第三组微生物实习报告.docx
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第三组微生物实习报告.docx
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第三组微生物实习报告
实习报告
实习名称
食品微生物检验实
系别
生物与化学工程系
年级专业
07级食品质量与安全专业
学生姓名
Xxx
指导老师
Xxx
邵阳学院
2010年12月5日
生物性危害项目检测
一、实习时间、地点和实习单位:
实习时间:
2010年11月22日至2010年12月5日
实习地点:
生物与化学工程系实验楼(3#104、106、108)
实习单位:
07食品质量与安全班食品微生物检测实习第三组
2、实习过程概述:
时间
主要内容
2010年11月18日
实习动员实习准备
2010年11月22日—23日
资料查阅、方案拟定,交指导老师审阅
2010年11月24日
找仪器、药品及配制好所有需要的试剂
2010年11月25日—28日
酸奶中细菌总数的测定
2010年11月29日—12月2日
新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋霉菌和菌落总数的对比检测
2010年12月3日
交还实验药品及仪器,打扫实验室卫生
2010年12月4日—5日
整理实习报告,并上交
三、主要实习岗位和实习内容
1、主要实习岗位:
邵阳学院学院微生物实验室
2、实习内容:
检测酸奶中的菌落总数
检测新鲜鸡蛋与经培养后的鸡蛋中菌落总数的变化
检测新鲜鸡蛋与经培养后的鸡蛋中霉菌的变化
酸奶中的细菌含量检测
1、基本原理
平板菌落计数法又称标准平板活菌计数法(standardplatecount,简称SPC法),是最常用的一种活菌计数法。
它是根据微生物在高度稀释条件下于固体培养基上所形成的单个菌落,是由一个单细胞繁殖而成,这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。
计数时,根据待检样品的污染程度,做10倍递增系列稀释,制成均匀的系列稀释液,促使样品中的微生物细胞分散开,使之呈单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞),选择其中2~3个稀释液,使至少一个稀释度的平皿中培养基内,经恒温培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数,根据其稀释液倍数和取样接种量即可换算出样品中的活菌数。
2、实验材料
(1)检样
(2)培养基 营养琼脂培养基(即牛肉膏蛋白胨琼脂)。
(3)试剂 0.85%无菌生理盐水(9mL/管,225mL/250mL三角瓶内含适量玻璃珠)、75%酒精棉球。
(4)仪器与其他用具 无菌平皿、无菌吸管、无菌不锈钢勺、无菌称量纸、无菌吸管(1mL、10mL)、试管、三角瓶、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、三角形玻璃涂布棒、酒精灯、电子天平(0.01g)、培养箱、冰箱、恒温水浴锅、微波炉、匀质器或乳钵等。
3、操作步骤
1检样→做几个适当倍数的稀释液→选择2~3个适宜的稀释度各以1mL量加入灭菌平皿内→每皿加入适量营养琼脂混匀→(36±1)℃,(24~48)h±2h培养→菌落计数→报告
2营养琼脂培养基配制
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15~20g
蒸馏水 1000mL
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。
加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。
分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
注:
此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。
如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。
3检样稀释及培养
(1)以无菌操作,将检样25ml放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:
10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:
10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:
100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管
.(4)根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46°C营养琼脂培养基[可放置在((46±1)°C)水浴锅内保温]注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置(36±1)°C恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
4菌落计算方法
①平板菌落数的选择
选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余的一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落数;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。
②稀释度的选择
应选择平均菌落数在30~300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。
若有两上稀释度,其生长的菌落数均在30~300之间,则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字。
若所有稀释度平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
