Agilent气质联用仪软件定量方法图示.docx

Agilent气质联用仪软件定量方法图示.docx

《Agilent气质联用仪软件定量方法图示.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Agilent气质联用仪软件定量方法图示.docx（13页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

Agilent气质联用仪软件定量方法图示

实验室练习6：

数据定量分析

在这个实验中,您将建立具有三个浓度级别的校正数据库,并将其保存为方法的一部分。

该方法用于未知物的定量计算。

在这个实验中：

∙获取所需信息以设置校正方法

∙建立一个5个浓度级别的含内标的校正数据库

∙定量一个未知化合物

对以下化合物进行定量：

内标

目标化合物

Tributylphosphate

Acetamide,N-phenyl

phenacetin

caffein

积分

精确定量的重要因素之一是正确积分。

1）通过选择File/LoadDataFile…调用C:

\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\CLWV020.D文件，选择Method/LoadMethod…调用DEFAULT.M方法。

2）选择Chromatogram/SelectIntegrator及RTEIntegrator单击OK。

OK对积分来说只是临时选择。

现在让我们对caffein设定积分参数。

3）选择Chromatogram/ExtractIonChromatograms…完成图1所示的需要输入的项目（注意时间范围）单击OK。

图1

4）现在编辑RTE的缺省积分参数。

选择Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters…完成图2所示的要输入的项目。

须知当欲在最小峰面积（minimumpeakarea）中添入大于100的数之前必须选中AreaCounts选项框。

图2

5）单击OK接受所做的改变。

现在通过选择Chromatogram/Integrate用这些参数做积分。

注意离子194被积分，而离子67没有被积分。

让我们降低最小面积来解决这一问题。

6）选择Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters…完成图3中所示的各项内容。

图3

7）单击Save…和OK输入积分文件名字VOLATILE.P，单击OK。

图4

8）在积分参数框中单击OK返回离子质量色谱。

在Chromatogram/Integrate用降低后的最小峰面积参数做积分。

注意此时离子67和194都被积分了。

现在我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。

9）选择Chromatogram/DrawChromatogram查看当前数据文件的TIC图。

建立校正曲线：

无论SCAN和SIM方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。

用提取离子定量比用TIC精度更高。

TIC则用于开始设置校正参数时确定保留时间。

10）选择Calibrate/SetUpQuantitation...。

11）QuantitationDatabaseGlobals对话框会显示出来。

完成图5中所需填入的内容。

图5

注意标有NOTICE处用了RTE积分参数文件。

12）完成后单击OK。

EditCompounds框（图6）会显示出来：

图6

13）单击InsertAbove，图7会显示出来：

图7

注意:

