细菌的生物化学试验考点总结.docx

细菌的生物化学试验考点总结.docx

《细菌的生物化学试验考点总结.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌的生物化学试验考点总结.docx（13页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

细菌的生物化学试验考点总结

细菌的生物化学试验考点总结

　　一、碳水化合物的代谢试验

　　原理：

　　由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分解糖。

　　据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。

　　1.糖（醇、苷）类发酵试验

　　原理：

由于各种细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，故分解糖类的能力不同，分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸、产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。

　　培养基：

在培养基中加入0.5%～1%的糖类（单糖、双糖或多糖）、醇类（甘露醇、肌醇等）、苷类（水杨苷等）。

　　方法：

接种，培养。

　　结果：

　　产酸：

培养基中的指示剂呈酸性反应。

　　产气：

可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。

　　不分解：

培养基中除有细菌生长外，无任何其他变化。

　　应用：

是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。

　　2.氧化-发酵试验（0/F试验）

　　原理：

　　氧化型：

仅在有氧环境中分解葡萄糖。

　　发酵型：

在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖。

　　产碱型：

在有氧或无氧环境中都不能分解葡萄糖。

　　培养基：

HL（Hugh-Leifson）培养基。

　　方法：

将待检菌同时穿刺接种两支HL培养基，其中一支培养基滴加无菌的液体石蜡（或其他矿物油），高度不少于1cm。

将培养基于35℃培养48h或更长。

　　结果：

开管

封闭管

产碱型

-

-

氧化型

+

-

发酵型

+

+

　　应用：

　　3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）

　　原理：

　　试剂：

0.75MONPG溶液。

　　方法：

从培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。

将试管置37℃水浴5min，加入0.25mlONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。

　　结果：

菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。

　　应用：

　　迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。

　　本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。

　　4.七叶苷水解试验

　　原理：

　　培养基：

七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基。

　　方法：

将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结果。

　　结果：

培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。

　　应用：

主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别。

　　5.甲基红试验

　　原理：

　　培养基：

葡萄糖蛋白胨水培养基。

　　方法：

将待检菌接种于上述培养基中，培养2～4d，于培养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。

　　结果：

呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。

　　应用：

　　肠杆菌科：

沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属（+）。

　　肠杆菌属、哈夫尼亚菌属（-）。

　　6.V-P试验

　　原理：

　　培养基：

葡萄糖蛋白胨水培养基

　　方法：

将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液），振摇。

　　结果：

在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于35℃4h后仍如故者即为阴性。

　　应用：

本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。

　　二、蛋白质和氨基酸的代谢试验

　　原理：

不同种类的细菌分解蛋白质的能力不同。

细菌对蛋白质的分解，一般先由胞外酶将复杂的蛋白质分解为短肽（或氨基酸），渗入菌体内，然后再由胞内酶将肽类分解为氨基酸。

　　1.明胶液化试验

　　原理：

　　方法：

将被检菌穿刺接种于明胶培养基，于22℃培养7d，逐日观察结果。

若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察结果前，先置4℃冰箱内30min，再看结果。

　　结果：

培养基呈液化状态为阳性。

　　应用：

　　肠杆菌科细菌的鉴别：

沙雷菌、普通变形杆菌、奇异变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶，而其他细菌很少液化明胶。

