负荷尿核黄素测定实验报告.docx
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负荷尿核黄素测定实验报告
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负荷尿核黄素测定实验报告
篇一:
实验六负荷尿中核黄素的测定
实验六负荷尿中核黄素的测定
(荧光法)
(一)目的意义
尿中核黄素排出量测定是评价人体核黄素营养状况的一种方法,包括负荷试验和核黄素肌酐比值测定。
(二)原理
含有核黄素的溶液在紫外线下发黄绿色荧光,在稀溶液中荧光强度与核黄素浓度成正比。
核黄素又可被低亚硫酸钠还原而失去荧光,故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。
(三)仪器与试剂
1.荧光光度计
2.酸性水取浓硫酸0.3ml,加蒸馏水至200ml。
3.核黄素标准储备液精密称取25mg核黄素于1000ml容量瓶中,用酸性水稀释至刻度,移至棕色瓶内,冷藏备用。
4.核黄素标准应用液吸取上液4ml,用酸性水稀释至100ml。
临用时配制。
5.低亚硫酸钠(na2s2o4)
(四)操作步骤
1.样品取尿样lml加酸性水19ml于一具塞试管内,混匀,在激发波长420nm和发射波长530nm处测定荧光强度。
记下读数(A)后,取10mg低亚硫酸钠直接加人比色杯内,摇匀,立即测定荧光强度并读数(b)。
2.内标准取尿样1.0ml加核黄素标准应用液1.5ml,加酸性水17.5ml,混匀,在同样情况下测定荧光强度,记下读数(c),取10mg低亚硫酸钠直接加入比色杯内,摇匀,立即测定荧光强度并读数(D)。
(五)结果计算
(六)说明
1.所有操作需在暗室内进行。
2.作内标准的目的是除去尿样中可能存在的有荧光的物质。
3.使用荧光光度计是需用荧光红钠校正。
荧光红钠溶液的配制:
溶解25.0mg荧光红钠(sodiumfluorescein)于少量水中,搅拌使其溶解后加水至250ml,此液为储备液。
取储备液0.25ml加水稀释成250ml,为工作液。
校正步骤:
现选择所需激发波长和发射波长,校正仪器零点,然后以荧光红钠工作液校正荧光计使指针在某一刻度,在测定样品的荧光强度。
4.如遇尿样混浊,难以直接读数,可将尿液按食品中核黄素测定方法稀释后,过硅镁层析柱再进行测定。
篇二:
实验三尿药法测定核黄素片剂消除速度常数
实验三尿药法测定核黄素片剂消除速度常数
一、实验目的
1、熟悉尿药法在生物药剂实验中的应用。
2、掌握尿药法在计算消除速度常数等动力参数的方法。
二、实验原理
药物在体内的吸收、分布、代谢、等过程中既有区别,又有联系,观察一个方面的变化,常可间接地认识另一方面的情况,所以药物在体内的速度过程变化规律,既可用血药法来估算,也可用尿药法来估算。
在多数情况下,尿药浓度高于血药浓度,定量分析精密度好,测定方法较易建立,而且取样方便,受试者可免受多次抽血的痛苦。
因此,在体内药物大部分以原形从尿中排除条件下,通常可用尿药法估算消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。
尿中原形药物的瞬时排泄速度,可用下列微分式表示:
dxudt
?
Kex
(1)
Ke为表现一级排泄速度常数,xu为t时间尿中原形药物的累计排泄量,x为t时间体内存有的药。
在静脉给药时,体内药量经时过程可由下式表示:
x?
xo
(2)
xo为给药剂量,K为表现一级消除速度常数。
将
(2)式x值代入
(1)式后得:
dxudt
?
Kexoe
?
kt
e
?
kt
(3)
两边去代数得:
log
dxudt
?
logKex
o
?
Kt2.303
(4)
由(4)式可见,原形药物排泄速度的对数对时间作图为一直线,其斜率为
?
K2.303
。
与血药浓度的对数对时间作图所求的斜率相同。
(4)式适用于静脉给药后求算消除速度常数。
若口服给药,则体内药量经时过程可由下式表示:
x?
KaxoFKa?
K
(e
?
Kt
?
e
?
Kat
)
(5)
Ka为表现一级吸收速度常数。
尿中原形药物的瞬时排泄速度可用(5)式代入
(1)式得:
dxudt
?
KeKaFxoKa?
K
(e
?
Kt
?
e
?
Kat
)
(6)
当Ka>K,t充分大时,则e?
Kat?
0,(5)式简化为:
dxudt
?
KeKaFxoKa?
k
e
?
Kt
(7)
两边取代数得:
log(8)
由上述关系式可见,若以logxu/dt对t作图,可得到一条二项指数曲线,从其后段直线的斜率可求出一级消除速度常数K.。
由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变化率是不可能用实验方法求算的,通过实验只可求出平均排泄速度,设在一段时间间隔△t内药物的排泄量为△xu,则平均排泄速度为
?
xu?
t
dxudt
?
log
KeKaFxoKa?
K
?
