于减数分裂时期,一般在上午9~11时取材效果较好;取好的材料立即放入卡诺固定液中,在低温处固定2~24h,在80%乙醇中处理半小时后,用70%乙醇保存于冰箱中。
2.解离:
挑出花药,经过70%酒精,再用蒸馏水冲洗,在1NHCl中60℃恒温下解离5~15min,用蒸馏水冲洗后用于染色压片。
3.染色:
取出花药吸去多余液体,放在载玻片上,加一滴醋酸洋红或改良品红,用镊子反复挤压花药,使花粉母细胞完全溢出来,尽可能去除残渣药壁,酒精灯上稍加热,放置2~3min,使染色体充分着色。
4.压片:
盖上盖玻片,用刀片架起盖玻片一角,中指和食指按住盖玻片边缘,用镊子尖轻敲几下,使花粉母细胞分散,移去刀片,在酒精灯上迂回稍加热后,用手指垂直压片。
5.观察:
在显微镜下观察花粉母细胞减数分裂的各个时期的图象。
五、思考与作业题
1.绘出所观察到的减数分裂各时期的典型图像。
2.在形成生殖细胞的过程中,染色体数目是怎样减数的?
3.减数分裂与有丝分裂的主要区别是什么?
实验二玉米一对相对性状的遗传分析
一、实验目的与要求
通过玉米一对相对性状的杂交试验,观察和分析杂种后代的性状表现,加深分离规律的理解。
二、实验原理
玉米籽粒胚乳非糯性和糯性由一对等位基因(Wx和wx)控制,且非糯(Wx)对糯(wx)为显性,由非糯和糯亲本杂交的F1植株能形成Wx和wx两类配子,由于带有Wx和wx基因的花粉对I-KI液有不同的颜色反应,可通过测定得出1:
1之比。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
玉米籽粒胚乳非糯性(Wx)和糯性(wx)杂交F1代的花粉。
2.用具:
普通生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、计算器等。
3.药品:
1%I-KI溶液。
四、实验方法与步骤
取糯性与非糯性杂交F1花粉,用1%I-KI溶液染色,低倍显微镜下观察,计数蓝黑色(非糯)和红褐色(糯性)花粉粒数目。
五、思考与作业题
将统计数据全班汇总填入下表,每人进行χ2测验或仅检验自己的结果是否相符。
实验三果蝇的生活史及形态观察
一、实验目的与要求
1.了解果蝇生活史各阶段的形态特征,观察果蝇的几种常见的突变类型。
2.掌握辨别雌雄果蝇的方法。
3.了解果蝇的饲养方法和处理方法。
二、实验原理
果蝇属于昆虫纲,双翅目,完全变态,生活周期短,生长迅速,繁殖能力强,每交配一次可排卵400~500个,其生活周期与温度密切相关,大于30℃时大部分死亡或不育,20℃时,生活周期为15天,25℃时,其生活周期为10天,在小于10℃的环境下,其生活周期为57天,所以,果蝇培养的最适温度是20~25℃。
果蝇形体小,生长迅速,繁殖率高,饲养简便,突变性状多,是遗传学研究的极好材料。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
野生型和常见的突变型果蝇。
2.用具:
体视显微镜、放大镜、小镊子、培养瓶、麻醉瓶、白瓷板、培养皿、毛笔。
3.药品:
乙醚、琼脂、玉米粉、蔗糖、酵母粉、苯甲酸。
四、实验方法与步骤
1.果蝇培养基的配制
1)按下表4倍量取样
水
玉米面
红糖
琼脂
苯甲酸(丙酸)
干酵母
1000ml
100g
100g
10g
2g(7ml)
适量
2)将苯甲酸溶于少量5ml95%的乙醇中。
3)取2/3水将琼脂煮溶→加红糖→加搅好的玉米面(1/3水)+苯甲酸→煮沸→50℃左右加入酵母粉(液)→培养瓶(1-2cm)处理:
150℃,3min干热灭菌(带瓶塞)。
2.果蝇的生活史观察
透过培养瓶观察果蝇生活史各阶段的形态:
幼虫、蛹、成虫,卵因极其微小而无法观察到。
3.果蝇的麻醉
将果蝇移入三角瓶,乙醚麻醉0.5min(翅张角小于45°)后转入培养皿中,麻醉状态一般可维持5~10min。
如观察中苏醒,可在培养皿内放一个滴有乙醚的滤纸条补救。
4.果蝇的性状观察
用放大镜观察白瓷板上的麻醉后的果蝇,区别雌雄体,观察果蝇常见的几种突变类型。
五、思考与作业题
1.描述果蝇的生活史。
2.如何区别雌雄果蝇?
