安捷伦5975C GCMS使用与定量操作.docx

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安捷伦5975CGCMS使用与定量操作

1目的

为规范本化学检测中心气相色谱质谱联用仪（GC-MS）的使用，从而确保仪器不受误操作损坏和伤害实验人员并得到可靠检测数据，故制定本规程。

2范围

本程序文件适用于本分析测试中心的美国Agilent7890A-5975C。

3设备参数

m/z范围

10-1050amu

灵敏度

EI全扫描1pg八氟萘S/N400:

1

分辨率

单位质量分辨

扫描速度

最高12,500amu/sec

质量稳定度

±0.1amu/48小时

4操作程序

4.1注意事项

（1）老化柱子

分段老化。

按温度从低到高分段，程序升温老化。

这是最好的老化方法。

如HP-5柱，5-6℃/min至250℃，反复数次；再升至280℃，反复数次；接到MS上看基线情况。

270℃以后基线提高为正常。

再老化到300℃半小时。

无论何种方式，载气必须充足。

（2）进样口用红色或灰色隔垫，可减少隔垫流失。

（3）GC/MS接口处必须用vesper垫圈（5062-3508）。

注意安装方向（大的一端朝向质谱）。

（4）新柱子安装时无方向性,但一旦使用过,再不要改变方向。

（5）保存柱子时注意将两端密封好,避免水和空气破坏柱子内涂层。

4.2仪器配置

4.2.1在操作系统桌面双击Config/配置图标进入仪器配置界面

4.2.2点击所要配置的仪器

4.2.3配置MSD及GC：

在出现的画面中输入仪器名称、序列号等信息后，在质谱仪一栏中选择MSD的型号，并输入MSD的IP地址，选择DC极性（标注于MSD侧板的中部金属上部）；同样配置GC后点击确定退出。

配置完成后桌面上应出现“Instrument＃1”和“Instrument＃1DataAnalysis”的图标（名称由配置时输入的仪器名称决定）。

4.3开机

4.3.1打开载气钢瓶（He）控制阀，设置分压阀压力至0.5Mpa

4.3.2打开计算机，登录进入WindowsXP（SP2）系统，初次开机时建议使用5975的小键盘LCP输入IP地址和子网掩码,并使用新地址重启,否则安装并运行BootpService

4.3.3打开7890GC、5975MSD电源（若MSD真空腔内已无负压则应在打开MSD电源的同时用手向右侧推真空腔的侧板直至侧面板被紧固地吸牢），等待仪器自检完毕

4.3.4在桌面双击“Instrument#1”图标，进入MSD化学工作站

4.3.5在InstrumentControl/仪器控制界面下，单击View/视图菜单，选择TuneandVacuumControl/调谐及真空控制进入调谐与真空控制界面,在Vacuum/真空菜单中选择VacuumStatus/真空状态，观察真空泵运行状态。

4.3.6如果仪器真空泵配置为分子涡轮泵，状态显示涡轮泵转速TurboPumpSpeed/涡轮泵转速应很快达到100Percent，否则，说明系统有漏气，应检查侧板是否压正、放空阀是否拧紧、柱子是否接好；（如果仪器为5975扩散泵配置，请咨询现场工程师的讲解.状态显示压力Pressure应很快达到100mToor左右，否则，说明系统有漏气，应进行上述检查）。

调谐调谐应在仪器至少开机2个小时后方可进行，若仪器长时间未开机或仪器为5975扩散泵配置，为得到好的调谐结果建议将此时间延长至4小时。

1）首先确认打印机已连好并处于联机状态。

2）在操作系统桌面双击Instrument#1图标进入工作站系统。

3）在上图InstrumentControl/仪器控制界面下，单击View/视图菜单，选择TuneandVacuumControl/调谐及真空控制进入调谐与真空控制界面。

4）单击Tune/调谐菜单,选择Autotune/自动调谐或Gainautotune/增益自动调谐,进行调谐,调谐结果自动打印。

5）一般根据需要选择所要进行的调谐，Autotune/自动调谐为最大灵敏度调谐，而Standardspectratune/标准谱图调谐为标准谱图调谐，其与Autotune/自动调谐相比灵敏度稍低，但与谱库中标准谱图的匹配度更高，适合于谱库检索与定性，Gainautotune/增益自动调谐可消除由于EM老化造成设定相对电压时EM放大倍数变化的问题，从而保证信号的稳定性。

选定调谐后仪器将自动完成整个调谐过程（约3～5分钟）并将调谐结果由打印机输出。

调谐文件会自动保存并覆盖相应文件。

如果要保存手动调谐中的参数如：

修改灯丝1为灯丝2时注意要先将调谐文件保存。

要手动保存或另存调谐参数，从file/文件中执行操作。

6）点击view/视图然后选择instrumentcontrol/仪器控制返回到仪器控制界面。

注意:

自动调谐文件名为ATUNE.U标准谱图调谐文件名为STUNE.U其余调谐方式有各自的文件名.每次调谐之后如果不改名另存则会自动覆盖上次相同方式的调谐文件.7890A配置编辑:

点击“Instrument/仪器”菜单,选择“GCConfiguration…/编辑GC软配置”进入如图所示画面。

在“Connection/连接”画面下，输入GCName：

如“GC7890”；可在Notes处输入7890A的配置，如“7890GCwith5975CMSD”。

点击“GetGCConfiguration/获得GC配置”按钮获取7890A的配置。

4.3.7ALS/自动液体进样器配置设定

点击“Configuration/配置”按钮,点击“ALS”子按钮，输入注射器的体积，如“10ul”；选择溶剂清洗模式：

如A，B。

---若无ALS,则无此内容。

4.3.8模块配置设定

点击“Modules/模块”按钮进入下图所示画面，点击下拉式箭头，分别选择进样口、检测器、PCM等的气体类型。

4.3.9柱参数设定

点击“Columns/色谱柱”按钮，进入柱参数设定画面。

点击“1”处，进入“安装色谱柱”画面。

如果要安装的色谱柱不是Agilent或J&W的，请自行编辑添加，如果是，则点击“使用清单替换”进入目录。

查找并选中型号匹配的色谱柱点击“确定”钮，则该柱被加到目录中，并选中它，点击“完成”返回到柱配置界面：

接下来点击该柱后面对应下拉式箭头选择连接的进样口、检测器及加热类型。

如：

FrontInlet/前进样口、FrontDetector/前检测器、MSD/真空、Oven/柱箱。

同样方法添加其它柱子。

4.3.10其他项设定点击“Miscellaneous/其他”进入其他项设定，如：

选择压力单位：

psi；输入柱子的最大耐高温：

如：

325℃（19091S-433柱）。

将辅助加热器类型配置为MSDTransferline/MSD传输线；若阀用于进样或DEANSWITCH切割，在ValveType/阀类型区域选择阀号，并选择类型为“SwitchingValve/开关阀”,（仪器上有几个阀就选几个,与TimeTable配合使用进行阀进样/切换）。

点击“Ok”退出配置画面并保存方法。

4.3.11数据采集方法编辑

开始编辑完整方法从“Method/方法”菜单中选择“EditEntireMethod/编辑完整方法”项，选中除“DataAnalysis/数据分析”外的三项，点击“OK/确定”，进入下一画面。

编辑关于该方法的注释：

点击“OK/确定”进样器选择如果未使用自动液体进样器7683B，则在“SelectInjectionSource/Location/进样方式”画面中选择“Manual/手动”，使用则选择“GCALS”。

点击“Ok/确定”，进入下一画面。

4.3.12柱模式设定

进入柱模式设定画面，点击“1”处进行柱1设定，然后选中“On/打开”左边方框；选择控制模式，“flow/流速”或“pressure/压力”。

如：

选择“flow/流速”，输入1.0，点“Apply/应用”,则设定的流速为1.0ml/min。

4.3.13进样器参数设定

进入进样器参数设定画面。

点击“FrontInjector/前进样器”或“BackInjector/后进样器”按钮，进入参数设定画面。

选中进样体积（如1ul）PreInj—进样前，PostInj-进样后；Volume（ul）—清洗的体积；SampleWash—用样品洗针次数；SolventAWash—溶剂A洗针的次数；SolventBWash—溶剂B洗针的次数；Pumps—赶气泡抽吸的次数，5-6次左右即可。

阀参数设定点击“”图标，进入阀设定画面。

若仪器安装有阀而且该阀用于进样或DeanSwitch切换，应在仪器配置界面将“Type/类型”配置为“SwitchingValve/开关阀”,在此方法编辑界面将初始状态设为：

Off。

（仪器上有几个阀就选几个,与TimeTable配合使用进行阀进样）。

4.3.14分流不分流进样口参数设定

进入进样口设定画面。

点击“SSL-Front/SSL-前”或“SSL-Back/SSL-后”按钮进入毛细柱进样口设定画面。

点击“Mode/模式”右方的下拉式箭头,选择进样方式为不分流方式“Splitless/不分流”或“Split/分流”。

在空白框内输入进样口的温度（如250℃），然后选中左边的所有方框；选择“SeptumPurgeFlowMode/隔垫吹扫流量模式”为“Standard/标准”，并输入隔垫吹扫流量：

如：

3ml/min。

对于特殊应用亦可选择“Switched/可切换的”，进行关闭。

在“PurgeFlowtoSplitVent/分流出口吹扫流量”下边的空白框内输入吹扫流量（如0.75min后60ml/min），选择分流方式,则要输入分流比或分流流量。

