实验室常用溶液配制.docx

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实验室常用溶液配制

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）:

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，

须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/LHEPES：

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/LHCl：

加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/mlIPGT：

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/LPMSF：

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK）：

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－freeRNase）：

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）：

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt'sregent）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）

2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）

2%BSA（组分V）

水

2g

2g

2g

加水至总体积为100ml

依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

0.5mol/LTris-HCl

100mmol/LMgCl2

100mmol/LDTT

2mmol/LATP

5mmol/L盐酸亚精胺（可选）

0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）

水

5ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

1ml1mol/L贮液

200ul100mmol/L贮液

50ul1mmol/L贮液

0.5ml10mg/mL贮液

2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

成分及终浓度

配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/LdATP

10mmol/LdCTP

10mmol/LdGTP

10mmol/LdTTP

水

2ul100mmol/LdATP贮液

2ul100mmol/LdCTP贮液

2ul100mmol/LdGTP贮液

2ul100mmol/LdTTP贮液

12ul

20％PEG8000/2.5MNaCl

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇

2.5mol/L氯化钠

水

20g

50ml5mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L柠檬酸三钠（二水）

3mol/L氯化钠

水

88.2g

175.3g

补足1L

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ulDEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide）

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer）

按照下表所给定的体积，混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O）贮液：

溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L磷酸二氢钠（ml）

1mol/L磷酸氢二钠（ml）

最终pH值

877

850

815

775

735

685

625

565

510

450

390

330

280

123

150

185

225

265

315

375

435

490

550

610

670

720

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

7.0

7.1

7.2

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度

配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/LTris－HCl

1mmol/LEDTA

水

1ml1mol/LTris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）

200ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

98.8ml

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）

pH

8.6

14

21

28.5

38

46

56

66

71.3

76

9.0

8.8

8.6

8.4

8.2

8.0

7.8

7.6

7.4

7.2

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

2mol/LTris碱

1mol/L乙酸

100mmol/LEDTA

水

242g

57.1ml的冰乙酸（17.4mol/L）

200ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度

配制1L溶液各成分的用量

445mmol/LTris碱

445mmol/L硼酸盐

10mmol/LEDTA

水

54g

27.5g硼酸

20ml的0.5mol/LEDTA（pH8.0）

补足1L

染料

1％溴酚蓝（bromophenolblue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylenecyanoleFF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.3N氢氧化钠

6mmol/LEDTA

18％聚蔗糖（400型）

0.15％溴甲酚绿

0.25％二甲苯青FF

水

300ul10N氢氧化钠

120ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.8g

15mg

25mg

补足到10ml

6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

15％聚蔗糖（400型）

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

1.5g

补足到10ml

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.25％溴酚蓝

0.25％二甲苯青FF

15％聚蔗糖（400型）

水

2.5ml1％溴酚蓝

2.5ml1％二甲苯青FF

1.5g

补足到10ml

6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

50％甘油

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

3ml

3.9ml

6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.15％溴酚蓝

0.15％二甲苯青FF

5mmol/LEDTA

40％聚蔗糖

水

1.5ml1％溴酚蓝

1.5ml1％二甲苯青FF

100ul0.5mol/LEDTA（pH8.0）

4g

补足到10ml

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度

配制10ml溶液各成分用量

0.2％溴酚蓝

0.2％二甲苯青FF

200mmol/LEDTA

0.1％SDS

50％甘油

水

20mg

20mg

4ml0.5mol/LEDTA（pH8.0）

100ul10％SDS

5ml

补足到10ml

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

10g

酵母提取物

5g

氯化钠

10g

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

5g

氯化钠

0.5g

1mol/L氯化钾

2.5ml

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份，高压灭菌。

培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。

TB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

12g

酵母提取物

24g

甘油

4ml

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。

高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。

2×YT培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

16g

酵母提取物

10g

氯化钠

4ml

如果需要用1NNaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。

注：

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

YPD培养基

将下列组分溶解在0.9L水中：

蛋白胨

20g

酵母提取物

10g

葡萄糖

20g

用水补足体积为1L后，高压灭菌。

建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）

溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin）（50mg/ml）

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

萘啶酮酸（nalidixicacid）（5mg/ml）

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline）（10mg/ml）

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。

常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

几种溶液的配制方法

1、PBS:

