分子生物学思考题.docx
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分子生物学思考题
分子生物学考试重点(前四章+第七、八章)
第一章
一、DNA重组技术和基因工程技术(pl2)
答:
DNA重组技术:
将不同的DNA片段,按照人们的设计定向连接起来,于特定的受体细胞中和载体一起复制并得到表达,产生影响受体的新的遗传性状的技术。
基因工程技术:
除DNA重组技术外还包括其他对生物细胞基因组结构进行改造的体系。
关键:
工具酶的发现和应用
前景:
1、合成正常细胞中含量很低的多肽
2、定向改造基因组结构
3、进行基础研究
二、请简述现代分子生物学的研究容。
(第二版前言、P12标题)
答:
分子生物学:
研究核酸等生物大分子的功能、形态、结构特征的重要性和规律性的科学,主要关心的是核酸在细胞生命过程中的作用,包括核酸的复制和保存、基因的表达和调控。
研究容:
D7A重组技术,基因的调控和表达,生物大分子的功能结构一一结构分子生物学,基因组、功能基因组和生物信息学。
第二章
一、核小体(P27)
答:
核小体:
由删、恤、也、乩各两分子组成的八聚体和约200bp的DNA组成。
八聚体在,DNA盘绕在外。
其是DNA压缩的第一步。
若用核酸酶降解核小体,只能得到约146bp的核心颗粒。
(另:
已在核小体的外面)核心颗粒:
除去接头DNA的核小体单体,长度约146bp核小体单体:
八聚体+200bpDNA组成,包括接头DNA
二、DNA的半保留复制(p38)
答:
DNA在复制过程中,戚基间的氢键首先断裂,双螺族解.旋解链,每条单链分别作为模板合成新链。
新生成的DNA分子与原D7A分子的戚基顺序完全一样,这样每个子代分子的DNA—条单链来自模板链,另一条单链来自新合成的链,这种复制方式成为DNA的半保留复制。
三、转座子(p57)
答:
转座子是存在于DM上的可以自主复制和移动的基本单位,其可以分为两大类:
插入序列和复合型转座子,另外还有TnA家族。
四、DNA的一、二、三级结构特征。
(P32〜p37)
答:
1、各级结构的定义:
DNA的一级结构:
指四种核昔酸的连接和排列顺序
DNA的二级结构:
指两条多核昔酸链反向平行盘绕所生成的双螺症结构
DNA的三级结构:
在DMA双螺旋基础上进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。
2、各级结构的特点:
DNA-级结构:
(1)、DNA分子是由两条脱氧核昔酸长链盘绕而形成的。
(2)、脱氧核糖和磷酸交替连接,在外侧形成骨架;戚基排列在侧。
(3)、碱基之间按照互补配对的原则以氢键连接(A=T、C=G)O
DNA二级结构:
(1)、右手螺旅(A-DNA、B-DNA)
1、双螺旋之间有凹槽,小沟1.2(nm)大沟2.2(nm)
2、碱基之间以氢键连接,碱基平面与纵轴垂直,螺旋的轴心穿过氢键的中点
3、碱基平面距离0.34nm,双螺旋直径2.Onm,每十个核昔酸为一个结构重复周期。
(2)、左手螺旋(Z-DNA)是右手螺旋结构模型的一个补充和发展
DNA三级结构:
(1)、超螺旋是其三级结构的主要形式,分为正超螺旋与负超螺旋。
在不同的拓扑异构酶的作用下可以相互转变。
(2)、D7A分子的变化满足公式:
L=T+W(连接数=旋转数+超螺族数)
(3)、双螺旋DNA的松开导致负超螺旋、拧紧导致正超螺旋。
五、DNA复制通常采取哪些方式?
(p40)
答:
(1)线性DNA双链复制:
①,复制叉方向:
单一起点单向、双向,或多起点双向
2,特殊机制:
I,线性的复制子形成环状或多聚分子
II,末端形成发卡结构
III,特殊蛋白介入,在真正末端启动复制
(2)环状DNA双链复制:
0型、滚环型、D—环型
六、真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控?