实验四果蝇唾腺染色体的观察
一、实验目的与要求
1.掌握果蝇幼虫唾腺的解剖方法和唾腺染色体的制片方法。
2.观察果蝇的唾腺染色体,加深对染色体结构和功能的认识。
二、实验原理
果蝇唾腺染色体是果蝇幼虫期唾腺细胞核内染色线连续复制,但细胞核不分裂,而形成的多线染色体,又称为巨型染色体。
它比果蝇其它细胞的染色体长100~200倍,有1000~4000条染色体的拷贝。
这种染色体可以观察到由一个“中心”和五个臂组成(2n=8)。
这是由于各染色体的着丝粒周围的异染色质部分相互结合在一起,形成一个“中心”,又由于同源染色体紧密配对,第Ⅱ、第Ⅲ中位着丝粒的染色体各有左右两条臂,X染色体是端着丝粒染色体,只能看到一条染色体臂,第Ⅳ染色体则呈点状,所以可见五条臂。
而且每条染色体臂上还呈现不同的横纹(band)。
根据果蝇的表现型和它的唾腺染色体上横纹染色的深浅、宽窄及其他特征可为基因与性状的关系提供一定的依据,并可作出基因的细胞学图。
所以,唾腺染色体是细胞遗传学研究的极好材料。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
果蝇的三龄幼虫。
2.用具:
体视显微镜、普通生物显微镜、解剖针、镊子、载玻片、盖玻片。
3.药品:
1%醋酸洋红、0.7%生理盐水、1mol/LHCl、蒸馏水等。
四、实验方法与步骤
1.取16~18℃条件下培养的果蝇三龄幼虫置于载玻片上,滴加0.7%生理盐水。
2.双筒解剖镜下,用解剖针针尖掀住幼虫靠前端三分之一处,以固定幼虫,再用镊子或解剖针夹紧其口器的头部,用力把头部从身体中拉开。
位于幼虫前端食道两侧的唾腺便随之而出,弃去殊余部分,并剔除唾腺上白色脂肪。
3.将唾液置于载玻片上,滴一滴1%醋酸洋红染色数分钟,盖上盖玻片,外复吸水纸,用大拇指轻压,使细胞分散,吸去多余的染色液。
4.镜检。
先在10倍镜下观察找到染色体后,再换高倍镜下观察,比较各染色体的横向纹带、带宽大小、带纹排列顺序,以及由着丝点纠集组成的染色体中心。
五、思考与作业题
1.绘出所观察到的果蝇唾腺染色体的图像,标明染色中心和5条臂。
2.果蝇唾腺染色体与其他染色体在形态结构上有什么区别?
