血栓弹力图标准操作规程修订版.docx

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血栓弹力图标准操作规程修订版

一.方法原理.............................................................................................................2

二.方法确认可（包括线性、不精密度、检出限、灵敏度和特异性）...........................................................................................................................6

三.TEG®实验检测取血要求.......................................................................................11

四.仪器和试剂.........................................................................................................12

五.TEG®质控检测操作流程.....................................................................................13

六.TEG®普通杯检测操作流程....................................................................................18

七.TEG®血小板图检测操作流程.................................................................................21

八.参考区间（高岭样品）.........................................................................................25

九.临床意义...............................................................................................................26

十．TEG日维护....................................................................................................31

十一．TEG月维护..................................................................................................33

一方法原理

承载血标本的测试杯以作4°45'的角度和每9秒一周的速度均速转动，一旦血栓形成，置于血标本检测杯中的金属探针受到标本形成的切应力作用，随之出现左右旋动，金属针在旋动过程中由于切割磁力线而产生电流，给电脑软件处理后，便形成TEG曲线。

TEG参数图解凝血弹性描记仪（TEG）参数解析

4SP时间（测量从反应开始到弹力图曲线出现分叉的时间）

1、SP=Splittime

2、纤维蛋白原未被激活前的时间。

4R时间（从血样开始检测至描记图幅度达2mm所需的时间）：

1、R时间是血样放在TEG分析仪内到第一块纤维蛋白凝块形成之间的一段潜伏期。

2、R时间因使用抗凝剂或凝血因子缺乏而延长，因血液呈高凝状态而缩短。

3、R延长能通过注射FFP（新鲜的冰冻血浆）而纠正。

（FFP含有丰富的凝血蛋白）

4K时间（从R时间终点至描记图幅度达20mm所需的时间）：

1、评估血凝块强度达到某一水平的速率（20mm幅度）；

2、通过高纤维蛋白原水平和较小程度地通过血小板功能来缩短K，而影响血小板功能及纤维蛋白原的抗凝剂能延长K；

3、K时间延长通过注射cryo（冷沉淀）与FFP来纠正；

4Alpha角度（从血凝块形成点至描记图最大曲线弧度作切线与水平线的夹角）：

1、血凝块动力学特性；

2、影响Alpha角度的因素与K时间相同（见上）；

3、参数Alpha角度与K时间密切相关，两者都是反映血凝块聚合的速率。

但两者之间又存在区别，在凝血处于极其低凝状态时，血凝块强度的最终强度是幅度达不到20mm，此时K不能被定义。

因此，Alpha角度比K时间更全面、更易理解。

4、6个单位的cryo使α增加9.4°。

4最大幅度MA（描记图上的最大幅度，即最大切应力系数）：

1、MA反映了正在形成的血凝块的最大强度或硬度及血凝块形成的稳定性；

2、

MA主要受纤维蛋白原及血小板两个因素的影响，其中血小板的作用要

比纤维蛋白原大，血小板质量或数量的异常都会影响到MA值；

3、10个单位血小板可使血小板计数增加40,200±31,400/mm3,MA增加了

13.2mm。

4A（任一时刻描记图曲线两点间的距离）：

1、用来监测任一时刻曲线两点间的扫描宽度，是血凝块强度或弹性函数，A值用单位mm来计量；

2、MA值在确定前与A值相等；

3、MA值确定后A值测量血凝块溶解的信息。

4TMA时间（从凝血开始至MA值确定所需用的时间）：

1、TMA=TimeToMA，血凝块动力学特性的综合测量；

2、TMA包含血凝块的形成速率，评估形成稳定血凝块所需用的时间。

4G（血凝块强度，即最大切应力强度）：

1、将A值进行转换使其能实际测量血凝块强度（G），用单位d/sc来计量；

2、G值在MA值确定后的同时也被确定。

3、G=5000A/（100-A），描述Clotfirmness.