4.3.15柱温箱温度参数设定

进入柱温参数设定。

在空白表框内输入温度，选中“OvenTempOn/柱箱温度为开”左边的方框；Ramp---升温阶次；℃/min—升温速率；Holdmin—保持的时间；输入柱子的平衡时间（如1min）；下为一程序升温的例子：

75℃（0.5min）----20℃/min----190℃（0min）

4.3.16AUX参数设定

进行辅助参数设定。

在辅组加热区设定质谱的接口温度如280℃时间表设定点击“”图标，进入时间表参数设定，在“Time/时间”下方的空白处输入时间（如0.01min）,点击“Eventtype/事件类型”下方的下拉式箭头,选中事件（如，阀）；点击“Position/位置”下方的下拉式箭头,选中事件的位号（如阀1）；点击“Setpoint/设定值”下方的下拉式箭头,选中事件的状态（如打开）。

输入完一行，依此输入多行。

点击“OK/确定”钮。

4.3.17信号参数设定

进入信号参数设定画面。

点击“SignalSource/信号源”下方下拉式箭头，选择“FrontSignal/前部信号”，本例中为FID；点击“DataRate/MinPeakWidth/数据采集频率/最小峰宽”下方的下拉式箭头，选择数据采集数率（如5HZ），选择“SaveData/保存”，存储所有的数据。

进行配置浏览。

点击“OK/确定”，进入下一画面。

若GC包含有其他检测器且正在使用,在是否需要实时绘图所使用的信号“Display/显示”前打钩，然后点击“OK/确定”,如果没有GC检测器,直接按“OK/确定”跳过此画面。

选择所需的质谱调谐文件，然后点击“OK/确定”

4.3.18编辑扫描方式质谱参数编辑溶剂延迟时间以保护灯丝，调整倍增器电压模式（共有三种模式：

绝对值，相对值和增益因子），选择要是用的数据采集模式，如扫描（Scan）、选择离子（Sim）等。

点击“ScanParameters/扫描参数”编辑扫描参数根据分析需要设置扫描质量范围。

如果对样品不很熟悉不必分组：

设置溶剂延迟时间

选择采集模式

调整倍增器电压

根据分析需要设置阈值和采样速率，阈值的值会影响到基线，设得过大，可能看不到基线甚至有时候看不到分子离子等较低的碎片离子，过小则基线太杂，采样率通常根据扫描范围来定，使Scans/Sec的值达到3左右为好。

4.3.19设置实时绘图参数

然后点击“Close/关闭”完成扫描参数设定。

编辑SIM质谱参数编辑SIM方式参数点击“SIMParameters/SIM参数”编辑选择离子参数

编辑SIM参数：

停留时间（dwelltime）和分辨率参数适用于组里的每一个离子。

在Dwell列中输入的时间是消耗在选择离子的采样时间。

它的缺省值是100毫秒。

它适用于在一般毛细管GC峰中选择2-3个离子的情况。

如果多于3个离子，使用短一点的时间（如30或50毫秒），

编辑完SIM参数后，在“EditSIMParams”画面点击“OK”

4.3.20加入组

加入所选离子

采集数据从Method/方法菜单下点击RunMethod/运行方法来运行一个方法。

若仪器配有自动进样器设定进样瓶号点击“OKandrunmethod”则将自动完成数据的采集若为手动进样则依提示在GC面板上先按“PreRun”键，待仪器准备好后进样的同时按GC面板上的“Start”键，以完成数据的采集。

依次输入文件名；操作者；样品名等相关信息。

注意1：

当工作站询问是否取消溶剂延迟时,回答NO或不选择。

如果回答YES则质谱开始采集，容易损坏灯丝。

数据分析要想进行谱库检索您首先要购买并安装好商业谱库（如NIST05谱库）或已建立好自己的用户谱库。

双击桌面上的“Instrument＃1DataAnalysis”图标，打开MSD的DataAnalysis

4.3.21调入数据文件

选择所要处理的数据文件，然后点击“OK/确定”，本底扣除。

执行本底扣除操作。

经过扣除本底的文件以原文件名保存在DATA/BSB文件夹中。

在希望扣除本底的区域，按住鼠标右键拖拽或双击右键，上述为整体扣除背景，如果想扣除单点背景，则可使用工作站的谱图相减功能，即按下面方式得到化合物的质谱图后，在右键双击峰。