必须首先输入内标。

所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。

14）将7-13分钟范围内的色谱图放大在窗口中。

对准窗口2中10.7分钟处双击鼠标右键。

在屏幕上会出现什么信息？

_______________________________________________________________

注意保留时间（箭头在X轴的位置）被填写在QuantSetup窗口。

同时所指定保留时间的质谱显示在窗口1。

15）输入化合物名称。

填入化合物名称。

第二个化合物是Tributylphosphate大约在10.7分钟。

注意如果使用氘代内标时区分定量，化合物是靠信号而不是保留时间，因为内标和要定量的化合物共流出，因此峰会重叠。

ISTD选项被选中。

16）将箭头移到窗口将箭头放在M/Z93上同时击鼠标左右键。

会发生什么？

_______________________________________________________________

17）用同样方法输入一个或几个特征离子。

对于Tributylphosphate，特征离子是135。

18）全部输入之后，在QuantSetup窗口底部击Save键。

这就完成了需要在定量数据库中添加单个化合物的任务。

19）重复以上步骤，把表1中每个化合物输入定量数据库。

（注意Tributylphosphate已经输入了。

）

化合物名称

内标

近似的保留时间

目标离子

特征离子

Tributylphosphate

Yes

10.7

99

155、211

Acetamide,N-phenyl

8.5

93

135

phenacetin

11.1

108

109、179、137

caffein

12.2

194

109、67

表1

20）最后一个化合物输入并保存之后,在定量设置栏目击Exit。

EditCompounds画面（图9）再次显现。

注意此时化合物的列出顺序。

定量化合物永远在内标之后（不管保留时间！

）有4个化合物列于表中。

如有遗漏，点击遗漏的化合物，然后单击InsertAbove...。

当定量设置栏再次出现时输入化合物名字，保留时间，目标/特征离子。

然后单击Save并单击Exit。

一旦4个化合物全部输入，单击Exit退出编辑化合物对话框（图9）。

21）系统提示目前的文件尚未定量。

单击Yes对文件定量。

我们已经添加了化合物信息，现在要添加校正信息。

22）UpdateCalibration对话框（图8）如下：

图8

23）在UpdateCalibration选项框中，为该校正级别输入一个标识。

缺省值是数字（如“1”）但也可以输字母（如“Low”）。

为该级别输入化合物浓度（20）注意已经填入了ISTD浓度。

我们在哪里输入过这个量？

_______________________________________________________________

24）单击DoUpdate键。

定量更新程序会提取指定离子并对其进行RTE积分。

该信息存放在定量数据库中。

EditCompounds画面（图9）显示出来。

图9

25）单击View键查看三页定量信息。

在第3页对错误的值进行编辑。

26）Next键用来查看第二个化合物的条目。

单击OK离开该画面，而单击Exit退出EditCompounds面板回到数据分析。

现在我们拥有了含一个级别的校正数据库。

下一步是为校正数据库添加第二个浓度级别。

建立多－浓度级别校正数据库

27）调用数据文件C:

\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\CLWV050.D.。

28）选择Calibrate/Update…/UpdateOneLevel/OK系统将提示该数据文件未定量，单击Yes进行定量。

29）下一步进入UpdateCalibration对话框。

将浓度改为50，将校正级别改为2，单击DoUpdate…自动为数据库插入新浓度级别。

30）Exit退出editcompounds界面。

从这一标准校正曲线更换保留时间和离子比例，会改写原来用光标输入的和这一标准的微小差别。

31）选择Calibrate/Update…/UpdateOneLevel/OK填写图10所示各项内容，单击DoUpdate。

图10

32）按照1）至5）步骤输入下列浓度级别。

不必再次输入保留时间和离子比例。

数据文件和化合物浓度列于表2中：

数据文件

浓度

浓度级别号

CLWV100.D

100ppm

3

CLWV150.D

150ppm

4

CLWV200.D

200ppm

5

表2

内标浓度与前两个标样相同（50ppm）。

33）5个浓度级别输入之后，单击View以便检查浓度是否正确。

34）选择第一个化合物，单击Plot看它的标准曲线，包括其校正因子和相关系数。

出现什么信息？

_______________________________________________________________

由于画内标化合物的曲线是无意义的，您不可能画出内标化合物的校正曲线，为什么内标化合物曲线是无意义的？

_______________________________________________________________

35）在Compound窗口单击Next（如必要击OK保存更改）画面，化合物#2以校验该化合物的第二个浓度级别的数据。

在Plot窗口单击Print打印（这是获得方法文件的较好途径）。

36）打印之后击OK，改变线性拟合方式取得最佳平均响应因子（AvgofResponseFactors），再做曲线。

反复用LinearRegr，Force（0,0）拟合包括原点在内的各点，加以比较。

重新设置拟合方式AvgofResponseFactors。

对本次分析何种拟合方式更可靠，为什么？

_______________________________________________________________

37）查看过三页化合物信息之后，选OK然后Exit退出该窗口。

该校正数据库当前存储在计算机RAM中，所以下一步是使其永久保存于硬盘中。

校正数据库作为方法的一部分保存。

38）选择Method/SaveMethod...。

39）为新方法命名为CLASSVOA.M。

建立了新方法，原来的方法（DEFAULT.M）未改变。

我们常用现有的方法作为模板建立新方法。

方法自动存储在缺省地址C:

\MSDCHEM\n\METHODS这里n是仪器编号。

使用自动定量设置

AutoQuantSetup（自动定量设置）提供了一种给定量数据库创建化合物列表的半自动方法。

下列指南可引导您使用AutoQuantSetup（自动定量设置）的全部步骤。

该指南使用化学工作站随附的演示文件。

在该指南中使用default.m和evaldemo.d之前，请先复制一份。

1.在DataAnalysis（数据分析）中，加载示范方法C:

\MSDCHEM\1\METHODS\DEFAULT.M和示范数据文件C:

\MSDCHEM\1\DATA\EVALDEMO.D。

2.在Spectrum/SelectLibrary（谱图/选择谱库）下选择DEMO.L。

3.选择Calibrate/AutoQuantSetu（校准/自动定量设置）。

4.出现QuantitationDatabaseGlobals（全局定量数据库）对话框时，进行如下更改：

校准标题—键入AutoQuantTutorial

使用RTEINT—选中该对话框来使用RTE积分器（不选则使用化学工作站积分器）。

单击OK（确定）。

5.出现Dodecane（十二烷）的ChooseCompoundName（选择化合物名称）对话框时，单击Skip（跳过）。

为了示范，您可以先跳过这个化合物，以后再把它添加到数据库中。

6.接下来出现Biphenyl（联苯）。

保持缺省名称，单击Add（添加）。

7.接着出现4-Chlorobiphenyl（4-氯联苯）。

保持缺省名称，单击Add（添加）。

8.接着出现Methylpalmitate（十六酸甲酯）。

要将它指定为内标，单击ISTD（内标）。

单击ISTD同时把化合物添加到数据库中。

9.当软件提示Quantitatenow?

（现在定量？

）时，单击Yes（是）。

文件量化后，出现UpdateCalibration（更新校准）对话框。

10.选择AddNewLevel（添加新校准级），输入如下内容：

CalibLevelID=50

CmpdConc=50

ISTDConc=50

然后单击DoUpdate（执行更新）。

11.显示EditCompounds（编辑化合物）对话框时，注意十六酸甲酯处于列表顶端的正确位置，在其名称旁边有一个星号说明它是内标。

12.单击Exit（退出）关闭对话框，或单击View（查看）检查第1页、第2页和第3页中的各化合物参数。

13.要了解怎样向定量数据库中插入化合物，请选择AutoQuantSetup（自动定量设置）。

14.选择InsertCompoundsinDatabase（在数据库中插入化合物），单击OK（确定）。

15.出现QuantitationDatabaseGlobals（全局定量数据库）对话框时，不要更改参数。

单击OK（确定）。

软件会再次开始鉴定峰。

出现ChooseCompoundName（选择化合物名称）对话框。

16.对话框中出现Dodecan（十二烷）时，保持缺省名称并单击Add（添加）。

出现EditCompound（编辑化合物）对话框。

17.选中Biphenyl（联苯），选择一个插入点并单击InsertAbove（插入上文）。

18.ChooseCompoundNames（选择化合物名称）对话框中留存的3个化合物已经存在定量数据库中，因此单击Skip（跳过）。

跳过这3个化合物后，软件将问您是否StopNow?

（现在停止?

）单击Yes（是）。

这一特点在对大量化合物进行数据库操作时非常有用。

19.系统问您是否希望定量数据库时，单击Yes（是）。

20.出现UpdateCalibration（更新校准）对话框时，选择Recalibrate（重新校准）并对Responses（响应）和RetentionTimes（保留时间）字段选择替换。

单击DoUpdate（进行更新）。

21.出现EditCompounds（编辑化合物）对话框时，单击View（查看）并检查数据库中4个化合物中每个化合物的第3页。

注意您加入的Dodecane（十二烷）没有浓度值。

22.在Concentratio（浓度）字段对校准级50键入50。

单击OK（确定），然后单击Yes（是）保存更改后的数据。

23.单击Exit（退出）。

未知化合物定量

40）调用C:

\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\DLWV002.D.选择Quantitate/Calculate。

哪个窗口用来显示报告结果？

41）在Quantitate菜单条目下选GenerateReport…同时指定格式为Detailed，输出终端为Printer。

42）单击OK。

该报告与摘要报告有何不同？

_______________________________________________________________

当校正数据库中有大量被测物，而仅仅对其中之一感兴趣时使用详细报告（单一化合物）。

43）选择Quantitate/ReportOptions…填写下图所需要的内容，击OK。

图11

44）在Quantitate菜单下选GenerateReport...同时指定格式为Detailed，输出终端为Printer。

45）单击OK。

该报告与以前的详细报告有何不同？

_______________________________________________________________

46）选择Quantitate/ReportOptions…按图12完成面板，单击OK。

图12

47）在Quantitate菜单下选GenerateReport...同时指定格式为Detailed，输出终端为Printer。

48）单击OK。

该报告与以前的详细报告有何不同？