4EPL（预测在MA值确定后30分钟内血凝块将要溶解的百分比）

1、EPL=EstimatePercentLysis;

2、EPL=100（MA-A30）/MA;

4CL30（测量在MA值确定后30分钟内血凝块溶解剩余的百分比）：

1、CL30＜85%意示处于高纤溶状态，即纤溶亢进；应使用抗纤溶药来纠正。

2、CL30=100X（A30/MA）

4LY30（测量在MA值确定后30分钟内血凝块幅度减少速率）

1、LY30＞7.5%意示处于高纤溶状态.即纤溶亢进；应使用抗纤溶药来纠正。

4CI（凝血综合指数）

＜-3低凝-3＜正常＜+3＞+3高凝

4E（弹性常数）

1、E是标准化的G，作为一个弹性常数；

2、EMX是最大振幅时的E；EMX=（100XMA）/（100-MA）；

4TPI（血小板动力学指数）

1、TPI=EMX/K

2、TPI=ThrombodynamicPotentialIndex，血凝块动力潜能指数；

＜6低6＜正常＜15＞15高

4CLT时间（测量从MA值确定后A值达到2mm的时间）

1、CLT=Clotlysistime（也称为TTL=Timetolysis）血块溶解时间。

4LTE时间（CLT的估计值）

LTE=Lysistimeestimate

估计的血块溶解时间（CLT）。

在MA出现后30秒电脑开始计算LTE，并不断更新直到MA出现后60分钟。

如果血块在60分钟之前已溶解，此时LTE为实际血块最终溶解时间。

如果LTE大于3小时，该值显示“>3hrs”。

LTE是根据弹力图的斜率并外推到振幅为2mm计算得到。

4AA%INHIBITION

判断血小板血栓素受体抑制剂对血小板抑制的百分比,如阿司匹林等.

4ADP%INHIBITION

判断血小板ADP受体抑制剂对血小板抑制的百分比,如氯吡格雷等

二方法确认可

（包括线性、不精密度、检出限、灵敏度和特异性）

准确度

为求证TEG的测量准确度，Haemoscope公司进行了一项评估，将TEG5000型分析仪和TEG3000型分析仪的测量性能表现进行对照。

准备40种冷冻干血样。

每种血样被分为两份，同时装载到一校准后的5000型分析仪和3000型TEG仪上。

然后在37摄氏度下，按本手册介绍的检测步骤，用相同的TEG软件同时对两份血样进行测试。

以下四参数就是经这种标准检测测定的。

R（mm）=从血凝开始的距离（时间，以2mm/分钟的速度）

K（mm）=从标准血凝块强度的距离（时间，以2mm/分钟的速度）（20mm振幅）

MA（mm）=血凝块强度最大值（振幅，单位mm）

Angle（deg）=血凝块增长率的斜率

用t测试对检测得到的数据进行分析，这是一种建立在两样本零差别假设基础上，将接受测试的两个相同样本的测试结果进行对照的统计学检验方法。

测验结果证明5000系列TEG的样本测量性能与3000系列分析仪一致。

分析显示，5000系列和3000系列结果在P<0.05，TEG参数R，K，MA和角度没有实际的统计学意义。

并且，两相等血样间的绝对差（见下表）没有超出仪器精确程度允许的误差范围，±1个单位。

下表列出，两种型号仪器的两相等血样的测量结果及标准偏差，两相等血样的差别及标准偏差，t值和2-tail的概率。

参数测量对照同一型血样分成的两相等血样的测量结果对照（血样类型=40）

参数

R（mm）

K（mm）

Angle（deg）

MA（mm）

5000型（血样1量结果±标准偏）

11.5625±1.178

2.1500±0.379

73.9625±2.382

30.6250±1.036

3000型（血样2测量结果±标准偏差）

11.7500±1.276

2.2750±0.423

73.3750±3.06

30.4010±1.261

血样间差别

（血样±标准偏差）

0.1875±0.354

0.1250±0.090

0.5875±0.613

0.2240±1.498

T值

0.68

1.39

0.96

0.87

DF

78

78

78

78

2-TAILP值

0.497

0.168

0.341

0.388

精准度为验证使用本手册推荐的激活剂（Celite,组织因子，凝血酶，DAPTTIN,高岭土--由Haemoscpe公司提供）进行检测的测试精确度，Haemoscpe公司做了以下评估：

