生物实验会考复习专用.docx
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生物实验会考复习专用.docx
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生物实验会考复习专用
高中生物实验会考复习专用
实验目的:
认识显微镜的结构,初步掌握使用显微镜的方法。
一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法
结构:
光学部分:
目镜、镜筒、物镜、遮光器(有大小光圈)和反光镜(有平面镜和凹面镜)
机械部分:
镜座、倾斜关节、镜臂、载物台(上有通光孔、压片夹)、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。
注:
目镜无旋转螺丝,镜头越长,放大倍数越小;物镜有旋转螺丝,镜头越长,放大倍数越大。
呈像原理:
映入眼球内的是倒立放大的虚像。
(物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度)
放大倍数:
目镜和物镜二者放大倍数的乘积)
注:
显微镜放大倍数是指直径倍数,即长度和宽度,而不是面积。
二、显微镜的使用:
置镜(装镜头)→对光→置片→调焦→观察
1.安放。
显微镜放置在桌前略偏左,距桌子边缘8—10cm处,装好物镜和目镜(目镜5×,物镜10×)
2.对光。
转动转换器,使低倍镜对准通光孔,选取较大光圈对准通光孔。
左眼注视目镜,同时把反光镜转向光源,直至视野光亮均匀适度。
调节视野亮度只可用遮光器和反光镜,光线过强,改用较小光圈或用平面反光镜;光线过弱,改用较大光圈或用凹面反光镜。
选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜(左眼观察)
3.观察。
将切片或装片放在载物台上,标本正对通光孔中心。
转动粗准焦螺旋(顺时针),俯首侧视镜筒慢慢下降,直到物镜接近切片(约0.5cm),左眼观察目镜,(反时针)旋转粗准焦螺旋,使镜筒慢慢上升,看到物像时轻微来回旋转细准焦,直到物像清晰。
(找不到物像时,可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心)。
.观察时两眼都要睁开,便于左眼观察,右眼看着画图。
侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰
4.高倍镜的转换。
找到物像后,把要观察的物像移到视野中央,把低倍镜移走,换上高倍镜,只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰,直到物像清楚为止。
顺序:
移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋
注:
换高倍物镜时只能移动转换器,换镜后,只准调节细准焦和反光镜(或光圈)。
5.装片的制作和移动:
制作:
滴清水→放材料→盖片
移动:
物像在何方,就将载玻片向何处移。
(原因:
物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反)
6.完毕工作。
使用完毕后,取下装片,转动镜头转换器,逆时针旋出物镜,旋进镜头盒;取出目镜,插进镜头盒,盖上。
把显微镜放正。
实验一:
观察DNA、RNA在细胞中的分布(必修一P26)
一.实验目的:
二.实验原理:
三.方法步骤:
操作步骤
注意问题
解释
取口腔上皮细胞制片
载玻片要洁净,滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液
用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞
将载玻片在酒精灯下烘干
防止污迹干扰观察效果
保持细胞原有形态
消毒为防止感染,漱口避免取材失败
固定装片
水解
将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中,用300C水浴保温5min
改变细胞膜的通透性,加速染色剂进入细胞,促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色
冲冼涂片
用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S
洗去残留在外的盐酸
染色
滴2滴吡罗红甲基绿染色剂于载玻片上染色5min
观察
先低倍镜观察,选择染色均匀、色泽浅的区域,移至视野中央,调节清晰后才换用高倍物镜观察
使观察效果最佳
四.现象及结论:
现象
结论
绿色明显集中且接近细胞中央
DNA分布于细胞核中
绿色周围的红色范围较广
RNA广泛分布于细胞质中
实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(必修一P18)
一.实验目的:
二.实验原理:
三.实验材料
四、实验试剂
斐林试剂(包括甲液:
质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液:
质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液)、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂(包括A液:
质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液:
质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水。
五、方法步骤:
(一)可溶性糖的鉴定
操作方法
注意问题
解释
1.制备组织样液。
(去皮、切块、研磨、过滤)
苹果或梨组织液必须临时制备。
因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。
2.取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。
3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。
斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水;
甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu(OH)2生成。
4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色:
浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)
最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。
也可用酒精灯对试管直接加热。
防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;
缩短实验时间。
(二)脂肪的鉴定
操作方法
注意问题
解释
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小时,新花生的浸泡时间可缩短。
因为浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织较软,切下的薄片不易成形。
切片要尽可能薄些,便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,染色1分钟。
染色时间不宜过长。
用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精。
酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。
同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片。
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。
装片不宜久放。
时间一长,油滴会溶解在乙醇中。
三、蛋白质的鉴定
操作方法
注意问题
解释
制备组织样液。
(浸泡、去皮研磨、过滤。
)
黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间。
鉴定。
加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀,溶液变紫色。
A液和B液也要分开配制,储存。
鉴定时先加A液后加B液。
CuSO4溶液不能多加。
先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。
A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀,而失效。
否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。
可用蛋清代替豆浆。
蛋清要先稀释。
如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净。
附:
淀粉的检测和观察
用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化。
碘液不要滴太多
以免影响颜色观察
实验三用显微镜观察多种多样的细胞(必修一P7)
一.实验目的:
二.实验原理:
三.方法步骤:
第一步:
转动反光镜使视野明亮
第二步:
在低倍镜下观察清楚后,把要放大观察的物像移至视野中央
第三步:
用转换器转过高倍物镜
第四步:
观察并用细胞准焦螺旋调焦。
实验四用高倍镜观察线粒体和叶绿体(必修一P47)
一.实验目的:
二.实验原理:
叶绿体的辨认依据:
叶绿体是绿色的,呈扁平的椭圆球形或球形。
线粒体辨认依据:
线粒体的形态多样,有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色。
三.实验材料:
四.方法步骤:
步骤
注意问题
分析
1.制片。
用镊子取一片黑藻的小叶,放入载玻片的水滴中,盖上盖玻片。
制片和镜检时,临时装片中的叶片不能放干了,要随时保持有水状态
否则细胞或叶绿体失水收缩,将影响对叶绿体形态和分布的观察。
2.低倍镜下找到叶片细胞
3.高倍镜下观察叶绿体的形态和分布
4.制作人的口腔上皮细胞临时装片
在洁净载玻片中央滴一滴健那绿染液→用牙签取碎屑→盖盖玻片
5.观察线粒体