实验五果蝇的双因子杂交实验
一、实验目的与要求
通过果蝇两对相对性状的杂交试验结果分析,验证独立分配规律。
二、实验原理
果蝇长翅与残翅是一对相对性状,由位于第Ⅱ染色体上的基因+/vg决定,灰体和黑檀体是另一对相对性状,由位于第Ⅲ染色体上的基因+/e决定,因此取长翅黑檀体(++、ee)的雌蝇与残翅、灰体(vgvg++)的雄蝇交配(或反交),F1代全部是长翅灰体,F1代自交而得的F2将产生性状分离和重组,出现四种表现型,即长翅灰体、长翅黑檀体、残翅灰体、残翅黑檀体,比例为9:
3:
3:
1。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
长翅黑檀体(++、ee)与残翅、灰体(vgvg++)的果蝇。
2.用具:
体视显微镜或放大镜、饲养瓶、麻醉瓶、海棉板、白瓷板、解剖针、镊子、毛笔等。
3.药品:
乙醚、酒精等。
四、实验方法与步骤
1.麻醉。
取麻醉瓶(与饲养瓶口径大小相同),在其棉塞上滴几滴乙醚并塞好,将饲养瓶轻轻振动使果蝇全部落在培养基上,然后迅速拨去饲养瓶和麻醉瓶上的棉塞,口对口相吻合,饲养瓶在上,麻醉瓶在下,轻轻将麻醉瓶在海棉块上振动,使饲养瓶中的果蝇掉进麻醉瓶里,然后迅速塞好两只瓶的棉塞子。
当观察到麻醉瓶中的果蝇昏迷不动时,就可将果蝇倒在白瓷板上进行性状观察和雌雄的区别。
如仅观察统计可延长时间麻醉致死,其翅膀外展45°时说明已死亡。
如需继续培养以轻度麻醉呈昏迷状态为宜。
2.选取长翅、黑檀体处女蝇和残翅、灰体雄蝇5~6对(或反交),一起放入事先装有培养基的饲养瓶内。
3.一周后倒出亲本果蝇,等F1羽化后进行观察、记录。
4.任意选取正交或反交组合的F1雌雄果蝇(雌蝇必须处女蝇)7~8对,放入一个培养瓶中。
5.一周后倒去F1果蝇,待F2羽化后10天进行观察统计四种表现型的具体数目,或F2羽化后,每2~3天统计一次,连续统计7~8天。
6.将观察结果填入下表:
五、思考与作业题
1.对观察资料进行χ2测验,讨论实验结果是否符合独立分配规律。
2.果蝇杂交时应注意哪些事项?
实验六果蝇的伴性遗传
一、实验目的与要求
通过性连锁个体正、反交试验结果的分析,认识由性染色体上的基因所控制的性状分离规律以及了解伴性遗传在正、反交中的差异。
二、实验原理
果蝇有四对染色体,第一对为性染色体,其余三对为常染色体,果蝇的性别决定是XY为雄,XX为雌,伴性遗传也就是指位于性染色体上的基因所控制的性状在后代的表现因性别而转移,果蝇中已知红色眼和白色眼是一对相对性状,由位于X染色体上的基因+/w决定,而Y染色体没有对应的等位基因,将红眼和白眼果蝇交配,其后代眼色的表现就和性别有一定的关系,并且,正、反交的结果不一样。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
果蝇红眼和白眼品系。
2.用具:
放大镜、饲养瓶、麻醉瓶、海棉板、白瓷板、解剖针、镊子、毛笔等。
3.药品:
乙醚等。
四、实验方法与步骤
1.麻醉,同实验五。
2.选取红眼或白眼处女蝇5~6只,选取相对性状的雄果蝇5~6只,和雌果蝇一起放入事先盛有饲料的饲养瓶内,分别做正、反交组合各一瓶。
3.一周后倒去亲本果蝇,待F1羽化后进行观察统计不同眼色的雌雄果蝇数。
4.任意取正、反杂交组合的F1雌雄果蝇(雌雄无须处女蝇)7~8对放入同一个饲养瓶中。
5.一周后倒去F1,待F2羽化后10天进行观察统计不同眼色的雌雄果蝇数,也可每隔2~3天统计一次,共2~3次。
6.将观察结果填入下表
五、思考与作业题
1.对统计结果作χ2测验,检验是否与理论比值相符。
如不符,找出原因。
2.伴性遗传与常染色体遗传有什么差别?