取ZLI-9061PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。

2、TBS：

2.1Tris缓冲液配方：

（0.5MpH7.6）

Tris（三羟甲基氨基甲烷）

60.57g

1NHCL

约420ml

双蒸水

加至1000ml

Tris缓冲液配制方法：

先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。

此液为储备液，4℃冰箱中保存。

2.2TBS配方：

Tris-HCI缓冲液（0.5MpH7.6）

100ml

NaCI

8.5~9g（0.15mol/L）

双蒸水

加至1000ml

TBS配制方法：

先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。

3、枸橼酸盐缓冲液（Citratebuffer）：

3.1储存液：

A.0.1M枸橼酸溶液：

称取21.01g枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml蒸馏水中。

B.0.1M枸橼酸钠溶液：

称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml蒸馏水中。

3.2工作液：

取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为6.00.1

4、胰酶（Trypsin）：

4.1ZLI-9011胰蛋白酶消化液：

常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:

3稀释），则可直接滴加使用。

胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:

10稀释）至0.25%（1:

1稀释）。

4.2ZLI-9010胰蛋白酶：

取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml0.05%或0.1%pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

5、胃酶（Pepsin）：

4%胃蛋白酶，用0.1mol/LHCL配制。

（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）

6、DAB：

6.1ZLI-9032/9033DABKit：

使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1mlDAB工作液，简单易用。

6.1ZLI-9030DAB：

6mgDAB溶于10mlTBS（0.05MpH7.6），再加入0.1ml浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

7、AEC：

4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml3%H2O2，过滤掉沉淀物。

8、RIPA：

1×PBS，1%NP40，0.5sodiumdeoxycholate，0.1%SDS（此液体可长期保存）。

以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。

8.110mg/mlPMSF异丙醇溶液（用量为10l/ml）

8.2Aprotinin（Sigma产品，用量为30l/ml）

8.31000mMsodiumorthovanadate冷冻液

（用量为10l/ml）

9、BlottoA：

常规使用1×PBS，5%milk，0.05%Tween20。

10、BlottoB：

与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1%milk，0.05%Tween20。

部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。

实验室常用贮存液的配制参数

一、核酸及蛋白质常用数据

化合物分子量λmax（pH7.0）1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值OD280/OD260

ATP507259154000.15

CTP48327190000.97

GTP523253137000.66

UTP484262100000.38

dATP494259152000.15

dCTP46727193000.98

dGTP507253137000.66

dTTP48226796000.71

2．常用核酸的长度与分子量

核酸

核苷酸数

分子量

λDNA

48502（双链环状）

3.0×107

pBR322

4363（双链）

2.8×106

28SrRNA

4800

1.6×106

23SrRNA

3700

1.2×106

18SrRNA

1900

6.1×105

19SrRNA

1700

5.5×105

5SrRNA

120

3.6×104

tRNA（大肠杆菌）

75

2.5×104

3．常用核酸蛋白换算数据

（1）重量换算

1μg=10-6g　　　　　1pg=10-12g

1ng=10-9g　　　　　1fg=10-15g

（2）分光光度换算：

1A260双链DNA=50μg/ml

1A260单链DNA=30μg/ml

1A260单链RNA=40μg/ml

（3）DNA摩尔换算：

1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端

1μgpBR322DNA=0.36pmol

1pmol1000bpDNA=0.66μg

1pmolpBR322=2.8μg

1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿

1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿

1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿

（4）蛋白摩尔换算：

100pmol分子量100，000蛋白质=10μg

100pmol分子量50，000蛋白质=5μg

100pmol分子量10，000蛋白质=1μg

氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿

（5）蛋白质/DNA换算：

1kbDNA=333个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质

10，000MW蛋白质=270bpDNA

30，000MW蛋白质=810bpDNA

50，000MW蛋白质=1.35kb

100，000MW蛋白质=2.7kbDNA

4．常用蛋白质分子量标准参照物

（1）高分子量标准参照

（2）中分子量标准参照

（3）低分子量标准参照

肌球蛋白

分子量

磷酸化酶B

97，400

碳酸酐酶

31，00

肌球蛋白

212