蓝绿色的是线粒体,细胞质接近无色。
实验五观察植物细胞的质壁分离和复原(必修一P61“探究”)
一、实验目的:
二.实验原理:
二、实验材料:
紫色洋葱鳞片叶的外表皮。
因为液泡呈紫色,易于观察。
也可用水绵代替。
0.3g/ml的蔗糖溶液。
用蔗糖溶液做质壁分离剂对细胞无毒害作用。
三、实验步骤:
步骤
注意问题
分析
1.制作洋葱表皮的临时装片。
在载玻片上滴一滴水,撕取洋葱鳞片叶外表皮放在水滴中展平(也可挑取几条水绵放入水滴中)。
盖上盖玻片。
盖盖玻片应让盖玻片的一侧先触及载玻片,然后轻轻放平。
防止装片产生气泡。
2.观察洋葱(或水绵)细胞
可看到:
液泡大,呈紫色,原生质层紧贴着细胞壁。
(或水绵细胞中有带状叶绿体,原生质层呈绿色,紧贴着细胞壁。
液泡含花青素,所以液泡呈紫色。
先观察正常细胞与后面的“质壁分离”起对照作用。
3.观察质壁分离现象。
从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的蔗糖溶液,在另一侧用吸水纸吸引,重复几次。
镜检。
观察到:
液泡由大变小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离。
原生质层与细胞壁之间充满蔗糖溶液。
重复几次
糖液浓度不能过高
蔗糖溶液浓度大于细胞液浓度,细胞通过渗透作用失水,细胞壁伸缩性小原生质层的伸缩性大,液泡和原生质层不断收缩,所以发生质壁分离。
为了使细胞完全浸入蔗糖溶液中。
否则,细胞严重失水死亡,看不到质壁分离的复原。
4.观察细胞质壁分离的复原现象。
从盖玻片的一侧滴入清水,在另一侧用吸水纸吸引,重复几次。
镜检。
观察到:
液泡由小变大,颜色由深变浅,原生质层恢复原状。
发生质壁分离的装片,不能久置,要马上滴加清水,使其复原。
重复几次。
细胞液的浓度高于外界溶液,细胞通过渗透作用吸水,所以发生质壁分离复原现象。
因为细胞失水过久,也会死亡。
为了使细胞完全浸入清水中。
实验六探究影响酶活性的因素(必修一P78、P83)
实例1:
比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率
一)实验原理:
二)方法步骤:
步骤
注意问题
解释
取4支洁净试管,编号,分别加入2mLH2O2溶液
不让H2O2接触皮肤
H2O2有一定的腐蚀性
将2号试管放在900C左右的水浴中加热,观察气泡冒出情况,与1号对照
向3号、4号试管内分别滴入2滴FeCl3溶液和2滴肝脏研磨液,观察气泡产生情况
不可用同一支滴管
肝脏研磨液必须是新鲜的
肝脏在制成研磨液
由于酶具有高效性,若滴入的FeCl3溶液中混有少量的过氧化氢酶,会影响实验准确性
因为过氧化氢酶是蛋白质,放置过久,可受细菌作用而分解,使肝脏组织中酶分子数减少,活性降低
研磨可破坏肝细胞结构,使细胞内的酶释放出来,增加酶与底物的接触面积
2-3min后,将点燃的卫生香分别放入3号和4号试管内液面的上方,观察复燃情况
放卫生香时,动作要快,不要插到气泡中
现象:
4号试管产生气泡多,冒泡时间短,卫生香猛烈复燃,3号试管产生气泡少,冒泡时间长,卫生香几乎无变化
避免卫生香因潮湿而熄灭
实例2:
温度对酶活性的影响
一)实验目的:
二)实验原理:
三)方法步骤:
操作
注意问题
解释
取3支试管,编上号,然后分别注入2mL可溶性淀粉溶液
另取3支试管,编上号,然后分别注入1mL新鲜淀粉酶溶液
将装有淀粉溶液和酶溶液的试管分成3组,分别放入热水(约600C)、沸水和冰块中,维持各自的温度5min
不能只用不同温度处理淀粉溶液或酶溶液
防止混合时,由于两种溶液的温度不同而使混合后温度发生变化,反应温度不是操作者所要控制的温度,影响实验结果。
分别将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中,摇匀后,维持各自的温度5min
保持各自温度时间不能太短
淀粉酶催化淀粉水解需要一定时间
在3支试管中各滴入1-2滴碘液,摇匀后观察这3支试管中溶液颜色变化并记录
碘液不能滴加太多
防止影响实验现象的观察
用表格的形式显示实验步骤
序号
加入试剂或处理方法
试管
A
B
C
a
b
c
1
可溶性淀粉溶液
2mL
2mL
2mL
/
/
/
新鲜淀粉酶溶液
/
/
/
1mL
1mL
1mL
2
保温5min
600C
1000C
00C
600C
1000C
00C
3
将a液加入到A试管,b液加入到B试管,c液加入到C试管中,摇匀
4
保温5min
600C
1000C
00C
5
滴入碘液,摇匀
2滴
2滴
2滴
6
观察现象并记录
实例3:
PH值对酶活性的影响
操作步骤:
用表格形式显示实验步骤:
(注意操作顺序不能错)
序号
加入试剂或处理方法
试管
1
2
3
1
注入过氧化氢酶溶液
1mL
1mL
1mL
2
注入蒸馏水
1mL
/
/
3
注入氢氧化钠溶液
/
1mL
/
4
注入盐酸
/
/
1mL
5
注入过氧化氢溶液
2mL
2mL
2mL
6
水浴保温5min
7
观察3支试管中气泡的产生速度并记录
8
用点燃但无火焰的卫生香检验
实验七叶绿体色素的提取和分离(必修一P97)
一.实验目的:
二.实验原理:
三、实验材料:
幼嫩、鲜绿的菠菜叶
四、实验步骤:
步骤
注意问题
分析
1.提取色素
5克绿叶剪碎,放入研钵,加SiO2、CaCO3和5mL丙酮(或10mL无水乙醇)迅速、充分研磨。