实验七果蝇的连锁交换与基因定位
一、实验目的与要求
通过果蝇性染色体上已知位点相近的三个隐性基因的个体与其相对的野生型个体的杂交试验,验证连锁遗传规律,并根据三点测验结果进行基因定位。
二、实验原理
利用位于同一染色体上相近的三个等位基因的个体进行杂交,F1再与三个隐性个体进行测交,从测交结果的分析来确定基因位置的方法叫做三点测验。
因为三个等位基因位于同一染色体上,产生配子时要发生交换和重组,所以,从测交后代中就可直接得出交换重组的配子数,从而计算出重组值(交换值)。
果蝇的白眼、小翅、焦刚毛分别由位于X染色体上的三个隐性基因w、m、sn所决定,决定这些相对性状的基因就是表现为:
红眼、长翅、直刚毛。
实验选用三隐性的雌蝇与野生型雄蝇杂交,再让F1代兄妹交配就可得到测交后代,从测交结果计算出单交换值和双交换值,最后确定这些基因的在染色体上相对位置,绘出连锁遗传图。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
果蝇野生型品系:
红眼、长翅、直刚毛,突变型品系:
白眼(Whiteeye)、小翅(Miniature)、焦刚毛(Singed)。
2.用具:
体视显微镜、饲养瓶、麻醉瓶、白瓷板、海绵板、毛笔、解剖针等。
3.药品:
乙醚、酒精等。
四、实验方法与步骤
1.选取所需三隐性处女蝇和野生型雄蝇5~6对,一起放入盛有饲料的瓶中培养。
2.一周后倒去亲本。
3.待F1羽化后,观察F1的表现,雌蝇应全是野生型,而雄蝇是三隐性类型。
4.取F1雌、雄蝇7-8对(雌蝇无须处女膜),放入另一新的饲养瓶中。
5.一周后倒去F1,待F2羽化后10天,用肉眼和借助解剖镜进行观察统计各种表现型的个体数,亦可2~3天统计一次,连续2~3次。
6.将结果填入下表
五、思考与作业题
根据观察结果,计算各基因间的交换值,绘制连锁遗传图。
实验八细胞核内脱氧核糖核酸的定性鉴定
一、实验目的与要求
学习用孚尔根染色法鉴定细胞内DNA的基本原理和方法。
二、实验原理
染色体是遗传物质的载体,它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA),DNA系核苷酸的多聚体,核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成,当细胞经60℃、1mol/LHCl处理后,不仅使分生组织的细胞彼此分离,而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键,嘌呤脱下,脱氧核糖上的醛基暴露,形成含醛基的无嘌呤结构物,醛基与无色希夫试剂相遇时发生反应而呈现紫红色。
所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的存在。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
萌发的蚕豆、大麦等的根尖。
2.用具:
普通生物显微镜、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、试管、小玻璃瓶等。
3.药品:
希夫试剂(碱性品红、亚硫酸氢钠、活性炭)、漂洗液、1mol/LHCl、45%醋酸等。
四、实验方法与步骤
1.载取蚕豆或大麦根尖,用卡尔诺氏固定液固定。
2.95%、85%、70%酒精依次洗涤,去净醋酸味。
3.1mol/LHCl室温浸2~5min,然后移入60℃1mol/LHCl12min。
4.用洁净滤纸吸去材料表面沾附的液体,投入希夫试剂瓶,瓶外加黑纸或置于黑暗处0.5~3h染色。
5.从希夫试剂取出材料后,用新配漂洗液漂洗三次,每次5~10min,后用蒸馏水漂洗。
6.压片镜检,取根尖染色较深的部位少许置载玻片上,滴一滴45%醋酸,盖上盖玻片并外加滤纸,用铅笔之橡皮头连续轻击数下即成,置显微镜下观察。
7.作对照片。
根尖放在60℃蒸馏水中水解,或不经60℃仅在室温下用1mol/LHCl进行酸解。
其余操作步骤同上。
五、思考与作业题
1.分别制作经孚尔根染色和对照处理的临时片2张,并根据镜检结果绘图。
2.经60℃1mol/LHCl处理后的制片与对照处理制片有何区别?
