实验室常规试剂配制.docx

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实验室常规试剂配制

实验室常用试剂、缓冲液的配制

1MTris-HCI（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度1MTris・HCI

配制量1L

配制方法1•称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4•将溶液定容至1L。

5.咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温

度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5MTris-HCI（pH8.8）

组份浓度1.5MTris-HCI

配制量1L

配制方法1•称量181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8o

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压火菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化

差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10XTEBuffer（pH7.4,7.6,8.0）

组份浓度100mMTris・HCI,10mMEDTA

配制量1L

配制方法1•量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，均匀混合

3.将溶液定容至1L后，高温高压火菌。

4.室温保存。

组份浓度配制量配制方法

PBSBuffer组

份浓度137

3M醋酸钠（pH5.2）

1.N.1OAC・3H.OH于100-200m：

疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵

2、力口入冰酯敌讷帑pH值至*4

3加去离子庆粕増液證容至20ml.

mMNaCI,2.7

mMKCI,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2-向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加浓盐酸将pH值调节至

7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L

4.咼温咼压火菌后，室温保存。

注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCI2和0.5mMMgCI2。

10M醋酸鞍

组份浓度10M醋酸钱

配制量100ml

配制方法1•称量77.1g醋酸鞍置于100〜200ml烧杯中，加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mlo

3.使用0.22mm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

注意：

醋酸鞍受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCI平衡苯酚

配制方法

1•使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸懈便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160C对

其进行重蒸锢除去诸如醍等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和

DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯

酚进行分子生物学实验。

2.操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作

均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

1液化苯酚应贮存于・20C,此时的苯酚呈结晶状态。

从冰柜中取岀的苯酚首先在室温下

放置使其达到室温，然后在68C水浴中使苯酚充分融解。

2加入疑基W（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完

全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

3加入等体积的1MTris-HCI（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层

后，除去上层水相。

4重复操作步骤③。

5加入等体积的0.1MTris-HCI（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分

层后，除去上层水相。

6重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

7使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

8将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）

1•说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25:

24:

1）。

氯仿可使蛋白

质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配制方法：

将Tris-HCI平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24:

1）混合均匀后，移入棕色玻

璃瓶中4C保存。

10%（W/V）SDS

2NNaOH

组份浓度2NNaOH

配制量100ml

配制方法

有可能使玻

1•量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中（NaOF溶解过程中大量放热，璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100ml。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5NHCI

组份浓度2.5NHCI

配制量100ml

配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

5MNaCI

组份浓度5MNaCI

配制量1L

配制方法1•称取292.2gNaCI置于1L烧杯中，加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.咼温咼压火菌后，4弋保存。

20%（W/V）Glucose

组份浓度20%（W/V）Glucose

配制量100ml

配制方法

1.称取20gGlucose置于100〜200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水后，搅拌溶解

2.加去离子水将溶液定容至100ml。

3.咼温咼压火菌后，4C保存。

Solution1（质粒提取用）

组份浓度25mMTris-HCI（pH8.0）,10mMEDTA,50mMGlucose配制量1L

配制方法1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.咼温咼压火菌后，4C保存。

3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA（20mg/ml）。

Solution〔I（质粒提取用）

组份浓度

onnMonw1OA/\A//\/>QCU

配制量

ml

配制方法

1坦取卜列涵亂置干500ml烧杯札

10%SDS

50mF

Solutionlll（质粒提取

用）

2NNaOH

50ml

组份浓度

氏挪火岡水定容至500ml,充分混匀.

3MKOAc,5MCHCOOH

配制量

3•富31保存“此落液保存时聞最好不嬰超过一个

500ml

配制方法

月円注蕙：

SDS易产生警剋，不褻翩烈搅样.

1•称量下列试剂，置于

500ml烧杯中。

2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至

500ml。

0.5MEDTA（pH8.0）

组份浓度0.5MEDTA

配制量1L

配制方法1•称取186.1gNa2EDTA-2H2O»置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值至8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后5高温高压灭菌°

6.室温保存。

1MDTT

组份浓度1MDTT

配制量20ml

配制方法1•称取3.09gDTT，加入到50ml塑料离心管内。

2.加20ml的0.01MNaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22mm滤膜过滤除菌。

3.适量分成小份后一20C保存。

10mMATP

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1•称取121mgNa2ATP3H2O加入到50ml塑料离心管内。

2.力口20ml的25mMTris-HCI（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后一20C保存。

组份浓度10mMATP

配制量20ml

配制方法1•称取121mgNa2ATP3H2O加入到50ml塑料离心管内。

2•力口20ml的25mMTris-HCI（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份后，・20C保存。

蛋白质电泳相尖试剂、缓冲液的配制方法

30%（W/V）Acrylamide

组份浓度30%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L，用0.45mn滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4C保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%（W/V）Acrylamide

组份浓度40%（W/V）Acrylamide

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2-向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L,用0.45mm滤膜滤去杂质。

4.于棕色瓶中4C保存。

注意：

丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%（W/V）过硫酸鞍

组份浓度W:

沪煮棒■

配制量i匚卜T

配制方法・1-1LI.