Kt2.303
,这样(4)或(8)式可改写如下:
?
xu?
t
㏒(9)
㏒
=㏒K
e
x
-
K2.303
t中
?
xu?
t
=㏒
KeKaxoFKa-K
—
k2.303
t中
(10)
由于实验中采取平均排泄速度代替瞬时排泄速度,求得的消除速度常数K会出现一些误差。
但若以恒定的时间间隔集尿,其时间间隔补大于一个药物的半衰期时,则仅发生较小偏差。
三、实验内容与操作
(—)服药及尿样收集1、临服药前排空小便。
2、早餐后立即服用核黄素三片(5mg/片),用温水250ml吞服不咀碎,记录服
药时间。
3、按服下药片后的第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10小时收集
尿液,记录尿液重量(按密度为1折算药液体积),然后,将尿液倒入盛有0.1mL冰醋酸的刻度试管内至10mL,摇匀,于阴凉避光处保存。
注意点:
1、每次收集尿液后饮150~200mL左右水以维持尿量。
2、大便时收集小便,切勿损失。
3、试验期间(包括服药前一天)控制食谱,不能吃含有核黄素的食物,如:
蛋
类、牛奶、麦乳精、奶糖等。
并不得服用含有b族维生素的药物。
宜在服药前一天中午开始只吃馒头、白饭、白粥,这些食物中的维生素含量较低。
(二)尿液中核黄素含量的测定1、原理:
核黄素的异咯嗪环上具有活泼的双键,能接受和放出氢原子,在保险粉(连
二亚硫酸钠)的作用下,能还原为无色双氢核黄素,利用这一特性,可以由加入保险粉前后二次测得的吸收度(核黄素在波长444nm处有吸收)的差值,来计算尿液中核黄素的含量。
2、方法
(1)标准曲线的制备
精密称取105℃干燥2小时的核黄素对照品25mg于250mL量瓶中,加0.02m0l/L醋酸液稀释250mL,置水浴加热溶解后,放冷至室温,用0.02mol/L醋酸液稀释至刻度,摇匀,即得,每1mL中含核黄素100μg,置凉暗处保存。
精密吸取标准溶液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0mL分别置于10mL量瓶中用酸化蒸馏水(每100mL蒸馏水中含1mL冰醋酸)稀释至刻度,摇匀。
以酸化蒸馏水作空白,在444nm波长处测定吸收度,然后,在每管中各加保险粉约3mg摇匀。
在一分钟内再次测定吸收度。
两次测定值之差,即为核黄素的吸收度,以此值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。
(2)尿样中核黄素含量测定
取尿液置于盛有0.1mL冰醋酸的刻度试管内至10mL,摇匀,按照标准曲线制
备项下的方法,从“以酸化蒸馏水作空白”起,依法测定吸收度,以两次测定值之差,从标准曲线上计算出尿液中核黄素的含量。
以上操作步骤,均须注意避光。
四、实验结果与讨论
原始记录
服药后尿液收集与测定数据填在表1、2、3、4中。
表1尿液的原始记录
试管号集尿时(hr)集尿时间间隔(hr尿量16
表2尿液测定记录
试管号A1A2
A2-A1c(ug/ml)△xu(mg)△xuo-△
xu(mg)
12345678
3
△xu㏒(hr)(△t)(t中△xu/△t)
2、绘制尿药排泄速率二项指数曲线。
3、从二项指数曲线后段直线部分计算斜率,从而计算消除速度常数K及生物半衰期。
4、计算总排泄量(mg),排泄百分率。
五、思考题
1、以尿液数据法计算动力学参数和生物利用度与血药浓度法相比,有何优缺点?
2、尿药数据法计算生物利用度误差的主要来源有那些?
?
xu?
t
20XX年总结
1、在实验过程中硫代硫酸钠称量的量比较小,因此将其配制成浓溶液,每
次加入10μl,或者20μl,这样取样比较方便。
但据王磊讲,配成的浓溶液不稳定,只能在30分钟内使用。
这一点明年再详细考查。
2、下次这个实验要用真正的尿液。
因此要考虑取样的问题。
初步准备使用
重量法标记尿液的体积,这样速度快,并且比较准确。
3、下次这个实验可以提前开始,这样学生就不会拥挤在一起使用uV分光
光度计了。
篇三:
作业4尿中核黄素的测定(荧光法)
运动营养学实验报告
姓名:
________学号:
_____日期:
________
备注:
受试者姓名:
性别:
尿液是否稀释:
否
课后思考题
1.维生素b2的测试过程中有哪些注意事项?
为什么?
答:
1.由于核黄素余光分解,整个操作应在避光实验室中进行。
2.做内标准的目的是去除尿中可能存在的有荧光的物质。
3.使用荧光剂时应用荧光红纳校正。
荧光红纳溶液的配制:
溶解25.0mg荧光红钠于少量水中,搅拌使其溶解后加水至250ml,此为储备液。
取0.25ml加水稀释成250ml,此为工作液。
校正步骤:
先选择所需激发波长和发射波长,校正仪器零点,然后用荧光红钠工作也校正荧光计,使指针在某一刻度,再测定样品的荧光强度。
2.营养和运动对机体维生素b2的影响都有哪些?
答:
机体对维生素b2的需求似乎同能量的消耗或肌肉活动有关。
维生素b2缺乏主要发生在素食主义者身上。
如果膳食里未含奶类食品或其他动物脂肪的话,那么机体就有可能缺少维生素b2。
维生素b2与机体的有氧代谢能力关系密切。
运动会导致机体对维生素b2的需求量增加,尤其是生长发育期的儿童少年、控体重、减体重以及素食或不吃动物蛋白的运动者,更要注意的是维生素b2的营养状况。
核黄素主要存在于动物内脏中(如肝、肾、心等),牛奶及蛋类含核黄素也较多,坚果类食品(如核桃、栗子、松子、花生、瓜子等)含量也不错。
若缺乏维生素b2,可适量补充以上食物。
3.为何加入低亚硫酸钠?
答:
核黄素可被低亚硫酸钠还原而失去荧光,故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。
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