按照TEG用户手册介绍的步骤，从5位未发生凝血问题的健康人每人抽取10立方厘米血样。

将每份血样分为8份，使用4台TEG仪器，测试的时间跨度为两天；对加入Haecomscope高岭土的血样，测试时间跨度5天。

对每种活化剂来说，需要被用来处理40个血样。

基于TEG测量数据，对不同活化剂处理的血样来说，TEG参数的精确度可以用变化系数（CV）百分比表示如下：

硅颗粒（品牌名称：

Celite；Haemoscope公司提供）

R

8.7%

K

7.6%

ANG

2.4%

MA

4.1%

组织因子（品牌名称：

Hemoliance；制造商：

Ortho）

RKANGMA

13.1%12.9%2.3%3.3%

凝血酶（品牌名称：

ThrombinSigma，制造商：

Sigma）

RKANGMA

13.2%13.4%3.5%3.8%

高岭土/Sulphatide/磷脂混合物（品牌名称：

DAPTTIN；制造商：

Immuno）

R

12.7%

K

17%

ANG

2.8%

MA

5.0%

高岭土H/Sulphatide/磷脂混合物（品牌名称：

Kaolin；Haemoscope公司提供）

RKANGMA

13.4%4.4%2.8%6.3%

比较而言，TEG测量的参数CV值相对较小，而其他多数凝血测量仪器，CV值要高一些。

正常值范围

Haemoscope在软件中提供了正常值范围参考，在下述表格里可以看到。

样本类型

R

K

ANG

MA

样本量

Celite

10.0—14.0

3.0—6.0

53.0—67.0

59.0—68.0

132

SodiumClitrate+Celite

7.0—13.0

3.0—5.0

61.0—73.0

55.0—65.0

98

原血

31.0—46.0

11.0—21.0

22.0—38.0

47.0—58.0

132

枸橼酸化原血

28.0—46.0

7.0—14.0

31.0—49.0

49.0—59.0

132

组织因子（TF）

4.0—6.0

2.0—4.0

62.0—73.0

61.0—69.0

178

SodiumClitrate+TF

1.5—3.5

2.0—7.0

59.0—75.0

53.0—65.0

41

功能纤维蛋白原水平测试

有20位病人同意加入了这一项研究计划。

这20位病人年龄在22到62之间（平均年龄=34.9±11.9），其中，10位男性，10位女性。

他们的实验室纤维蛋白原水平在34.5和862毫克/分升之间。

这些研究对象不包括已知患有血凝因子不足或血凝缺陷，肝病，或需血液稀释或心肺支路的病患。

在静脉插入导管，将静脉血收集到两个含3.8%柠檬酸纳的4.5cc硅化试管（BectonDickinson，Rutherford,NJ）中。

在37摄氏度温度下将样本在TEG分析仪上运行45分钟。

从第一个试管中取出0.33立方厘米血样，混合20ul的.2MCaCl2对其进行重新钙化，10ul的重组人体组织因子（加快获得MA参数）和4ul的ReoPro（2mg/ml）（EliLilly,Indianapolis,IN）成一个血样，进行MA测量。

重复进行这些分析，最终的MA值（以ReoPro表现的MAR）是多次分析结果的均值。

试管中血样剩余部分用于进行纤维蛋白原水平（使用克劳斯照片光学方法，纽约，长岛，医学实验室自动控制，MLAElectra1600c分析仪）的实验室检测。

对第二个试管中的血样，连续进行两次通常的盐稀释，为的是获得更广范围的纤维蛋白原水平。

按前面描述的方法对稀释过的样本进行相同的样本准备和TEG测试，随匹配样本送实验室分析纤维蛋白原。

最小平方线性回归被用来确定TEGMAR值和测量出的纤维蛋白原水平间的关系。

画出一条回归线对应计算95%的斜角置信区间。

当P<0.05时记录统计学差别。

目前研究证明，通过对经ReoPro处理的血样MA值的测量，能提供对功能性纤维蛋白原的定量评估。

精确度

为证明TEG仪MA值的精确度，Haemoscope公司对经ReoPRo处理的血样MaR进行了以下评估：

按照TEG步骤，从5位未发生凝血问题的健康人每人抽取10立方厘米血样。

按前面介绍的程序，将每份血样分为8份，使用4台TEG仪器进行试验。

这样接收评估试验的ReoPro处理血样共有40个。

基于TEG测量数据，平均值和标准差,95%C.I.及以变化系数（CV）百分比表示的TEG参数MaR精确度表示如下：

均值±标准差别95%C.I.CV

22.8±1.121-254.5%

三TEG®实验检测取血要求

备注：

枸橼酸（蓝盖）抗凝管要求枸橼酸浓度3.2%，肝素化（绿盖）抗凝管要求肝素浓度>14.5IU,每周二、四上午抽血（不需要空腹）

序号

检测项目

开单类型

取血种类

取血要求

采血管

采血量

抗凝时间

1

普通检测

血栓弹力图实验——高岭土

静脉或动脉全血

安静环境，一针见血

枸橼酸（蓝盖）抗凝管

按刻度要求抽满

即刻送达两小时之内检测

2

血小板图检测

血栓弹力图实验——高岭土

静脉或动脉全血

安静环境，一针见血

枸橼酸（蓝盖）抗凝管肝素化（绿盖）抗凝管各一份

按刻度要求抽满

即刻送达两小时之内检测

血栓弹力图实验——氯吡格雷

血栓弹力图实验——阿司匹林

TEG®血栓弹力图实验血样准备描述1枸橼酸化全血血样程序：

备两个注射器，戴上手套，在安静环境下，用一根19G蝶形针，一针见血吸取样血，最初1ml弃用。

另外吸取足量血放在蓝瓶盖的聚丙烯试管内（含有浓度为3.2%的枸橼酸钠），待采血量达到试管要求的刻度时，停止吸取。

将试管封口后上下轻轻翻转3次（切勿用力摇晃），使血与枸橼酸钠混合。

称为枸橼酸化的全血2肝素化化全血血样程序：

备两个注射器，戴上手套，在安静环境下，用一根19G蝶形针，一针见血吸取样血，最初1ml弃用。

另外吸取足量血放在绿瓶盖的聚丙烯试管内（含有肝素浓度>14.5IU），待采血量达到试管要求的刻度时，停止吸取。

将试管封口后上下轻轻翻转3次（切勿用力摇晃），使血与肝素混合。

称为肝素化的全血

四仪器和试剂

TEG检测需要TEG血栓弹力图仪-5000和配套的试剂（Kaolin，AA和ADP）,加样枪（需要10ml,20ml,50ml,100ml,340ml,360ml和1000ml的规格）

TEG血栓弹力图仪结构

1．水平仪：

调平血栓弹力图仪的标准。

2．电源按钮：

打开或关闭电源。

3．加温线：

传递温控模块的信号。

4．杯槽：

装载样品并进行加热。

5．水平调节支撑：

旋转以调平血栓弹力图仪。

6．马达按钮：

按压后马达运行，并有黄灯显示。

7．控制杆：

可移动到LOAD、TEST、EJECT三个位置。

8．杯架：

用来上下移动样品。

9．平台：

用来弹出样品。

五TEG®质控检测操作流程

一．调节水平仪

参照分析仪顶部的水平仪中水泡位置，调节分析仪底部的三个支撑脚（前面两个，后面一个），直到水泡居于中间。

二．基线测试eTest

1）在主界面上点击“TEG”按钮，这是唯一能开始运行样品的界面。

如果这是一天中的第一个样品，一个“Maintenancecheck”栏会随即出现，提示你以下要做的事情：

·调平·运行基线测试eTest·运行LevelⅠ和LevelⅡ质控品

2）点击“Checknow”，出现“Maintenance”对话框。

“Dailymaintenance”子菜单中会出现测出的基线值，可接受的范围为1800～2300。

3）将Lever杆移到Test位置，选择通道，点击“eTest”。

可以选择所有的通道同时进行检测。

4）如果出现信息“Channelnotatequilibrium”或“eTestvalueoffcenter”，则将Lever杆移到Load位置，待分析仪稳定后再进行测试。