U.2.加入to刊的去离孑水石攬拌瘩壽

5XTris-_讦丄一

G、yc“e-——*•~「「「.「亠

Buffer（S

DS-PAGE电泳缓冲液）

组份浓度0.125MTris,1.25MGIycine,0.5%（W/V）SDS

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水‘搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。

5XSDS-PAGELoadingBuffer

组份浓度

配制量

250rnM

10%（W.V）

TrisAHCI（pH68>

SDS

5ml

配制方法

0,5%（WV）

BPB

1•量取下列试剂'置于10ml塑料

离心管

50%（W）

甘油

中O

5%（W.V）

乙谓（2・ME）

2加去离子水溶解后定容至5ml

3.小份（500ml/份）分装后，于室温保存。

4.使用前将25ml的2-ME加到每小份中＜

5.加入2-ME的LoadingBuffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染液

组份浓度0.1%（W/V）考马斯亮蓝R-250,25%（V/V）异丙醇,10%（V/V）冰醋酸

配制量1L

配制方法1•称取1g考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。

2.量取250ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

3.加入100ml的冰醋酸，搅拌均匀。

4.加入650ml的去离子水，搅拌均匀。

5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脫色液

组份浓度10%（V/V）醋酸,5%（V/V）乙醇配制量1L

配制方法1•量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2.充分混合后使用。

凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度50%（V/V）甲醇,10%（V/V）醋酸配制量1L

配制方法1•量取下列溶液，置于1L烧杯中。

2•均匀混合后室温保存。

凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度50%（V/V）甲醐10%（V/V）戊二醛

配制量100ml

色液（SDS-PAGE银氨

0.4%（W/V）AgN（3,1%（V/V）

NH31-20,0.04%（WA/）NaOH

100ml

，此时应补加浓氨水，

配制方法1、蚩取下列试轧加入1007饥EI的试剂帑中。

凝胶染甲醉50肌

染色用）戊二醛10ml

组份浓度dl-LO40ml

浓2闻測蠢芦泾劈注岳帝，

配制量

配制方法1•量取下列试剂，加入100〜200ml的试剂瓶中

2.均匀混合。

该溶液应为无色透明状。

如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状直至透明

3.本染色液应现用现配，不宜保存。

显影液（SDS-PAGE银氨染色用）

组份浓度0.005%（W/V柠檬酸,0.02%（V/V）甲醛

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L试剂瓶中

2•加入1L去离子水后，摇动混合溶解。

3.室温保存。

核酸电泳相尖试剂、缓冲液的配制方法

50XTAEBuffer（pH8.5）

组份浓度2MTris■醋酸JOOmMEDTA

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3•加入57.1ml的醋酸，充分搅拌

4.加去离子水将溶液定容至1

10XTBEBuffer（pH8.3）

组份浓度用〕T耐千宀裁檢一.命FW

配制量・

配制方法

Tris108g

NazEDTA-7.44g

醐聲559

2尙烧杯中加入S800別的去誇子水”充分攪拌溶解

3■加去离子水将落酒定容至1辰室温保存

10WOPSBuffer

组份浓度200mMMOPS,20mMNaOAc,10mMEDTA

配制量1L

配制方法

1•称量41.8gMOPS置于1L烧杯中。

2.加约700mlDEPC处理水，搅拌溶解。

3.使用2NNaOH调节pH值至7.0。

4・再向溶液中加入下列试剂。

5.用DEPC处理水将溶液定容至1L。

6.用0.45um滤膜过滤除去杂质。

7・室温避光保存。

注：

溶液见光或高温灭菌后会变黄。

变黄时也可使用，但变黑时不要使用

漠乙锭（10mg/ml）

组份浓度10mg/ml漠乙锭

配制量100ml

配制方法

1.称量1g；臭乙锭，加入到100ml容器中。

2.加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解澳乙锭。

3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。

4.漠乙锭的工作浓度为0.5lTlg/ml。

注意：

澳乙锭是一种致癌物质，必须小心操作

Agarose凝胶

1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是0.5XTBE或1XTAE）。

2.根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。

3.加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。

注：

用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。

4.在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。

加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分均匀熔化。

此操作重复

数次，直至琼脂糖完全熔化。

必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时

停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。

熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。

5.使溶液冷却至60C左右，如

需要可在此时加入漠乙锭溶液（终浓度0.5mg/ml），并充分混匀。

注：

澳乙锭是

种致癌物质。

使用含有漠乙锭的溶液时，请戴好手套。

6.