(p51)
<:
真核细胞生活周期:
G1期:
复制预备期、S期:
复制期、G2期:
有丝分裂预备期、期:
有丝分裂期。
调控方式:
(1)、细胞生活周期水平调控:
决定是否从G1期进入S期
(2)、染色体水平调控:
决定不同染色体或者同一染色体的不同部位的复制子按一定顺序在S周期进行
复制
(3),复制子水平调控:
决定复制子是否进行复制
七、DNA修复包括哪几种?
p51〜p55
答:
1、错配修复:
通过复制前母链甲基化来识别错配的子链,根据''保留母链,修复子链”的原则,通过两种方式(3’端、5r端)剪切和合成新链修复。
2、切除修复:
(1)、碱基切除修:
<1>、糖昔水解酶:
水解受损核昔酸上的N—卩一糖昔键,形成去碱基位点(即AP位点)
<2>、AP核酸切酶:
将受损核酸的糖昔一磷酸键切开
<3>、DNA聚合酶I:
合成新的片段
<4>、DM连接酶:
连接,完成修复
(2)、核昔酸切除修复:
通过DNA切割酶和DNA聚合酶实现修复
<1>、DNA切割酶:
切割损伤部位的磷酸糖昔键
<2>、DNA聚合酶I(原核)或&(真核):
合成新片段
<3>、DNA连接酶:
连接,完成修复
3、重组修复:
又称复制后修复,复制时跳过损伤部位,之后通过DNA重组修复
4、直接修复:
不通过切除来修复,如DNA光解酶使环丁烷胸腺嚅啜二聚体或6-4光化物还原成单体。
5、SOS修复:
诱导DNA修复,诱变反应,细胞分裂的抑制,溶原性细菌释放噬菌体等。
细胞癌变也与SOS修复有关
第三章
—、Pribnowbox(P76)
答:
为原核生物指导转录的DNA模板链上一段由5个核昔酸(TATAA)组成的共同序列,其为RNA聚合酶紧密结合点,其又位于起始位点上游10bp处,故又称一10区。
二、编码链(p66)
答:
将与mRNA序列碱基顺序相同的那条DM单链称编码链,又称有义链;另一条根据碱基互补配对原则指导niRNA合成的DNA单链称为模板链,又称反义链。
三、上升突变(P78)
答:
细菌中常见两种突变:
上升突变、下降突变,上升突变指:
增加pribnowbox的共同序列的同一性彎逹高启动子的效率,从而提高基因的转录水平的一种突变。
例如乳糖操纵子中的pribnow区的TATGTT]变为TATATT|能够提高操纵子的基因转录水平。
四、增强子(p78)
答:
是除启动子以外与转录起始有关的序列,一般位于一200bp处,能够增强转录起始。
特点:
远距离效应、顺式调节、可对外部信号有反应;无方向、有相位;无物种基因特异性、有组织特异性。
五、简述生物体RNA的种类和功能(P67)
答:
(l)mRNA:
编码特定蛋白质序列
(2)tRNA:
识别mRNA中的遗传信息,将其转化为相应的氨基酸后加入到多肽链中
(3)rRNA:
直接参与核糖体的蛋白质合成(为最:
多的RNA)
六、什么是DNA模板与mRNA及蛋白质产物之间的共线性关系?
(p67)
答:
书上67页图3-1
七、转录一般被分为哪几个步骤?
(p67〜p69)
答:
模板识别:
R7A聚合酶与启动子DNA双链相互作用并结合的过程
转录起始:
R7A聚合酶与启动子DNA双链结合后,形成转录泡,RNA链上第一个核昔酸键的产生。
通过启动子:
第一个核昔酸键产生到形成九个核昔酸短链的过程。
转录延伸:
R7A聚合酶释放。
因子后,核心酶沿D7A模板链移动并使新生RNA不断延伸的过程
转录终止:
R7A延伸到终止位点时,RNA聚合酶不再形成新的磷酸二脂键,转录泡瓦解,RNA-DNA杂化双准分离,DNA恢复双链,RNA和RM聚合酶从模板释放。
八、转录终止子与翻译终止密码的结构特点?
(转录终止子结构p90)答:
转录终止子结构:
(1)不依赖P因子的终止:
1在终止位点上游一段富含GC二重对称区,通过转录形成RNA容易出现发卡结构,该结构阻止RNA聚合酶的前进,破坏RNA-DNA杂化双链的结构
2在终止位点上游存在4〜8个A组成的序列,转录产物形成不稳定的rU・dA区域,上述两者共同作用,使RNA聚合酶从三元复合物中脱离出来
(2)依赖P因子的终止:
P因子为六个相同亚基的聚合物,其能够催化NTP的水解促使新生成的RNA从三元复合
物中脱离出来,从而终止转录
翻译终止密码结构:
待定
九、什么長RNA编辑?