为什么?
实验九植物多倍体的诱发与鉴定
一、实验目的与要求
1.掌握人工诱发多倍体植物的原理、方法及其在植物育种上的意义。
2.观察多倍体植物,鉴别植物染色体数目的变化及引起植物其他器官的变异。
二、实验原理
多倍体的诱发作用是由于药物(秋水仙素)抑制了纺锤丝的形成,每个染色体纵裂为二以后,不能向两极分开,细胞不能分裂成二个细胞,使每个细胞染色体加倍,若染色体加倍的细胞继续分裂,就形成多倍性的组织,由多倍性组织分化产生的性细胞,所产生的配子是多倍性的,因而也可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去,便形成多倍体细胞。
鉴定多倍体:
1)经秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖直接进行染色体计数。
2)多倍体植株形态巨大,花粉粒和气孔的增大作为染色体数目加倍的指标。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
蚕豆、大麦或其他植物种子。
2.用具:
显微镜、生化培养箱、冰箱、天平、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、吸管、吸水纸。
3.药品:
秋水仙素、95%酒精、冰醋酸、盐酸、碘化钾、改良苯酚品红染色液等。
四、实验方法与步骤
1.秋水仙素溶液配制:
取秋水仙素1g(先用少量95%乙醇助溶),溶于250~500mL蒸馏水中,配成浓度为0.05%、0.1%的溶液,冰箱中保存。
2.材料处理
先将种子用0.1%~0.2%升汞(HgCl2)消毒10min,清水洗净;再用0.1%秋水仙素溶液20~25℃浸泡24~36h,然后将种子置于盛有0.05%秋水仙素溶液的培养盘中发根。
3.切取已膨大的根尖,进行固定、保存、制片。
4.观察多倍体细胞,计算其染色体数目。
5.秋水仙素溶液处理后的种子清水洗净和未经处理的种子盆栽,分别从四倍体、二倍体植株上采集花粉(浸入45%冰醋酸中)和叶片。
1)将叶片下表皮撕下,在显微镜下观察、测量和比较多倍体和二倍体的气孔大小。
2)用吸管分别各取一滴花粉粒悬浮液到载玻片上。
滴上碘化钾溶液,盖上盖片,制成花粉粒装片。
然后镜检四倍体及二倍体玉米花粉粒的大小,用测微尺测量并记录。
五、思考与作业题
绘出蚕豆根尖多倍性细胞的中期染色体图像。
实验十蚕豆根尖微核检测技术
一、实验目的与要求
1.了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
2.学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理
微核(micronucleus,MCN)是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变,在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期,微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3~1/10,染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之外的小核,即微核。
三、实验材料、用具和药品
1.材料:
蚕豆种子。
2.用具:
显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯等。
3.药品:
卡诺固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、实验方法与步骤
1)浸种催芽:
择饱满、均匀的种子,洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24~30h,此期至少换水2次;待种子充分吸胀后,移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
2)用被检测液处理根尖:
当初生根长到2~3cm时,选初生根生长良好的蚕豆6~8粒,分别放入0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.8mol/L、1.6mol/LNaN3中染毒8~12h。
3)根尖细胞恢复培养:
处理后的种子用蒸馏水(自来水)浸洗3次,每次2~3min;将处理液洗净后,置于湿棉花上恢复22~24h;同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
4)根尖细胞固定:
将恢复后的种子,从根尖顶端切下1~1.5cm长的幼根,用卡诺固定液固定20~24h。
固定后的根如不及时制片,可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
5)酸解:
用蒸馏水浸洗固定好的幼根3次,每次5min,吸净蒸馏水,加入盐酸酒精解离液室温下酸解8~10min,幼根软化即可。
6)染色:
吸去盐酸,用蒸馏水浸没幼根3次,每次1~2min。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上,截下1~2mm左右长的根尖,滴1~2滴改良苯酚品红染液染色10~15min后,加上盖玻片,覆以吸水纸常规压片。
7)在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀,分裂相较多的部位,再转高倍镜观察微核。
每一处理观察3个根尖,每个根尖数1000个细胞,统计其中含微核的细胞数,然后平均,即为该处理的MCN%,即微核千分率,以此可作一个检测指标。
根据你的实验安排列表填出你的实验结果。
污染指数(PI)=样品实测MCN%平均值/对照组MCN%平均值
污染指数在0~1.5区间基本没有污染;1.5~2区间为轻度污染;2~3.5区间为中度污染;3.5以上为重度污染。
五、思考与作业题
1.在蚕豆根尖细胞的微核测试中,为什么要进行恢复培养?
