美国药典USP3NF26色谱621.docx
- 文档编号:4800763
- 上传时间:2022-12-09
- 格式:DOCX
- 页数:47
- 大小:157.83KB
美国药典USP3NF26色谱621.docx
《美国药典USP3NF26色谱621.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《美国药典USP3NF26色谱621.docx(47页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
美国药典USP3NF26色谱621
621
CHROMATOGRAPHY色谱法
INTRODUCTION介绍
Thischapterdefinesthetermsandproceduresusedinchromatographyandprovidesgeneralinformation.Specificrequirementsforchromatographicproceduresfordrugsubstancesanddosageforms,includingadsorbentanddevelopingsolvents,aregivenintheindividualmonographs.
此章节定义了色谱法中用到的术语和步骤,并提供了通用信息。
对于原料药和成药的色谱步骤的具体要求,包括吸附剂和展开溶剂,在具体各论中给出。
Chromatographyisdefinedasaprocedurebywhichsolutesareseparatedbyadynamicdifferentialmigrationprocessinasystemconsistingoftwoormorephases,oneofwhichmovescontinuouslyinagivendirectionandinwhichtheindividualsubstancesexhibitdifferentmobilitiesbyreasonofdifferencesinadsorption,partition,solubility,vaporpressure,molecularsize,orionicchargedensity.Theindividualsubstancesthusseparatedcanbeidentifiedordeterminedbyanalyticalprocedures.
色谱法是应用溶质在两相或多相系统中的差速迁移来进行分离的技术,其中一相持续地向特定方向移动,而由于物质在吸附性、分配、溶解性、气体压力、分子大小、或离子电荷密度上的差异,会显示出不同的移动性。
由此分开的这些单个物质可以通过分析过程鉴别或测定。
Thegeneralchromatographictechniquerequiresthatasoluteundergodistributionbetweentwophases,oneofthemfixed(stationaryphase),theothermoving(mobilephase).Itisthemobilephasethattransfersthesolutethroughthemediumuntiliteventuallyemergesseparatedfromothersolutesthatareelutedearlierorlater.Generally,thesoluteistransportedthroughtheseparationmediumbymeansofaflowingstreamofaliquidoragaseoussolventknownasthe“eluant.”Thestationaryphasemayactthroughadsorption,asinthecaseofadsorbentssuchasactivatedaluminaandsilicagel,oritmayactbydissolvingthesolute,thuspartitioningthelatterbetweenthestationaryandmobilephases.Inthelatterprocess,aliquidcoatedontoaninertsupport,orchemicallybondedontosilicagel,ordirectlyontothewallofafusedsilicacapillary,servesasthestationaryphase.Partitioningisthepredominantmechanismofseparationingas–liquidchromatography,paperchromatography,informsofcolumnchromatographyandinthin-layerchromatographydesignatedasliquid-liquidchromatography.Inpractice,separationsfrequentlyresultfromacombinationofadsorptionandpartitioningeffects.Otherseparationprinciplesincludeionexchange,ion-pairformation,sizeexclusion,hydrophobicinteraction,andchiralrecognition.
常规色谱方法要求溶质在两相之间的分配,一个是固定的(固定相),另一个则在移动(移动相)。
流动相的作用是穿过介质转移溶质,直至其最终与其他不同时间洗脱出来的溶质分开。
通常,该溶质由被称为“洗脱剂”的某种液体或气态溶剂的流动输送着穿过分离介质。
该固定相可以通过吸附发挥作用,比如活性氧化铝和硅胶之类的吸附剂,或者其可以通过溶解溶质并由此在固定相与流动相之间分配溶质来起作用。
在后面这个过程中,涂在惰性载体上、或用化学方法键合在硅胶上、或直接在涂布石英毛细管壁上的某种液体作为固定相。
分配作用是气液色谱法、纸色谱法、多种柱色谱法和薄层色谱法称为液-液色谱法中的主要分离机制。
在实际操作中,分离经常是吸附与分配联合作用的结果。
其他分离原理包括离子交换、离子对结构、空间排阻、疏水性相互作用、手性识别。
ThetypesofchromatographyusefulinqualitativeandquantitativeanalysisthatareemployedintheUSPproceduresarecolumn,gas,paper,thin-layer,(includinghigh-performancethin-layerchromatography),andpressurizedliquidchromatography(commonlycalledhigh-pressureorhigh-performanceliquidchromatography).Paperandthin-layerchromatographyareordinarilymoreusefulforpurposesofidentification,becauseoftheirconvenienceandsimplicity.Columnchromatographyoffersawiderchoiceofstationaryphasesandisusefulfortheseparationofindividualcompounds,inquantity,frommixtures.Modernhigh-performancethin-layerchromatography,gaschromatography,andpressurizedliquidchromatographyrequiremoreelaborateapparatusbutusuallyprovidehighresolutionandidentifyandquantitateverysmallamountsofmaterial.