其生物学意义?
(p99、plOl)
答:
定义:
RNA编辑是某些RNA,特别是mRNA前体的一种加工方式,通过插入删除或取代一些核昔酸残基,导致mRNA编码的遗传信息发生改变,通过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。
RNA编辑的机制有两种:
位点特异性脱氨基作用和RNA指导的尿喀啜插入或删除。
生物学意义:
(1)、校正作用:
弥补因突变而缺失的遗传信息。
(2)、调控翻译:
通过构建或除去起始密码子和终止密码子来调控翻译。
(3)、扩充遗传信息:
能使基因产物获得新的结构功能。
第四章
一、SD序列(P130)
答:
原核生物的mRNA上,于翻译起始密码AUG上游约lObp处,有一段5'—AGGAGGU—3'的富瞟吟区,称为SD序列。
该序列与核糖体30s亚基的16srRNA中的3’端一段富喘啜区互补;通过SD序列,核糖体与mRNA相互作用并结合。
二、信号肽(P145)
答:
定义:
在编码分泌蛋白的基因中,大多5'端有一段基因用于编码疏水性肽段,这一肽段在成熟的分泌蛋白中并不存在,其功能在于引导随后产生的蛋白质多肽链穿过质网膜进入腔。
其在蛋白质的质网一高尔基体一质膜分泌途径中具有重要作用,并被称之为信号肽。
(来源XX)
特征:
(1)带有10〜15个疏水性氨基酸
(2)靠近N端常有一个或数个带|正电|的氨基酸
(3)(1端于蛋白酶切割位点附近常有数个极性氨基酸,且离切割位点最近的极性氨基酸常有很短的侧链
三、简述tRNA的结构。
(P116〜pll7)
答:
二级结构:
''三叶草”结构,含76个碱基,相对分子量为2.5X101
(1)共同点:
①、含稀有碱基
2、3’末端均为CCA-OH
(2)五个臂:
①、受体臂:
含CCA-OH
2、D臂:
因含二氢尿喘喘得名,并含三个可变核甘酸位点
3、反密码子臂:
其套索结构中含有三个反密码子
4、TWC■臂:
根据三个核昔酸命名,其中2为拟尿啼啜
5、多余臂:
为tRNA变化最大的部位。
三级结构:
L形折叠。
特点:
①、氢键维系
2、两个新增双螺旋结构:
TWC臂、受体臂和D臂
3、L的两头:
分别为受体臂和反密码子臂
4、L的转角处:
TWC臂和D臂的套索结构
5、结构意义:
满足戳译时核糖体与mRM的结构相适应。
四、简述核糖体的组成及其功能。
(P123〜pl26)
结构:
(1)、由大亚基和小亚基组成,每个亚基都由核犍体蛋白以及rRNA组成
(2)、根据沉降系数不同70S型(原核生物,由50S+30S组成)
80S型(真核生物,由60S+40S组成)
(3)、核糖体蛋白:
组成活性中心,去除任一蛋白,总体也会失去功能
(4),rRNA:
5SrRNA:
结合50S大亚基、TOC臂。
16SrRNA:
结合mRMA、50S大亚基、A(P)位置的tRNA
23SrRNA:
结合tRNA11”
5.8SrRNA:
存在于真核生物中,相当于5SrRNA
18SrRNA:
存在于群母中,相当于大肠杆菌16SrRNA
28SrRNA:
功能未知
(5),三个tRNA结合位点:
A:
结合氨酰一tRNA
P:
结合肽酰一tRNA
E:
移出tRNA
tRMA的移动顺序:
A-P-E
功能:
(1)、所有生物体的核糖体结构相近、功能相同一一参与蛋白质多肽的合成
(2)、大亚基的功能:
肽键的形成、结合氨酰一tRNA,结合肽酰一tRNA
(3)、小亚基的功能:
识别mRNA,识别起始部位、识别密码子与反密码子
(4)、核糖体可以根据需要解离为亚基或者合成为颗粒。
五、简述肽链合成过程的生物学机制。
(P132〜pl36)
答:
(1)、后续AA—tRNA与核糖体结合
1、起始复合物生成后,AA-tRNA与延伸因子EF-Tu和GTP形成复合物