2.产生微核的根尖细胞在产生前的分裂中期可能出现什么样的中期分裂图像?
实验观察中请同时仔细观察每个分裂相细胞。
实验十一 人群中PTC味盲基因频率的分析
一、实验目的与要求
1.学习和掌握群体中基因频率的分析方法。
2.通过对人体遗传性状的分析及基因频率的计算,了解选择对改变基因频率的作用。
二、实验原理
PTC即苯硫脲,是一种无毒无副作用的化合物,人体对苯硫脲(PTC)尝味的能力是由一对等位基因(Tt)所决定的遗传性状,其中T对t为不完全显性。
在不同人群中对该物质的尝味能力不同。
利用这一原理,将PTC配制成各种浓度的溶液,由低浓度到高浓度逐步测试学生的尝味能力,由此可区分出味盲(隐性纯合体)、高度敏感(显性纯合体)和介于二者之间的人(杂合体)。
据此可对人群中味盲基因的频率进行分析。
正常尝味者的基因型为TT,能尝出1/750,000~1/6,000,000的PTC溶液的苦味,具有基因Tt的人尝味能力较低,只能尝出1/480,000~l/380,000的PTC溶液的苦味酸,而基因型为tt的人只能尝出>1/24,000的PTC溶液的苦味,甚至对PTC的结晶物也尝不出苦味来,在遗传学上被称为味盲。
三、实验材料、用具与药品
l.PTC溶液的配制
原液:
取PTC结晶l.3g,加蒸馏水1000ml,时时摇晃,在室温(20℃左右)下l~2日即完全溶解。
原液的PTC浓度约为1/750,原液稀释1倍为2号液,2号液稀释1倍为3号液,以此类推,直至配成14号液,浓度为1/6,000,000。
将配好的14种PTC溶液分别置于消毒好的滴瓶中。
2.若干毫升蒸馏水及洁净滴管。
四、实验方法与步骤
1.让受试者坐于椅子上,仰头张嘴。
用滴管滴5~10滴14号液于受试者舌根部,让受试者徐徐咽下品味,然后用蒸馏水作同样的试验。
2.询问受试者能否鉴别此两种溶液的味道,若不能鉴别或鉴别不准确,则依次用13号,12号……溶液重复试验,直至能明确鉴别出PTC的苦味为止。
3.当受试者鉴别出某一号溶液时,应当再用此号溶液重复尝味三次,三次结果相同时,才是可靠的。
4.测定时应将PTC溶液与蒸馏水反复交替给受试者,以免由于受试者的猜想及其他心理作用而影响结果的准确性。
5.tt基因型的阈值范围为1~6号液,Tt基因型的阈值范围为7~l0号液,TT基因型的阈值范围为11~14号液。
根据测试结果,记录已统计所调查人群中的基因型。
五、思考与作业题
1.根据实验结果,算出味盲者tt基因型的频率。
2.求出基因t与基因T的频率。
实验十二植物基因组DNA的提取
一、实验目的与要求
掌握从高等真核生物细胞中制备基因组DNA的基本原理,熟悉从高等植物中提取基因组DNA的技术流程。
二、实验原理
本实验介绍的方法是C
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- 普通 遗传学 实验 指导书
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