在USP程序中使用的定性和定量分析中可以使用的色谱法类型是柱、气相、薄层(包括高效薄层色谱法)、加压液相色谱法(通常称为高压或高效液相色谱法)。
由于方便、简单,纸和薄层色谱法通常在鉴别用途中更加有效。
柱色谱法对固定相提供了更广泛的选择,并且可用于从混合物中大量分离单个化合物。
现代高效薄层色谱法、气相色谱法、加压液相色谱法要求更加精密的仪器,通常提供高分离度,但只能识别与定量测定非常少量的物料。
UseofReferenceSubstancesinIdentityTests—Inpaperandthin-layerchromatography,theratioofthedistance(thisdistancebeingmeasuredtothepointofmaximumintensityofthespotorzone)traveledonthemediumbyagivencompoundtothedistancetraveledbythefrontofthemobilephase,fromthepointofapplicationofthetestsubstance,isdesignatedastheRFvalueofthecompound.TheratiobetweenthedistancestraveledbyagivencompoundandareferencesubstanceistheRRvalue.RFvaluesvarywiththeexperimentalconditions,andthusidentificationisbestaccomplishedwhereanauthenticspecimenofthecompoundinquestionisusedasareferencesubstanceonthesamechromatogram.
标准物质在鉴别试验中的使用:
在纸和薄层色谱法中,从试样点开始的某个特定化合物在介质上的行进距离(这个距离从斑点或者色带的最深点测量)与流动相前端的行进距离的比例被规定为该化合物的RF值。
某个特定化合物和标准物质的行进距离之间的比值是RR值。
RF值随着试验条件而变化,因此最好有待检化合物可靠的标准品作为参考物质并在同一色谱条件下完成鉴别试验。
Forthispurpose,chromatogramsarepreparedbyapplyingonthethin-layeradsorbentoronthepaperinastraightline,paralleltotheedgeofthechromatographicplateorpaper,solutionsofthesubstancetobeidentified,theauthenticspecimen,andamixtureofnearlyequalamountsofthesubstancetobeidentifiedandtheauthenticspecimen.Eachsampleapplicationcontainsapproximatelythesamequantitybyweightofmaterialtobechromatographed.Ifthesubstancetobeidentifiedandtheauthenticspecimenareidentical,allchromatogramsagreeincolorandRFvalueandthemixedchromatogramyieldsasinglespot;i.e.,RRis1.0.
为此,色谱图准备如下:
在薄层吸附剂上或在纸张上,在与色谱板或纸的底部边缘平行的一条直线中,点上待识别物质溶液、其标准品溶液、以及由几乎等量待识别物质和其真实样品构成的混合物溶液。
每个样品点包含大约同样重量的待层析物料。
如果待识别物质和其标准品是完全一样的,则全部色谱图在颜色和RF上会相符,且混合物的色谱图产生了单个斑点;例如,RR为1.0。
LocationandIdentificationofComponents—Thespotsproducedbypaperorthin-layerchromatographymaybelocatedby:
(1)directinspectionifthecompoundsarevisibleunderwhiteoreithershort-wavelength(254nm)orlong-wavelength(360nm)UVlight,
(2)inspectioninwhiteorUVlightaftertreatmentwithreagentsthatwillmakethespotsvisible(reagentsaremostconvenientlyappliedwithanatomizer),(3)useofaGeiger-Müllercounterorautoradiographictechniquesinthecaseofthepresenceofradioactivesubstances,or(4)evidenceresultingfromstimulationorinhibitionofbacterialgrowthbytheplacingofremovedportionsoftheadsorbentandsubstanceoninoculatedmedia.
组分的位置与识别:
由纸或薄层色谱法生成的斑点可以通过下面的方法定位
(1)如果该化合物在可见光或者短波(254nm)或长波(360nm)紫外光下可见,直接检查,
(2)在用能够令斑点显色的试剂处理之后(最方便的是用喷雾器喷洒试剂),在可见光或紫外光下检查,(3)放射性物质存在的情况下,使用盖革-缪勒计数器或放射自显影技术,或者(4)取出部分吸附剂和物质置于接种介质上,从细菌生长的促进与抑制情况得到证据。
Inopen-columnchromatography,inpressurizedliquidchromatographyperformedunderconditionsofconstantflowrate,andingaschromatography,theretentiontime,t,definedasthetimeelapsedbetweensampleinjectionandappearanceofthepeakconcentrationoftheelutedsamplezone,maybeusedasaparameterofidentification.Solutionsofthesubstancetobeidentifiedorderivativesthereof,ofthereferencecompound,andofamixtureofequalamountsofthesetwoarechromatographedsuccessivelyonthesamecolumnunderthesamechromatographicconditions.Onlyonepeakshouldbeobservedforthemixture.Theratiooftheretentiontimesofthetestsubstance,thereferencecompound,andamixtureofthese,totheretentiontimeofaninternalstandardiscalledtherelativeretentiontimeRRandisalsousedfrequentlyasaparameterofidentification.