　　厌氧菌如产气荚膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。

　　多数假单胞菌也能液化明胶。

　　2.吲哚（靛基质）试验

　　原理：

　　培养基：

蛋白胨水培养基。

　　方法：

将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。

　　结果：

于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

　　应用：

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　　3.硫化氢试验

　　原理：

　　培养基：

醋酸铅培养基。

　　方法：

将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48h观察结果。

　　结果：

培养基变黑为阳性，不变为阴性。

　　应用：

主要用于肠杆菌科中属及种的鉴别。

　　如沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性，其他菌属阴性。

　　沙门菌属中也有硫化氢阴性菌种。

　　4.尿素分解试验

　　原理：

　　培养基：

尿素培养基。

　　方法：

将待检菌接种于尿素培养基，于35℃培养18～24h观察结果。

　　结果：

培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性。

　　应用：

主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。

奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。

另外雷氏普罗威登菌和摩根菌为阳性，而斯氏和产碱普罗威登菌阴性。

　　5.苯丙氨酸脱氨酶试验

　　原理：

　　培养基：

苯丙氨酸琼脂培养基。

　　方法：

将被检菌浓厚接种于苯丙氨酸琼脂培养基斜面上，于35℃培养18～24h，滴加10%三氯化铁试剂3～4滴，自斜面上方流下。

　　结果：

应立即观察结果，出现绿色为阳性。

　　应用：

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　　6.氨基酸脱羧酶试验

　　原理：

　　培养基：

氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基。

　　方法：

将被检菌分别接种于赖氨酸（或鸟氨酸或精氨酸）培养基和氨基酸对照培养基中，并加入无菌液体石蜡或矿物油，于35℃培养1～4d，每日观察结果。

　　结果：

对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为溴甲酚紫）为阳性，若测定管呈黄色为阴性。

若对照管呈现紫色则试验无意义，不能作出判断。

　　应用：

主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　　如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。

　　志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。

　　三、碳源和氮源利用试验

　　细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验。

　　1.枸橼酸盐利用试验

　　原理：

　　培养基：

枸橼酸盐培养基。

　　方法：

将被检菌接种于枸橼酸盐培养基，于35℃培养1～4d，每日观察结果。

　　结果：

由淡绿色变为深蓝色为阳性；不能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌，在此培养基上不能生长，培养基则不变色，为阴性。

　　应用：

用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。

　　在肠杆菌科中埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属、克雷伯菌属通常为阳性。

　　2.丙二酸盐利用试验

　　原理：

　　培养基：

丙二酸盐培养基。

　　方法：

将被检菌接种于培养基，35℃培养24～48h后观察结果。

　　结果：

培养基由淡绿色变为深蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。

　　应用：

肠杆菌科中属间及种的鉴别。

　　克雷伯菌属为阳性，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性，其他菌属均为阴性。

　　四、各种酶类试验

　　1.氧化酶试验

　　原理：

　　试剂：

1%盐酸四甲基对苯二胺或1%盐酸二甲基对苯二胺。

　　方法：

　　1）菌落法：

直接滴加试剂于被检菌菌落上。

　　2）滤纸法：

取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。

　　3）试剂纸片法：

将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。

　　结果：

细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。

为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。

　　应用：

　　2.过氧化氢酶试验（触酶试验）

　　原理：

　　试剂：

3%过氧化氢溶液。

　　方法：

取菌置于洁净的试管内或玻片上，然后加3%过氧化氢数滴；或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。