③菌落数的报告
菌落数在100以内时,按其实有数报告,大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。
5、实验结果:
活菌数/ml=同一稀释度的菌落平均数×稀释倍数
稀释度
10-4
10-5
10-6
空白
第一组
130
25
2
0
第二组
113
19
4
0
平均数
121.5
22
3.0
0
活菌数,个/ml
1.2×106
2.2×106
3.0×106
0
平均数,个/g
2.1×106
0
6、实验现象:
细菌菌落呈点状,在培养基上生长较均匀的,计数时可以只数一半再乘两倍。
部分菌落大范围成块和只在平皿外圈形成菌落的不好计数。
7、实验问题及解决办法:
实验中有部分平皿涂布不均匀,导致实验结果不好计数,舍去不好计数的平皿,选择菌落生长较均匀的平皿计数。
新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋菌落总数的对比检测
1、原理
菌落总数:
食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。
2、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1恒温培养箱:
36℃士1℃,
2.2冰箱:
2℃—5℃
2.3恒温水浴箱:
46℃士1℃。
2.4天平:
感量为0.1g
2.5试管
2.6振荡器。
2.7无菌吸管:
1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
2.8无菌锥形瓶:
容量250mL,500mL
2.9无菌培养皿:
直径90mm
2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.11放大镜或/和菌落计数器。
2.12玻璃珠
2.13玻璃棒
3、培养基和试剂
3.1平板计数琼脂培养基:
(1)成分
胰蛋白陈5.0g
酵母浸膏2.5g
萄糖1.0g
琼脂15.0g
蒸馏水1000mL
pH7.0士0.2
(2)制法
将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。
分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌15min
3.2磷酸缓冲液:
(1)成分
磷酸二氢钾(KH2P04)34.0g
蒸馏水500mL
pH7.2
(2)制法
贮存液:
称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175ml的1mol/l氢氧化钠调节PH,用蒸馏水稀释至1000mL)u贮存于冰箱。
稀释液:
取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15min
3.4新鲜鸡蛋
3.5在27℃培养了48h的非新鲜鸡蛋
4操作步骤
4.1样品的稀释
4.1.1液体样品:
以无菌吸管吸取1mL样品置盛有9mL磷酸缓冲液的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:
10的样品匀液。
4.1.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1mL沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:
100的样品匀液。
4.1.3制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。
4.1.4根据对样品污染状况的估计,选择2个一3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
4.1.5及时将巧15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃士1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
4.2培养
4.2.1待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃士1℃培养48h士2h。
水产品30℃士1℃培养72h士3h
4.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按4.2.1条件进行培养。
4.3菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunitsCFU)表示。
4.3.1选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
4.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
4.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
5实验现象及结果分析:
经过48h恒温培养,除对照组外所有平板上都有菌落生长,选取其中菌落较明显,可有效计数的平板计数,数据如下:
样品
稀释度
10-3
10-4
10-5
空白
新鲜鸡蛋
第一组
84
10
1
0
第二组
76
8
0
0
平均数
80
9
0.5
0
活菌数
(cfu/mL)
8×104
9×104
5×104
0
培养的非新鲜鸡蛋
第一组
156
32
4
0
第二组
142
34
3
0
平均数
149
33
3.5
0
活菌数(cfu/mL)
1.49×105
3.3×105
3.5×105
0
由上述实验结果可知,经过培养的鸡蛋细菌数目明显多于新鲜的鸡蛋。
新鲜鸡蛋与培养非新鲜鸡蛋霉菌的对比检测
1、检验方法和引用标准
1.1霉菌和酵母的计数方法,与菌落总数的测定方法基本相似。
主要步骤为:
将样
品制作成10倍梯度的稀释液,选择3个合适的稀释度,吸取1mL于平皿,倾
注培养基后,培养观察,计数。
对霉菌的计数,还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