3~5mm之间

将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。

凝胶厚度一般在

7.在室温下使胶凝固（大约30分钟~1小时），然后放置于电泳槽中进行电泳

注：

凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4C下保存，一般可保存2〜5天

琼脂糖凝胶浓度与线形

DNA的最佳分辨范围

6XLoadingBuffer（DNA电泳用）

组份浓度

配制量

配制方法

30mMEDTA

36%Glycerol

005%（W;V）XyleneCyanolFF

0.05%（WV）BfcmophenolBlue

10XLoadingBuffer（RNA电泳用）

3.加入5ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。

4.用DEPC处理水定容至10ml后，室温保存。

核酸、蛋白质杂交用相矢试剂、缓冲液的配制方法

20XSSC

组份浓度3.0MNaCI,0.3M柠檬酸钠

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2•向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解

3•滴加14NHCI,调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1L

4.咼温咼压火菌后，室温保存。

20XSSPEBuffer

组份浓度3.0MNaCI,0.2MNaH2PQ,0.02MEDTA

配制量1L

配制方法

1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加NaOH调节pH值至7.4（约6.5ml的10NNaOH

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5・咼温咼压火菌后，室温保存。

50xDenhardt's溶液

组份浓度

配制量500ml

配制方法

1•称量下列试剂，置于500ml烧杯中。

2.加去离子水约400ml,充分搅拌溶解

3.加去离子水将溶液定容至500ml。

4.用0.45mm滤膜过滤后，分装成每份25ml。

5.-20c保存。

0.5M磷酸盐Buffer

组份浓度0.5MNazHPO

配制量1L

配制方法

1•称量134gNa2HPO・7H2O置于1L烧杯中。

2.加入约800ml的去离子水充分搅拌溶解。

3.加入85%勺H3PQ（浓磷酸）调节溶液pH值至7.2。

4.加去离子水定容至1L。

5・咼温咼压火菌后，室温保存。

组份浓度10mg/mlSalmonDNA

配制量约100ml

配制方法

1.称取鮭鱼精DNA2g置于500ml烧杯中，加入约200ml的TEBuffer。

2.用磁力搅拌器室温搅拌2〜4小时，溶解后加入4ml的5MNaCI，使其终浓度为0.1M

3.用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。

4.回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20次，以切断DNA

5.加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。

6.离心回收DNA后，溶解于100ml的去离子水中，测定溶液的OC260值。

7.计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10mg/mh

8.煮沸10分钟后，分装成小份（1ml/份）o.20C保存。

9.使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

组份浓度I匸3J讪\U.CB

配制方法；Gi,w.

组份浓度

配制量约100ml

配制方法1•称量下列试剂，置于200ml烧杯中。

组份浓度

配制量100ml

配制方法1•称量下列试剂，置于200ml烧杯中。

2.充分混匀后，使用0.45um滤膜滤去杂质后使用。

组份浓度39mMGlycine,48mMTris,0.037%（W/V）SDS,20%（V/V）甲醇

配制量1L

配制方法1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3•加去离子水将溶液定容至800ml后，加入200ml的甲醇。

4.室温保存。

组份浓度20mMTris-HCI,150mMNaCI,0.05%（V/V）Tween20

配制量1L

配制方法

1•称量下列试剂，置于1L烧杯中。

2.向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入0.5mlTween20后充分混匀。

4•加去离子水将溶液定容至1L后，4C保存。

组份浓度5%（W/V）脱脂奶粉/TBSTBuffer

配制量100ml

配制方法

1.称量5g脱脂奶粉加入到100ml的TBSTBuffer中，充分搅拌溶解。

1•4C保存待用（本封闭液应该现配现用）。

实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin（100mg/ml）

组份浓度100mg/mlAmpicillin

配制量50ml

配制方法

1.称量5gAmpicillin置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。

3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mm）后-20C保存。

IPTG（24mg/ml）

组份浓度24mg/mllPTG

配制量50ml

配制方法

1.称量1.2gIPTG置于50ml离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50ml。

3.用0.22mm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装（ImlW）后-20C保存。

X-Gal（20mg/ml）

组份浓度：

汕厂利WQ・胡

配制量汽旳

配制方法’仆11，J--.-VIT:

2加入40mlDWr（二甲墓甲醯就•充分混合落解后，定容S50mi.

3小份分装（1mW）后’・20C避光保存。

组份浓度〔搐tw/v）Trypione,0.5ao（W/V）YeastEsdract.1°o（W/V）NaCI

配制量1L

列试剂,烧杯中o

800ml

配制方法Z加入约300ml的去瘟子水・充分搅拌溶解.

1.称取下3.ffijtnSNINaOH（i<|02ml）,谯节齟値壬了心置于1L4•抑去离子水将培琮基定容至1L,

2.加入约5—咼逼咼压火菌后I斗匸保存。

的去离子水'充分搅拌溶解

3.滴加5NNaOH（约0.2ml），调节pH值至7.0

4.加去离子水将培养基定容至1L°

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入ImlAmpicillin（100mg/ml）后均匀混合

7.4C保存。

组份浓度配制量1L

配制方法

1•配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4,0.72MK2HPO4）100ml。

溶解2.31gKH2PO4和12.54gK2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至

100ml，咼温咼压火菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

3.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60C以下时，加入100ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4C保存。

组份浓度

配制量1L

配制方法

组份浓度配制量1L

配制方法

1.配制250mMKCI溶液。

在90ml的去离子水中溶解1.86gKCI后，定容至100ml。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90ml去离子