(若没有无水乙醇,也可用体积分数为95%的乙醇,但要加入适量的无水碳酸钠,除去水分)
加SiO2
加CaCO3
加丙酮
迅速
加SiO2为了研磨得更充分。
加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。
因为叶绿素含镁,可被细胞液中的有机酸产生的氢代替,形成去镁叶绿素,CaCO3可中和液泡破坏释放的有机酸,防止叶绿素被破坏。
叶绿体色素易溶于丙酮等有机溶剂。
减少研磨过程叶绿素的分解,减少有毒性的丙酮挥发。
2.收集滤液
漏斗基部放一单层尼龙布,研磨倒入漏斗内挤压,将滤液收集到小试管中,用棉花塞塞住试管口。
尼龙布起过滤作用。
试管口用棉花塞塞紧是为了防止丙酮挥发。
3.制备滤纸条
将干燥的滤纸,顺着纸纹剪成长10cm,宽1cm的纸条,一端剪去二个角,并在距这一端1cm处划一铅笔线。
干燥
顺着纸纹剪成长条
一端剪去二个角
可吸收更多的滤液。
层析时,色素分离效果好。
可使层析液同时到达滤液细线。
4.划滤液细线
用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线,干后重复三次。
滤液细线越细、越齐越好。
重复三次。
防止色素带之间部分重叠。
增加色素在滤纸上的附着量,实验结果更明显。
5.纸层析法分离色素
将3mL层析液倒入烧杯中,将滤纸条(划线一端朝下)插入层析液中,用培养皿盖盖上烧杯。
层析液不能没及滤纸条。
烧杯要盖培养皿盖。
防止色素溶解在层析液中,
层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发。
6.观察实验结果
由上至下分别为:
胡萝卜素(橙黄色)
叶黄素(黄色)
叶绿素a(蓝绿色)
叶绿素b(黄绿色)
扩散最快是胡萝卜素,扩散最慢是叶绿素b,含量最多的是叶绿素a。
四种色素之所以能被分离,是因为四种色素随层析液在滤纸上的扩散速度不同。
实验八观察细胞的有丝分裂(必修一P115)
一.实验目的:
二.实验原理:
三.实验材料:
洋葱(可用葱、蒜代替)。
因为根尖生长点属于分生组织,细胞分裂能力强,易观察到有丝分裂各个时期的细胞。
四.实验步骤:
步骤
注意问题
分析
一、根尖的培养
实验前3~4天,让洋葱放在广口瓶上,底部接触清水。
根长约5cm时可用。
置于温暖处,常换水。
因为细胞分裂和生长需要水分、适宜的温度和氧气。
二、装片的制作
(解离→漂洗→染色→制片)
1.解离:
上午10时至下午2时,剪取洋葱根尖2~3mm,立即放入盛有质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液(1:
1)的玻璃皿中,室温下解离3~5min。
解离时间要保证,细胞才能分散开来。
解离时间也不宜过长。
目的:
溶解细胞间质,使组织中的细胞相互分离开来。
此时,细胞已被盐酸杀死。
否则,根尖过于酥软,无法取出。
2.漂洗:
待根尖酥软后,用镊子取出,放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10min。
漂洗要充分,可换水1~2次。
目的:
洗去解离液,便于染色。
3.染色:
把洋葱根尖放进盛有质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液的玻璃皿中染色3~5min。
染色时间不宜过长,否则显微镜下一片紫色,无法观察。
龙胆紫等为碱性染料,可使染色体着色。
醋酸洋红溶液也能使染色体着色
4.制片:
用镊子将这段洋葱根尖取出来,放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子尖把洋葱根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片。
然后,用拇指轻轻地压载玻片,使细胞分散开来。
要弄碎根尖,再垂直向下均匀用力压片,不可移动盖玻片,
目的:
使细胞分散,避免细胞重叠,便于观察。
做得成功的装片,标本被压成云雾状。
三、观察
1.低倍镜观察:
把装片放在低倍镜
下,慢慢移动装片,找到分生区细胞。
2.高倍镜观察:
移走低倍镜,换上高倍镜,用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰,仔细观察,找出处于细胞分裂期中期的细胞,再找出前期、后期、末期的细胞。
一定要找到分生区。
在一个视野里,往往不容易找全有丝分裂过程中各个时期的细胞。
如果是这样,可以慢慢地移动装片,从邻近的分生区细胞中寻找。
分生区细胞特点是:
细胞呈正方形,排列紧密,有的细胞正处于分裂期。
实验九观察细胞的减数分裂(必修二P21)
一.实验目的:
二.实验原理:
三.方法步骤:
低倍镜观察
在低倍镜下观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞
高倍镜观察
先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞,再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目
绘图
根据观察结果,尽可能多地绘制减数分裂不同时期的细胞简图
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