附近基线的位置得到本底的质谱图，然后在菜单Spectrum下选择Subtract即可得到扣除本底后该化合物的质谱图。

用鼠标右键在目标化合物TIC谱图区域内拖拽可得到该化合物在所选时间范围内的平均质谱图，右键双击则得到单点的质谱图。

选择谱库：

在Spectrum菜单下选择SelectLibrary。

按“Browse/浏览”在Database目录下选择所需的谱库，选中谱库名后点击“OK/确定”。

在所示的总离子流图的峰位置双击右键得到该保留时间的质谱图。

在得到的质谱图区域任意位置双击鼠标右键，即可得到该谱图在所选谱库中的检索结果将结构式加注在质谱图上。

在上图选择合适的检索结果，单击“Done/完成”，然后在质谱图的目标位置按住鼠标右键拖拽一个矩形即可将该化合物的结构式加注到谱图上。

4.3.22百分比报告

在Method/方法下调入采集此数据的方法,然后积分。

通过点击“AutoIntegrate/自动积分”或“Integrate/积分”得到积分结果，如果对自动积分的结果不满意，可以到Chromatogram/色谱图菜单选择“MsSignalIntegrationParameters/质谱信号积分参数”更改积分参数，然后选择“Integrate/积分”，直到得到满意的积分结果。

选择百分比报告：

要想得到好的积分结果，积分参数的优化非常重要。

如threshold（斜率灵敏度）就直接影响到一个峰的积分起始位置。

4.4外标法定量

调出要制定的标准曲线中最高浓度的数据，右键双击要定量的峰，选择合适的目标离子和参考离子（或参考文献、标准等选取）。

使用EIC功能提取目标离子和参考离子。

优化积分参数，确保目标离子和参考离子都能够得到好的积分：

设定定量参数：

点击“Calibrate/校正”菜单，选择第一项“Setupquantitation/设置定量”进入定量设置界面。

为定量曲线取个名字，并选择合适的曲线类型等，点击确定进入下一界面。

点击“insertabove/插入上方”进行定量离子的编辑。

可用左键画框的方式将要定量的第一个峰放大，然后右键双击得到质谱图。

在“name”框中输入该化合物的名称，然后将鼠标移至目标离子，左右键同时点击将其选取到定量表中，使用同样方法选取参考离子点击“Save”完成对该化合物的编辑，同时进入另一个化合物的编辑。

等所有化合物设定完成后，点击Exit退出编辑界面：

再次点击Exit，在弹出的对话框上选择“Yes/是”进行定量校正。

输入该校正点化合物的浓度，在level栏里面输入“1”，点击“DoUpdate”完成第一个点的校正，弹出的对话框显示的是校正过的各化合物的曲线等信息，如果有的化合物浓度不一致，在此可修改。

相对于第一个校正点来说，后面的校正点的加入就简单得多了，点击OK并选择Save退出校正界面。

调出第二个校正点的数据，在“Calibrate/校正”菜单下选择“Update/升级”，在弹出的对话框中选择“Updateonelevel/升级一个级别”，在选择Yes进入第二个级别的校正，只要输入该级

别化合物的浓度以及级别“2”然后点击“DoUpdate”即可。

同样方法完成所有级别的校正。

*

注意校正完成后要及时将方法保存。

校正曲线是与分析方法保存在一起的。

要对未知样品进行定量，需调出该数据，然后在“Quantitate/定量”菜单下选择“Caculate/计算”即可得到结果。

4.5关机

在操作系统桌面双击Instrument#1图标进入工作站系统进入TuneandVacuumControl/调谐和

真空控制界面选择“Vent/放空”。

在跳出的画面中点击“OK/确定”进入放空程序。

MSD的接口温度由7890控制，在E02版本以上工作站中选择放空后会自动设置成OFF停止加热，也可以在放空前调用一个预先编好的GC关机程序，将接口温度设置成OFF，避免烫伤!

如果是涡轮泵系统，需要等到涡轮泵转速降至10percent以下，同时离子源和四极杆温度降至100℃

5仪器维护

5.1每天需要检查的项目：

●仪器的清洁：

是否无灰尘？

●气体：

钢瓶气压是否大于2Mpa？

●真空：

手动调谐，确认N，O，H2O峰的相对丰度是否在指定范围？

●隔垫：

进样次数是否大于150次？

●AUL注射器：

注射器拉杆是否顺畅？

5.2每周需要检查的项目：

●MS状态：

自动调谐，确认PFTBA的m/z的69，219，502峰的情况；

●玻璃衬管：

石英棉、衬管是否污染？

O型圈是否粘在称管上？

●机械泵：

泵油液是否在70%-90%范围内？

5.3每月需要检查的项目：

●PFTAB是否需要添加？

●灯丝是否需要更换？

●离子源是否需要清洗？

●电子倍增器是否正常？

6相关记录

《仪器设备保养、维护记录表（GC/MS）》ZLJL/510－03

制定

审核

批准