1.2GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
2、 设备和材料
2.1 恒温箱:
25~28℃
2.2 振荡器
2.3天平
2.4显微镜
2.5 玻塞三角瓶:
300 mL
2.6试管:
15 mm×150 mm
2.7 平皿:
直径9 cm
2.8吸管:
1 mL及 10 mL
2.9酒精灯
2.10载物玻片
2.11盖玻片
2.12锥形瓶。
2.13牛皮纸袋:
121℃灭菌20 min
2.14金属勺、刀等
2.15试管架
2.16接种针
2.17橡皮乳头
3、 培养基和试剂
3.1 高盐察氏培养基:
按GB 4789.28 中4.78 规定。
硝酸钠(GB636)2g
磷酸二氢钾(GB1274)1g
硫酸镁(MgSO4·7H20,GB671)0.5g
氯化钾(GB646)0.5g
硫酸亚铁(GB664)0.01g
氯化钠(GB1266)60g
蔗糖(HG3—1001)30g
琼脂20g
蒸馏水1000mL
高盐察氏培养基制法:
加热溶解,分装后,121℃高压灭菌20min。
必要时,可酌量增加琼脂。
3.2灭菌蒸馏水。
3.3乙醇。
3.4新鲜鸡蛋
3.5培养的非新鲜鸡蛋
4、检测程序:
检样→加无菌水稀释液10倍稀释振荡30min→做成几个当倍数的稀释液→选择3个适当稀释度、各以1ml加入灭菌平皿内→每皿加入适量高盐察氏培养基→25-28±1℃培养1周→菌落计数→实验报告
5、 操作步骤
5.1 采样:
取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。
首先准备好灭菌容器和采样工具,如灭菌牛皮纸袋或锥形瓶等。
在卫生学调查 基础上,采取有代表性的样品。
样品采集后应尽快检验,否则应将样品放在低温干燥处。
5.2 以无菌操作称取检样 1mL,放入含有9 mL灭菌水的玻塞三 角瓶中,振摇均匀,即为 1:
10 稀释液。
5.3 用灭菌吸管吸取1:
10稀释液 10 mL,注入试管中振摇均匀,使霉菌孢子充分散开。
5.4 取1 mL1:
10稀释液注入含有 9 mL灭菌水或生理盐水的试管中振摇均匀,此液为 1:
100 稀释液。
5.5 按上述操作顺序做10倍递增稀释液,根据对样品污染情况的估计,选择 3 个合适的稀释度,分别在做 10 倍稀释的同时,吸取 1 mL 稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做 2 个平皿,然后将凉至 45℃左右的培养基注入平皿中,待琼脂凝固后,倒置于 25~28℃温箱中,3 d 后开始观察,共培养观察 5 d。
5.6 计算方法:
通常选择菌落数在10~150之间的平皿进行计数,同稀释度的 2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克 (或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。
样品
稀释度
10-2
10-3
空白
新
鲜
鸡
蛋
第一组
12
2
0
第二组
20
3
0
平均数
16
2.5
0
活菌数(cfu/mL)
1.6×103
2.5×103
0
培养的非新鲜鸡蛋
第一组
7
1
0
第二组
5
0
0
平均数
6
0.5
0
活菌数(cfu/mL)
6×102
5×102
0
5.7报告:
每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以个/g(个/mL)表示。
6、实验结果:
通过实验数据我们可以得知经过培养的鸡蛋霉菌数目明显多于新鲜的鸡蛋。
四、实验收获及心得体会
在实习期间通过理论联系实际,不断的学习和总结经验,巩固了所学的知识,提高了处理实际问题的能力,为毕业设计的顺利进行总结了经验。
实习中的感悟
首先、毕业实习的顺利进行得益于扎实的专业知识。
用人单位在招聘员工的第一要看的就是你的专业技能是否过硬。
我们一同过去的几位应聘者中有来自不同学校的同学,有一部分同学就是因为在专业知识的掌握上比别人逊色一点而落选。
因为对于用人单位来说如果一个人有过硬的专业知识,他在这个特定的岗位上就会很快的得心应手,从而减少了用人单位要花很大的力气来培训一个员工。
第二、在工作中要有良好的学习能力,要有一套学习知识的系统,遇到问题自己能通过相关途径自行解决能力。
第三、良好的人际关系是我们顺利工作的保障。
外在工作之中自己也有很多不足的地方。
例如:
缺乏实践经验,缺乏对相关技能知识的标准掌握等。
所在我常提醒自己一定不要怕苦怕累,在掌握扎实的理论知识的同时加强实践,做到理论联系实际。
另一方面要不断的加强学习,学习新知识、新技术更好的为人民服务
对自己要求:
一、继续学习,不断提升理论素养。
在信息时代,学习是不断地汲取新信息,获得事业进步的动力。
作为一名年轻人更应该把学习作为保持工作积极性的重要途径。
走上工作岗位后,我积极响应单位号召,结合工作实际,不断学习理论、技能知识和社会知识,用先进的理论武装头脑,用精良的业务知识提升能力,以广博的社会知识拓展视野。
二、努力实践,自觉进行角色转化。
“理论是灰色的,生活之树常青”,只有将理论付诸于实践才能实现理论自身的价值,也只有将理论付诸于实践才能使理论得以检验。
同样,一个人的价值也是通过实践活动来实现的,也只有通过实践才能锻炼人的品质,彰现人的意志。
从学校走向社会,首要面临的问题便是角色转换的问题。
从一个学生转化为一个单位人,在思想的层面上,必须认识到二者的社会角色之间存在着较大的差异。
学生时代只是单纯的学习知识,而社会实践则意味着继续学习,并将知识应用于实践,学生时代可以自己选择交往的对象,而社会人则更多地被他人所选择。
诸此种种的差异。
不胜枚举。
但仅仅在思想的层面上认识到这一点还是不够的,而是必须在实际的工作和生活中潜心体会,并自觉的进行这种角色的转换。
6、其它
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- 特殊限制:
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- 第三 微生物 实习 报告