　　结果：

有大量气泡产生者为阳性。

不产生气泡者为阴性。

　　应用：

此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群。

　　3.硝酸盐还原试验

　　原理：

　　培养基：

硝酸盐培养基。

　　试剂：

甲液（对氨基苯磺酸）；乙液（α-萘胺）。

　　方法：

被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养1～4d。

将甲、乙液等量混合后（约0.1ml）加入培养基内，立即观察结果。

　　结果：

出现红色为阳性。

　　若加入试剂后无颜色反应，可能是：

　　①硝酸盐没有被还原，试验阴性；

　　②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。

若仍不产生红色，表示试验为假阴性。

　　应用：

　　肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；

　　铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

　　4.脂酶试验

　　原理：

　　培养基：

脂酶培养基（含维多利亚蓝）。

　　方法：

将被检菌接种于上述培养基中，于37℃培养24h。

　　结果：

培养基变为蓝色为阳性，阴性为粉红色或无色。

　　应用：

主要用于厌氧菌的鉴别。

　　类杆菌属中的中间类杆菌产生脂酶，其他类杆菌则阴性；

　　芽胞梭菌属中产气芽胞梭菌、肉毒梭菌和诺维梭菌为阳性，而其他梭菌阴性。

　　5.卵磷脂酶试验

　　原理：

　　培养基：

1%卵黄琼脂平板。

　　方法：

将被检菌划线接种于卵黄琼脂平板上，35℃培养3～6h。

　　结果：

若3h后在菌落周围形成乳白色混浊环，即为阳性，6h后混浊环可扩展至5～6mm。

　　应用：

主要用于厌氧菌的鉴定。

　　产气荚膜梭菌、诺维梭菌产生此酶，其他梭菌为阴性。

　　6.DNA酶试验

　　原理：

某些细菌产生DNA酶，可使长链DNA水解成寡核苷酸链。

因为长链DNA可被酸沉淀，寡核苷酸链则溶于酸，所以当在菌落平板上加入酸后，会在菌落周围出现透明环。

　　培养基：

0.2%DNA琼脂平板。

　　方法：

将被检菌点种于上述平板上，于35℃培养18～24h，然后用1mol/L盐酸覆盖平板，观察结果。

　　结果：

在菌落周围出现透明环为阳性，无透明环为阴性。

　　应用：

在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶；

　　在肠杆菌科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶。

　　7.凝固酶试验

　　原理：

　　方法：

　　1）玻片法：

取兔血浆和盐水各一滴，分别置于洁净的玻片上，挑取被检菌分别与血浆和盐水混合。

　　2）试管法：

取试管2支，各加0.5ml人或兔血浆，挑取被检菌和阳性对照菌分别加入血浆中并混匀，于37℃水浴3～4h。

　　结果：

玻片法以血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象判为阳性；试管法以血浆凝固判为阳性。

　　应用：

作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。

　　8.CAMP试验

　　原理：

B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的β-溶血素溶解红细胞的活性，因此在两菌（B群链球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现矢形（半月形）的溶血区。

　　培养基：

血琼脂平板。

　　方法：

先以产β-溶血素的金黄色葡萄球菌划一横线接种于血琼脂平板上，再将被检菌与前一划线作垂直划线接种，两线不能相交，相距0.5～1cm，于37℃培养18～24h，观察结果。

　　结果：

在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。

　　应用：

在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。

　　9.胆汁溶菌试验

　　原理：

胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。

　　试剂：

10%去氧胆酸钠。

　　方法：

　　1）平板法：

取10%去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30min后观察结果。

　　2）试管法：

被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入10%去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35℃水浴10～30min，观察结果。

　　结果：

平板法以“菌落消失”判为阳性；

　　试管法以“加胆盐的培养物变透明，而对照管仍混浊”判为阳性。

　　应用：

　　五、抑菌试验

　　1.O/129抑菌试验

　　原理：

0/129（二氨基喋啶）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属细菌无抑制作用。

　　培养基：

碱性琼脂平板。

　　方法：

将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取0/129纸片（含药40μg）贴于平板上，35℃培养18～24h观察结果。

　　结果：

出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药。

　　应用：

用于弧菌科的属间鉴别。

　　2.杆菌肽试验

　　原理：

A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。

　　培养基：

血琼脂平板。

　　方法：

将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于血液琼脂平板上，稍干后贴上0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃培养18～24h观察结果。

　　结果：

抑菌环直径＞1Omm为敏感，抑菌环直径＜1Omm为耐药。

　　应用：

用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。

　　3.奥普托欣（Optochin）试验

　　原理：

几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。

　　培养基：

血琼脂平板。

　　方法：

将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的Optochin纸片，35℃培养18～24h观察结果。

　　结果：

抑菌环直径＞14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。

　　应用：

主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。

　　可分解七叶苷的细菌是

　　A.肺炎链球菌

　　B.A群链球菌

　　C.B群链球菌

　　D.C群链球菌

　　E.D群链球菌

『正确答案』E

『答案解析』七叶苷水解试验主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。

　　大肠埃希菌的靛基质试验阳性，请问靛基质是细菌分解什么物质产生的

　　A.葡萄糖

　　B.尿素

　　C.色氨酸

　　D.半胱氨酸

　　E.枸橼酸盐

『正确答案』C

『答案解析』有些细菌具有色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚。