缓冲液常用试剂培养基的配制方法.docx

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缓冲液常用试剂培养基的配制方法

实验常用试剂、缓冲液、培养基的配制方法

1、1MTris-HCl           □组份浓度1MTris-HCl

（pH7.4，7.6，8.0）   □配制量1L

    □配置方法1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

                         2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                         3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

                                                       pH值                     浓HCl 

                                                        7.4                        约70mL

                                                       7.6                        约60mL

                                                       8.0                        约42mL

                       4.将溶解定容至1L。

                       5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl    □组份浓度1.5MTris-HCl

   （pH8.8）           □配制量1L

        □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。

                          2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

                          3.用浓盐酸调pH值至8.8。

                            4.将溶液定容至1L。

                        5.高温高压灭菌后，室温保存。

      注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer       □组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA

（pH7.4，7.6，8.0） □配制量1L

 □配置方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

                              1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

                            500mMEDTA（pH8.0）20mL

                      2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

                    3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

                    4.室温保存。

4、3M醋酸钠     □组份浓度3M醋酸钠

   （pH5.2）          □配制量100mL

   □配置方法1.称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

                          2.加入冰乙酸调节pH值至5.2。

                      3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

                         4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBSBuffer         □组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

                               □配制量1L

□配置方法1.称量下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                     NaCl                   8g

                                                     KCl                     0.2g

                                                     Na2HPO4          1.42g

                                                     KH2PO4            0.27g

       2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

     3.滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

       4.高温高压灭菌后，室温保存。

      注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵        □组份浓度10M醋酸铵

                               □配制量100mL

  □配置方法1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

                       2.加去离子水将溶液定容至100mL。

                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

                         4.密封瓶口于室温保存。

       注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚   □配置方法

       1.使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

      2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

       3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

         ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

          ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

          ③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

          ④重复操作步骤③。

          ⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

         ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

          ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

          ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇  □配置方法

       1.说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

       2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS   □组份浓度10％（W/V）SDS

                                  □配制量100mL

    □配置方法1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

                     2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

                           3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH          □组份浓度2NNaOH

                                □配制量100mL 

    □配置方法

1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

      2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

    3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

     4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl        □组份浓度2.5NHCl

                                 □配制量100mL

    □配置方法1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

                        2.室温保存。

12、5MNaCl         □组份浓度5MNaCl

                                □配制量1L

  □配置方法1.称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

                   2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

                  3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose    □组份浓度20％（W/V）Glucose 

                                             □配制量100mL 

 □配置方法1.称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

                   2.加去离子水将溶液定容至100mL。

                     3.高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI           □组份浓度2