2、M-tRNA・EF-Tu・GTP复合物进入核糖体A位。
同时,GTP水解
3、通过另一延伸因子EF-Ts产生GTP,形成EF-Tu・GTP复合物循坏再利用
(2),肽链合成
1、M-tRNA的AA从A位进入P位,与fMET-tRNA*1上的AA形成肽键
2、形成肽键后的起始tRNA离开P位
3、A点准备接受新的tRNA
(3)、移位:
即核糖体沿mRNA的3’端方向移动一个密码子
1、位于A位的二肽酰一tRNA2从A位移动到P位
2、去氨基一tRNA进入E位
3、mRMA上第三位密码子对应A位
另:
1、氨基酸活化
2、肽链合成的起始指核糖体与mRNA及起始氨醍-tRNA结合成起始复合物。
分为三步:
(1)核糖体的小亚基与mRNA结合
小亚基能识别mRM上的起始密码子AUG,并附着在这个部位,形成“小亚基-mRNA”复合物。
(2)起始氨酰-tRNA结合上去
起始氨酰-tRNA与mRNA上的起始密码子结合,形成了“小亚基-mRNA-fMet-tRNA”复合物。
(3)大亚基结合上去
大亚基与上述复合物结合,形成了起始复合物,即"核糖体-mRNA-(f)Met-tRNA'‘复合物。
在整个起始过程中,还需有3种蛋白质因子参与,称起始因子(IF),即IF1、IF2、IF3。
另外,起始过程还消耗高能化合物,即1分子GTP。
3、肽链的延伸
(1)进位
与起始复合物中A位处的密码子相对应的aa-tRNA进入。
此时需消耗1分子GTP-GDP。
(2)转肽
P位的fMet-tRNA上的甲酰甲硫氨酰基转移至A位的aa-tRNA的aa的氨基上,形成肽键。
催化此反应的酶叫肽基转移酶,它是核縛体大亚基中的一种酶。
此转肽反应不另外消耗高能化合物,因为活化的氨基酸已具有潜在的能量。
(3)移位
核糖体沿着mRNA37端方向移动一个密码子的距离,这样,原来P位空载的tRMA离开了核糖体,原来A位的肽酰-tRNA位于了P位,而A位空了出来。
这一步需消耗1分子GTP-GDP。
通过以上三步,延长了一个氨基酸。
在此过程中,还需要一些蛋白质因子的参与,称为延长因子(EF)。
每延伸一个氨基酸,需要消耗2分子GTP-GDP。
(进位和移位)
接下来,空着的A位又有新的aa-tRNA进入,通过转肽一移位,又可延长一个眈。
重复上述步骤,随着核糖体从5’一3’移动,可使aa按照mRNA上密码子的要求一个个地对号加入,肽链从N端向C端延伸。
4、肽链合成的终止与释放
当核糖体由5’一3’移动至终止密码子(UAA、UAG、UGA)时,由于没有与之相应的tRNA,终止因子RF进入A位。
终止因子使肽基转移酶的活性转变为水解酶活性(使肽基不再转移到氨酰tRNA上,而是转移给水分子),从而将肽酰tRNA水解。
这样肽链被释放。
空载的tRNA也离开核糖体。
核糖体的大小亚基解离并离开mRNA。
5、新合成多肽链的折叠和加工
六、蛋白质加工的种类和意义。
(P136〜pl40)
答:
(1),N端fMET和MET的切除:
无论真核、原核细胞,蛋白翻译之后均要切除7端的甲硫氨酸或甲酰甲硫氨酸
(2)、二硫键形成:
二硫键的正确形成对于形成蛋白质天然空间构象具有重要意义
(3),特殊AA的修饰:
①、磷酸化:
氨酸、丝氨酸、酪氨酸(西洛|)
2、糖基化:
I、真核细胞蛋白的特征
II、于质网受■基化酶的作用
III、所有卜泌蛋白和膜蛋白|均为糖基化蛋白
3、甲基化、乙基化、羟基化、裁基化
(4)、切除新生肽链中的非功能片段:
肽类激素或酶的前体大多都要经过此类加工才能成为活性分子
七、简述蛋白质转运的种类和机制。
P142〜pl53
答:
1、蛋白质转运分为:
樹译转运同步机制,翻译后转运机制
2,几种主要蛋白质的转运机制:
(1)、分泌蛋白:
樹译转运同步机制
(2)、细胞器蛋白:
翻译后转运机制
(3)、膜蛋白:
两者都有
3,翻译转运同步机制:
(1)、核糖体组装、翻译开始
(2)、位于N端的猪号岡首先被翻译出来
(3)、与含忘信号肽的新生肽链以及核糖体及GTP:
结合,翻译被中止
(4)、膜上受体■与■结合,形成孔道
(5)、GTP水解,SRP释放、戳译继续进行,边翻译边跨膜
(6)、翻译结束,信号肽被切除、核糖体解离并恢复到戳译前起始状态
4、翻译后转运:
(1)、线粒体转运:
1、待转运多肽由咸熟蛋白质和前导脚组成
2、转运需要[能屢
3、先有线粒体外膜上的Tom受体识别Hsp70或MSF等分子伴侣结合的待转运多肽,再通过Tom和Tim组
成的通道进入线粒体腔
4、前导肽特点:
I、賛性氨基酸和務基氨基酸含量多
II、有形成两条a螺旋的能力
(2)、叶绿体转运:
1叶绿体定位信号肽为两部分:
I、决定该蛋白能否进入叶绿体基质
II、决定该蛋白能否进入叶绿休类曩体
2特征:
I、活性蛋白水解酶位于叶绿体基质中
I[、叶绿体膜与叶绿体蛋白前体特异性结合
III、叶绿体蛋白前体可降解序列因植物和蛋白种类不同而不同
(3)、核定位蛋白转运:
1真核生物:
I、NLS(核定位序列)与核转运因子aB结合,停留于核孔
II、依靠GTP水解能量(Ran酶),进入细胞核
III、aB亚基解离
2原核生物:
I、新生成蛋白质与分子伴侣SecB结合,形成结合物
II、结合物与膜上的SecA-SecYEG复合物结合
III、通过SecA水解ATP将蛋白质分段送出胞外
第七、八章
一、定义:
基因家族。
(P282)
答:
真核细胞中相关基因按功能成套组合,称为基因家族,同一家族的成员有时紧密排列,组成一个基因簇,但大多分布在同一染色体的不同部位,甚至不同的染色体,有各自不同的表达调控模式。
二、简述操纵子学说。
(P237)
答:
(1)、1961年,由法国科学提出,最初发现的是大肠杆菌的乳糖操纵子。
其由三个结构基因Z、Y、A,以及启动子、控制子和阻遏子等组成,负责调控大肠杆菌的乳糖代。
(2),乳糖操纵子结构基因的表达受阻遏蛋白和诱导物的调控,当阻遏蛋白结合到操纵基因之上时,结构基因不产表达,而乳糖(充当诱导物)会与阻遏蛋白结合,使之从操纵基因上脱落下来。
这时,操纵基因开启,结构基因表达,细菌就能分解并利用乳糖了。
三、简述乳糧操纵子的调控模型。
(P240)
答:
(1)、Z、Y、A|的陰因产物由同一条多顺反子mRNA编码;Z编码半乳糖昔酶、Y编码B—半乳糖昔透过酶、A编码B—半乳糖昔乙酰基转移酶
(2)、启动区(P)位于阻遏基因(I基因)和操纵区(0区)之间,不能主动进行糖甘酶和糖昔透过酶基因的高效
表达
(3),操纵区为一段短DNA链(长约26bp),是阻遏物的结合位点
(4)、阻遏物与操纵区结合后,阻遏lacmRNA的转录
(5)、诱导物与阻遏物结合后,改变阻遏物的空间构象,使其不能结合到操纵区,从而激活lacmRNA的表达
四、筒述顺式作用元件与反式作用因子。
(P299)
答:
(1)、顺式作用原件:
影响自身基因表达活性的非编码DNA,如启动子、增强子、沉默子
(2)、反式作用因子:
1、定义:
能够直接或间接识别或结合在顺式作用原件的核心序列,调控耙基因转录效率的蛋白质
2、常见的反式作用因子:
I、HTH结构(螺旋一转折一螺旋结构)
II、锌指结构
III、bZIP结构(碱性一亮氨酸拉件)
IV、bHLH结构(碱性一螺症一环一螺旋结构)
V、同源域蛋白
3、反式作用因子的唯一结构基础:
转录活化域
4、转录活化域主要结构:
I、带负电的螺.旋结构
II、富含谷氨酰胺的结构
III、富含脯氨酸的结构
五、DNA甲基化的方式及其作用。
(P292)
答:
1、方式:
通过两种甲基化酶
(1)日常型甲基化酶:
通过甲基化的母钱,将DNA分子中处于半甲基化状态的甲基胞嚅啜相对应的胞喘啜甲基
化
(2)、从头合成甲基化酶:
无需母链,将未甲基化的CpG进行甲基化。
2、常见的DNA甲基化:
5-mC年一甲基测啼噪),N'-niA(N|—甲基腺瞟吟),7-mG(凰一甲基鸟憚吟)。
3、作用:
通过甲基化关闭某些以因的活性、改变染色体结构、DMA构象、DNA稳定性,以及和蛋白相互作用来达
到调控基因表达。
六、简述真核基因转录的过程和调控方式。
(P296起)
答:
1、转录过程:
一般转录过程:
模板识别、转录起始、转录延伸、转录终止(参见第三章第七问)
真核生物参转录机黠的组成:
(1)、启动子
1、核心启动子
I、结构:
包括转录起始位点以及其上游一35〜一25bp处的TATA盒
II、作用:
确定转录起始位点,产生基础水平转录
2、上游启动原件I、结构:
包括位于一70bp的CAAT盒以及GC盒等
II、作用:
提高转录效率
(2)、转录模板:
从转录起始点到RNA聚合酶II转录终止处的全部DNA序列。
(3)、R7A聚合酶II
(4)、RNA聚合酶II基础转录所需的蛋白质因子(TFI【):
1、TFIID、B、F形成初级复合物
2、TFIIH、E加入后形成完整转录复合物
3、加入TFIIA可提高转录效率
4、转录时TFIID,A滞留在转录起始位点上。
2、调控方式:
大多数通过顺式作用原件和反式作用因子相互作用调控
(1)、顺式作用原件:
启动子:
(见上)
增强子:
(定义、功能特点见第三章)
沉默子:
为参与基因表达负调控的一种元件,其D7A序列被调控蛋白结合后阻断了转录起始复合物的形成或活化,使基因表达活性关闭。
(2)、反式作用因子:
(见上)
分子生物学考试重点后半部分
一、基因工程
答:
在体外将核酸分子插入载体分子中,使之进入原先不含此类分子的寄主细胞中,并使之进行持续稳定的繁殖和表达的技术。
其与其他技术最显著的区别是,基因工程技术跨越了天然生物屛障,能将来自任何生物的基因置于与之亳无亲缘关系的寄主细胞中。
二、限制性核酸切酶
答:
1、定义:
能识别DNA中特定的戚基序列,并从该位点切开DNA分子的酶称〜。
其能够识别并切断外来D7A分子的某些部位,使外来DNA分子失去活性,并限制外来噬菌体的繁殖。
2、分类:
(1)限制性核酸切酶I:
能识别专一的核昔酸顺序,并在识别位点附近的核昔酸切割DNA分子,但切割的核昔
酸顺序没有专一性,是随机的。
代表酶:
EcoKEcoBo
(2)、限制性核酸切酶II:
能够识别专一的核昔酸顺序,并且在该顺序固定位置切割DNA分子,识别的专一顺
序是:
回文对称顺序。
代表酶:
EcoRo
(3)、限制性核酸切WIH:
能够识别专一的核甘酸顺序,但所识别的顺序并非回文对称顺序,能够在所识别的
核昔酸顺序外专一切割DNA分子。
3、反应过程:
(1)、加DNA
(2)、加Buffer
(3)、加酶
(4)、37°C-小时或过夜
(5)、停止反应,65£加热,加EDTA或苯酚
4、注意事项:
(1)、使用浓缩限制性核酸切酶时以IX限制酶缓冲液稀释
(2)、每次取酶均应更换无菌吸头,操作要快,操作完立刻放回一2(FC冰箱
(3)、尽量减小反应体积,但酶的体积最多不超过总体积的10%
(4)、切割大<DNA时,延长作用时间可以减少所需的酶,反应时可取少量酶,行微量凝胶电泳来检测反应
(5)、注意星号酶切活力:
核酸切酶在一些特殊情况下,对底物DNA特异性降低,将与特定DM序列不同的碱
基切断
三、基因组DNA丈库和cDNA文库
答:
1、基因组DNA文库
(1)、概念:
将某种生物细胞的基因组DMA切成适当大小,分别
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- 分子生物学 思考题