5）一旦出现“eTestvalueOK”后，将Lever杆移到Load位置。

如果不能出现该字样，请及时与销售商联系。

6）在TEG1分析仪电源打开的同时，进行其它几台TEG分析仪的基线测试。

7）点击“Done”，然后点击“OK”。

三．运行质控

1对质控品【包括质控1（蓝瓶）和蒸馏水（绿瓶）】进行复温，保证十分钟以上温时间；

2打开电脑及TEG主机的“POWER”键，电脑桌面上双击TEG图标进入TEG专用分析软件；

3下拉菜单中输入默认用户名SiteAdministrator，输入密码teg（小写），点击OK，弹出选择操作者对话框

4点击TemporaryOperator（选中变成蓝色），点击Logon，进入TEG主界面

5点击右上角TEG图标

，进入操作界面。

弹出对话框

6查看TEG主机顶部水平仪，将水平仪内的气泡至于中央。

若不在中央，可以调节主机底部三个支脚；

7点击Checknow，进入eTest界面

8将测试杆移到test位置，每个通道分别运行eTest测试，出现“eTestvalueisOK”表明测试通过后，点击Done，弹出对话框，

把测试杆移回Load位置，点击确定。

注意：

如果不通过可以使用调节笔，调节通道后对应的BASE旋钮，增减基线值，使测试通过。

9上杯操作：

将杯架沿着杯杆往下滑到平台上。

测试杆必须位于Load位置。

将普通杯置于杯架上，将杯架滑到杯杆上部，将一只手放在分析仪顶部，另一只手按住杯架底部的按钮，按压三次，确保金属针已经插入杯盖。

将杯架往下滑到杯杆一半时，两手扶住杯架，用大拇指将杯子压回杯槽中，上杯完成；（质控操作需要在每个通道进行上杯。

）

10向已经上好的杯子中加入20ul的氯化钙；

11在主界面的“QC”菜单下选择批号Lotnumber。

点击“Add”按钮。

12在中键入质控1的批号、有效期后点击Normalvalues按钮，在中按照质控品包装盒盖背后的数值填写，然后点DONE。

13选择一通道，选择样本类型L1，在病人名字处选择质控批号。

其他通道重复相同操作。

14将蒸馏水与质控品瓶盖打开，将蒸馏水全部倒入质控品瓶中，小心不要将水溅出来。

15重新盖上瓶盖，摇晃使其充分溶解后静置5分钟。

注意每个制成的试剂，在室温下最多保存一小时。

16将重构后的质控品，上下颠倒5次，打开瓶盖吸取340μl沿杯内壁向杯中缓缓注入，上升杯架至顶端；

17将Lever杆移到Test位置。

选中加样的通道，按下“Start”

或F10。

18其他通道按相同步骤进行；

19点击Done回到TEG主界面，查看描记图形；

20双击描记图形小图可以最大化图形，直到MA值参数值两面没有星号表示描记已经结束，可以停止。

21点击Stop

或F11停止描记，弹出对话框，选择“是”

22将测试杆从Test位置移回Load位置后，向下压到Eject位置，下滑杯架至台面，再用力压到底，弹出使用后的杯子。

取出扔至黄色垃圾袋中。

23通过观察参数值与正常值区间，判断仪器是否正常运转。

24按上述流程开始下一个通道质控

25质控完成后正常操作样本。

六TEG®普通杯检测操作流程

1复根据患者要进行的测试，对高岭土试剂（紫色）和肝素酶杯（蓝色）进行复温，保证十分钟以上温时间；

2打开电脑及TEG主机的“POWER”键，电脑桌面上双击TEG图标进入TEG专用分析软件；

3下拉菜单中输入默认用户名SiteAdministrator，输入密码teg（小写），点击OK，弹出选择操作者对话框；

4点击TemporaryOperator（选中变成蓝色），点击Logon，进入TEG主界面

5点击右上角TEG图标

，进入操作界面。

弹出对话框

6查看TEG主机顶部水平仪，将水平仪内的气泡至于中央。

若不在中央，可以调节主机底部三个支脚；

7点击Checknow，进入eTest界面

8将测试杆移到test位置，每个通道分别运行eTest测试，出现“eTestvalueisOK”表明测试通过后，点击Done，弹出对话框，

把测试杆移回Load位置，点击确定。

注意：

如果不通过可以使用调节笔，调节通道后对应的BASE旋