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张力论文11
(《中国图书资料分类法》分类号)(R394)单位代码:
10660
学号:
07001001023
贵阳医学院基础医学院
2012届基础医学(生物技术方向)专业本科学位论文
栝楼增殖培养基的筛选
学生:
张力
年级:
2007级
专业:
基础医学(医学生物技术)
指导教师:
刘红美博士
实习单位:
贵阳医学院医学生物技术教研室
2012年03月25日
目录
摘要…………………………………………………………………2
1、前言………………………………………………………………3
2、材料与方法…………………………………………………………3
2.1材料……………………………………………………………3
2.2方法……………………………………………………………3
2.2.1最佳材料筛选………………………………………………3
2.2.2不定芽诱导………………………………………………3
2.2.3不定芽增殖…………………………………………………4
3、结果与分析………………………………………………………4
3.1最佳材料筛选…………………………………………………4
3.2不定芽诱导……………………………………………………5
3.3不定芽增殖……………………………………………………6
4、讨论与结论…………………………………………………………10
参考文献……………………………………………………………10
致谢……………………………………………………………12
栝楼增殖培养基的筛选学生:
张力导师:
刘红美
摘要:
目的:
筛选栝楼增殖适宜的培养基。
方法:
以栝楼瓶苗茎段和幼叶为外植体,接种于不同激素配比组合的培养基中进行培养,统计增殖倍数和植株长势。
结果:
茎段是适宜的外植体,适宜的增殖培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.8%。
关键词:
栝楼增殖培养基茎
ToscreenaappropriatepropagationmediumforTrichosantheskirilowiiMaxim
Student:
zhnaglisupervisor:
liuhongmei
Abstract:
objection:
ToscreenaappropriatepropagationmediumforTrichosantheskirilowiiMaxim.method:
thestemandleavesofseedlinginvitroculturedwereusedasexplant,thenwereinoculatedinmediumsuppliedwitndifferentcombinationofhormones6-BAandNAA.Theproliferationrateandplantgrowthwereanalysis.
Resultandconclution:
thestemwasthebetterexplant。
TheappropriatepropagationmediumwasMS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/Lwith3%sucroseand0.8%agar.
Keywords:
TrichosantheskirilowiiMaxim;propagationmedium;stem
1、前言
栝楼(TrichosantheskirilowiiMaxim),亦称瓜蒌、天瓜、野葫芦、吊瓜,为葫芦科栝楼属(TrichosanthesL.)雌雄异株、宿根、攀援草质藤本植物。
栝楼为我国传统常用中药材,宋代《本草图经》、明代《本草纲目》均有记载。
栝楼主要分布于山东、河南、山西、河北、北京、浙江、安徽等15个省市,现代医学研究发现,其花粉(天花粉)蛋白能够抑制肿瘤的生长和多种病毒繁殖,特别是对HIV病毒复制有较强的抑制作用[1]。
栝楼子营养丰富,果实中含有三菇皂甙、有机酸及盐类、树醋、糖、色素、脂肪等;叶含山奈甙,其提取液具抗癌作用[5],对高血压、高血脂、高胆固醇有辅助疗效。
栝楼为常用大宗中草药之一,全身都是宝,栝楼子能提高肌体免疫功能,并有瘦身、美容功效。
药用(食用)括楼多为人工栽培,而种子培养的雌性栝楼种苗只有总量的10%—15%。
因此,生产上迫切需要一种能获得大量雌性植株的繁殖方法。
植物组织培养快速繁殖技术,具有繁殖周期短、繁殖系数大、遗传稳定、不受季节与环境限制等优点,能在短期内培育出大量遗传稳定、经济性状表现一致的优质种苗,有利于迅速实现优良品种的大面积推广。
为此,有学者选用栝楼雌性植株进行了组织培养和快速繁殖的研究。
兰伟等以栝楼茎段为外植体,认为培养基MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L为最佳增殖培养基[3]。
而杨晓伶[2]杨丽娜[4]尹艺林[6]朱勤[7]宋振巧[8]学者多认为栝楼茎段在MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.5mg/L
+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基中增殖效果最好,兰伟等研究只涉及在固定NAA浓度0.2mg/L下不同浓度6-BA对栝楼丛生芽诱导培养的影响,并没有尝试其他浓度的NAA与6-BA共同对栝楼丛生芽诱导培养。
此次试验主要借鉴兰伟等经验,采用栝楼瓶苗(江西农科院)为材料,用不同浓度NAA与6-BA配比组合筛选适宜的栝楼增殖培养基。
2.材料与方法:
2.1材料
栝楼雌性植株母本瓶苗(来自江西农科院)
2.2方法
2.2.1最佳材料筛选
栝楼瓶苗叶片和茎段分别接于诱导培养基
(1)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;
(2)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;(3)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L;(均含有0.8%琼脂和3%蔗糖)。
PH=5.8-6.0,25℃持续光照培养,以确定增殖的最佳材料。
2.2.2不定芽诱导
将栝楼茎段接于培养基(4)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L;(5)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;(6)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/L;(7)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;(8)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L(培养基内均含蔗糖3+0.8%琼脂)25℃,持续光照培养,以获得栝楼不定芽。
2.2.3不定芽增殖
将栝楼不定芽接于培养基(9)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;(10)MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.15mg/L;(11)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L;(12)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L;(13)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L;(14)MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L;(15)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L;(16)MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.15mg/L(均含有0.8%琼脂和3%蔗糖)。
PH=5.8-6.0,25℃持续光照培养,以获得栝楼茁壮苗。
为鉴定不同培养基对栝楼茎段的增殖稳定性,此实验将做3次重复来证明。
3.结果分析
3.1最佳材料筛选
在培养基
(1)、
(2)、(3)中培养20天后,观察外植体生长情况见表1.
表1:
不同培养基中栝楼茎段、叶片的生长情况
外植体
培养基号数
激素(mg/L)
6-BANAA
接种数(株,片)
生长情况
茎段
1
0.50.1
5
均有不定芽
茎段
2
1.00.2
5
均有不定芽
茎段
3
1.50.1
5
均有不定芽
叶片
1
0.50.1
5
无明显反应
叶片
2
1.00.2
5
无明显反应
叶片
3
1.50.1
5
无明显反应
从表1可以看出,栝楼茎段在各种不同浓度的培养基中均有不定芽的形成(图A1),并且时间较短,而栝楼叶片在不同浓度的培养基中均只形成愈伤组织,而且40天后依旧没有不定芽的形成(图A2),所以栝楼茎段为最佳繁殖外植体材料。
A1A2
图A1:
20天后,栝楼茎段在培养基中的反应情况,
图A2:
40天后,栝楼叶片在培养基中的反应情况
3.2不定芽的诱导
将栝楼瓶苗茎段切成0.5cm左右的小段,分别接到表2所示的不同浓度激素配比组合的培养基中,观察诱导情况见表2。
表2:
不同培养基中栝楼茎段的不定芽诱导情况
培养基号数
激素(mg/L)
6-BANAA
接种数
丛生芽数(每个外植体)
丛生芽高度
(cm)
4
0.50.05
5
5-8
1-5
5
0.50.1
5
6-10
3-6
6
0.50.15
5
5-9
3-8
7
1.00.1
5
15-24
3-5
8
1.50.1
5
20-28
3-4.5
从表2中可看出,在激素6-BA为0.5mg/L时,随着培养基中NAA的浓度增大,不定芽的高度也增加(图B1和图B2),但当NAA为0.15mg/L时,丛生芽表现纤细(图B2),而且增殖率都很低。
在激素NAA为0.1mg/L时,随着6-BA的浓度增加,增殖率增加,图B3中,每个愈伤组织上均有3-5株丛生芽,图B4中,每个愈伤组织上均有4-6株丛生芽,并且每株的高度差距不大。
B1B2
B3B4
图B1:
20天后4号培养基中栝楼茎段的变化;图B2:
20天后6号培养基中栝楼茎段的变化;图B3:
20天后7号培养基中栝楼茎段的变化;图B4:
20天后8号培养基中栝楼茎段的变化。
3.3不定芽增殖
将瓶中不定芽切成0.5cm左右小段,接于表3所示系列培养基中,在相同培养条件下,20天后观察生长情况如表3所示。
表3:
不同培养基中栝楼茎段的增殖及生长情况
培养基号数
激素mg/L
6-BANAA
接种数
增殖倍数
外植体生长情况
9
0.50.1
5
1-2
丛生芽,图C1
10
0.50.15
5
1-2
丛生芽少,苗多高而纤细图C2
11
1.00.1
5
3-5
丛生芽较多,分化情况不稳定
图C3
12
1.00.15
5
3-4
分化情况与上组差不多,苗多高矮不一图C4
13
1.50.1
5
4-6
丛生芽多,苗高度较整齐,粗壮,深绿,图C5
14
1.50.15
5
3-5
丛生芽多,但多出现高矮不一的情况图C6
15
2.00.1
5
3-5
丛生芽较多,但出现分化不均匀的状况图C7
16
2.00.15
5
2-4
丛生芽较少,部分出现生根的现象图C8
C1C2
C3C4
C5C6
C7C8
图C1是9号培养基中栝楼茎段生长情况,图C2是10号培养基中栝楼茎段生长情况,图C3是11号培养基中栝楼茎段生长情况,图C4是12号培养基中栝楼茎段生长情况,图C5是13号培养基中栝楼茎段生长情况,图C6是14号培养基中栝楼茎段的生长情况,图C7是15号培养基中栝楼茎段生长情况,图C8是16培养基中栝楼茎段生长情况。
从表3可以看出,(9)-(13)培养基中随着6-BA的浓度增高,栝楼茎段丛生芽越多,(9),(11),(13),(15)号培养基中,每株分化苗的高度差异不是很大,大约均在1-2cm左右,(10),(12),(14),(16)号培养基中的苗高度均比单数号培养基中的苗高,而且这些培养基中的分化苗高度差距较大高的可达9cm,矮的只有2cm左右,并且在(16)号培养基中发现生根的现象,从而可见较高浓度的NAA使得分化苗生长不均匀,还有促使生根的效果,在相同NAA浓度的培养基(9)、(11)、(13)、(15)中,6-BA浓度越来越高,但是(15)号中的丛生芽数量并不及(13)号中的多,从而看出过高浓度的6-BA对栝楼茎段的分化起到抑制的作用,从表3整体看来,栝楼茎段的增殖与生长是在激素6-BA与NAA共同作用下完成的,而恰当的激素浓度配比能使增殖与生长达到最佳的状态。
不定芽增殖的3次重复实验都获得相似的实验结果如表4(相同培养条件下每次20瓶,培养天数20天)。
表4:
相同培养条件下3次重复实验增殖倍数比较
激素mg/L6-BANAA
接种数(株)
第一次增殖倍数
第二次增殖倍数
第三次增殖倍数
0.50.1
5
1.2
1.6
1.4
0.50.15
5
1.4
1.2
1.4
1.00.1
5
4.2
4.0
3.8
1.00.15
5
3.2
3.4
3.4
1.50.1
5
5.2
5.4
5.2
1.50.15
5
4.2
3.8
4.0
2.00.1
5
3.6
3.4
3.8
2.00.15
5
2.8
3.0
3.0
4.讨论与结论
兰伟等学者将分化的丛生芽在相同的培养基(含4.0mg/L6-BA和0.2mg/LNAA的MS培养基)上继代培养,20d后,植株高达约3.0cm,形成无根试管苗。
平均丛芽数为4.3,与本次试验不同的是激素浓度上出现很大差异,这可能是不同地域生长的栝楼体内所含的激素不同,实验发现,以茎切段为外植体诱导栝楼愈伤组织的效果较好,转接后能迅速形成丛生芽;用叶片的培养的不仅效果不明显而且培养周期十分长。
另外,本次试验发现,高浓度的NAA还可导致生根现象。
由于时间关系,此次试验只得到栝楼培养的最佳材料为茎段,最佳增殖培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.8%,增殖倍数5.2倍,周期为20天,在培养基中增殖稳定。
本次试验提供了不同浓度NAA与6-BA对栝楼增殖培养的影响,并有具体数据,对于生根以及炼苗还需进一步的研究。
另外,本次试验仅比较了6-BA与NAA两种外源激素在栝楼组织培养中的作用,而其他激素(如KT、IAA等)在栝楼组织培养中的作用则有待进一步地研究。
参考文献
[1]杨延桢,高敬东,杨明霞,等.栝楼的经济价值及栽培技术要点[J].甘肃农业科技,2003(10):
48-49.
[2]杨晓伶,金关荣,杨端鹏,等.栝楼的组培快繁技术研究[J].中药材,2006,29(11):
1129-1130.[3]兰伟,蔡健,朱茂英,等.栝楼的组织培养与快速繁殖[J].植物
资源与环境学报,2006,15(4):
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(2):
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[5]国家药典
委员会.中华人民共和国药典[S].北京:
化学工业出版社,2005:
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[6] 尹艺林,吴永超.栝楼的组织培养研究[J].皖西学院学报,2005,21
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[7]朱勤,杨六萍,杨许琴,等.食籽栝楼离体快繁的初步研究[J].
安徽农业科学,2006(16):
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[8]宋振巧,王洪刚,王建华,等.栝楼的研究进展[J].山东农业科学,2005(5):
72-75
[9]王曼,史素霞.具有开发价值的观果植物栝楼[J].北方园艺,2007(12):
166.
致谢
经过半年的忙碌和工作,本次实验已经接近尾声,作为一个本科生,由于经验的匮乏,难免有许多考虑不周全的地方,如果没有刘老师师的督促指导,以及一起实习的同学们的帮助,这次实验能做到到这一步是不可能的。
在这里首先要感谢我的导师刘红美博士。
刘老师平日里工作繁多,但在我做试验的每个阶段都给予了我悉心的指导。
除了敬佩刘老师的专业水平外,他的治学严谨和科学研究的精神也是我永远学习的榜样,并将积极影响我今后的学习和工作。
其次要感谢和我一起实习同学们,在实习过程中他们给了我太多帮助。
如果没有他们的帮助,此次试验做起来将变得非常困难。
感谢医学生物技术教研室和我的母校—贵阳医学院大学五年来对我的大力栽培。
感谢和我一起生活的室友,是你们让我们的寝室充满快乐与充满激情,“君子和而不同”,我们正是如此!
愿我们以后的人生都可以充实、多彩与快乐!
感谢我的家人——我的父母。
没有你们,就不会有今天的我!
我一直感恩,感恩于我可以拥有一个如此温馨的家庭,让我所有的一切都可以在你们这里得到理解与支持,得到谅解和分担。
我爱你们,爱我们的家!
一个人的成长绝不是一件孤立的事,没有别人的支持与帮助绝不可能办到。
我感谢可以有这样一个空间,让我对所有给予我关心、帮助的人说声“谢谢”!
今后,我会继续努力,好好工作!
好好学习!
好好生活!
!
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