在开放柱色谱中,在按照恒定流速条件进行的加压液相色谱法中,以及气相色谱法中,被定义为在样品进样与被洗脱样品区域峰值浓度的出现之间所消耗时间的保留时间,t,可以用于鉴别的参数。
待鉴别物质或其衍生物的溶液、对照化合物的溶液、以及此二者含量相等的混合物的溶液须在相同的色谱条件下,使用同一个色谱柱进行连续层析。
只能在该混合物观察到一个峰。
供试物质、对照化合物、以及二者的混合物的保留时间与内标物的保留时间的比值被称为相对保留时间RR,其也经常用于鉴别的参数。
ThedeviationsofRR,RF,ortvaluesmeasuredforthetestsubstancefromthevaluesobtainedforthereferencecompoundandmixtureshouldnotexceedthereliabilityestimatesdeterminedstatisticallyfromreplicateassaysofthereferencecompound.
从供试物质测得的RR、RF、或t值与从对照物质和混合物中得到的这些值之间的偏差不得超过从对照物质重复含量测定中以统计学方法确定的可靠性评估值。
Chromatographicidentificationbythesemethodsundergivenconditionsstronglyindicatesidentitybutdoesnotconstitutedefinitiveidentification.Coincidenceofidentityparametersunderthreetosixdifferentsetsofchromatographicconditions(temperatures,columnpackings,adsorbents,eluants,developingsolvents,variouschemicalderivatives,etc.)increasestheprobabilitythatthetestandreferencesubstancesareidentical.However,manyisomericcompoundscannotbeseparated.Specificandpertinentchemical,spectroscopic,orphysicochemicalidentificationoftheelutedcomponentcombinedwithchromatographicidentityisthemostvalidcriterionofidentification.Forthispurpose,theindividualcomponentsseparatedbychromatographymaybecollectedforfurtheridentification.
在特定条件下以这些方法进行的色谱鉴别有力地指明了对其的识别,但是不能构成权威性的鉴别。
识别参数在3至6套不同色谱条件(温度、柱填料、吸附剂、洗脱剂、展开剂、多种化学衍生物等)下均一致的情况增加了供试物质和对照物质完全相同的可能性。
但是,很多同分异构物无法分离。
具体的相关化学、分光镜检查、或物理化学鉴别与色谱识别合在一起才是对于被洗脱组分的最有效的鉴别标准。
为此,由色谱法分离的单个组分可以收集起来以便进一步鉴别。
PAPERCHROMATOGRAPHY纸色谱法
Inpaperchromatographytheadsorbentisasheetofpaperofsuitabletextureandthickness.Chromatographicseparationmayproceedthroughtheactionofasingleliquidphaseinaprocessanalogoustoadsorptionchromatographyincolumns.Sincethenaturalwatercontentofthepaper,orselectiveimbibitionofahydrophiliccomponentoftheliquidphasebythepaperfibers,mayberegardedasastationaryphase,apartitioningmechanismmaycontributesignificantlytotheseparation.
在纸色谱法中吸附剂是适当质地与厚度的一张纸。
色谱分离可以在与柱中的吸附色谱法相似的工艺中,通过某单个液相的移动来进行。
因为纸含有天然的水分,或者纸纤维对于液相中亲水组分的选择性吸取,可以认为是个固定相,所以分配机制可以对于分离作用明显。
Alternatively,atwo-phasesystemmaybeused.Thepaperisimpregnatedwithoneofthephases,whichthenremainsstationary(usuallythemorepolarphaseinthecaseofunmodifiedpaper).Thechromatogramisdevelopedbyslowpassageoftheother,mobilephaseoverthesheet.Developmentmaybeascending,inwhichcasethesolventiscarriedupthepaperbycapillaryforces,ordescending,inwhichcasethesolventflowisalsoassistedbygravitationalforce.
另外的选择是使用一个两相系统。
这张纸浸渍在其中一个相中,然后其保持不
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 美国 药典 USP3NF26 色谱 621