进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌编制说明.docx
- 文档编号:4583931
- 上传时间:2022-12-07
- 格式:DOCX
- 页数:13
- 大小:19.85KB
进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌编制说明.docx
《进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌编制说明.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌编制说明.docx(13页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌编制说明
1基本信息
1.1标准草案名称
中文
进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌
英文
Methodforthedeterminationofanaerobic
Sulfite-reducingclostridiainfoodforimportandexport
1.2与国际标准和国外先进标准一致程度情况
等同
修改
非等效
标准号
英文名称
中文名称
1.3任务来源
批准立项的文件名称和文件号
计划编号
2010B377r
1.4制(修)订情况
制订
修订√
替代的标准编号
SN/T0172-2002
1.5起止时间
2010年1月~2011年12月
1.6起草单位
辽宁出入境检验检疫局
1.7起草人
曹际娟、王金玲、张莹、徐君怡、李俊环
1.8专业类别
√1、食品(化妆品)检验;2、卫生检疫;3、动物检疫;4、植物检疫;
5、纺织产品检验;6、轻工产品检验;7、机电产品检验;8、化工、矿产品和金属材料检验;9、管理;10、鉴定;11包装及危险化学品
1.9标准体系表代码
1.10调整情况
无
2背景情况
2.1目的、意义
厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌(AnaerobicSulfite-reducingclostridia)是梭状芽胞杆菌属的一群细菌,而不是一个生物学分类单位。
多指厌氧芽胞杆菌,代表性菌株是致黑梭状芽胞杆菌,其他常见的还有产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、破伤风梭菌等。
此类细菌的主要特征是将亚硫酸盐还原为硫化物,多为有动力的革兰氏阳性菌,可形成芽胞,厌氧生长。
厌氧亚硫酸盐还原菌的孢子在自然环境中广泛存在,通常出现在人和动物的粪便排泄物,废水和土壤中。
与大肠杆菌和其它杆菌不同的是,由于它们的孢子比营养体对物理和化学因子具有更强的抵抗力,所以可以在自然环境中存活很大时间。
因而,通常将他们作为长期污染或间断污染的指示菌。
它们甚至可以抵抗正常水处理所用氯的工作浓度,因此,它们对判断是否已达到控制目的非常有用。
由于此类细菌抵抗力强,即使在经适当加工处理的加工食品中其芽胞仍会存活,条件适宜时又会生长繁殖,造成食品品质降低或腐败,甚至会引起食物中毒的危险。
因此在食品的制备、贮存以及食品加工厂环境卫生控制上颇受重视,作为食品、矿泉水、加工设备卫生、生产环境的卫生状况的评估指标,正确得到越来越广泛的应用。
厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检验采用平板计数法和最近似值(MPN)法,已广泛用于进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检验。
该方法灵敏度和准确性都很高,特别适合在出入境检验检疫实验室中推广。
2.2与国内外相关标准、文献的关系
3编制过程
3.1准备阶段(可选项)
3.2分工情况
3.3标准草案编写情况
范围、规范性引用文件、定义、设备和材料、培养基和试剂、样品的贮存和运输、样品制备、检验步骤与计算、证实试验、附录A、附录B。
主要技术要点是样品经处理后,进行系列稀释,通过平板计数法和最近似值(MPN)法确定样品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的CFU/g(mL)或MPN/g(mL)的量。
3.4征求意见情况(适用于送审稿)
3.5审定情况
(适用于报批稿)
3.6预期的管理目标(适用于规程类标准)或技术指标(适用于方法类标准)
4主要技术内容的确定
4.1厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌——平板计数法
4.1.1实验菌种
产气荚膜梭菌ATCC13124
4.1.2实验样品
鲜鱼、冻牛肉、冻鸡肉、熟鸡肉串、冷冻白菜各25g,分别加入1mL培养24h的产气荚膜梭菌ATCC13124。
4.1.3实验试剂
亚硫酸铁琼脂(北京陆桥100203)、庖肉培养基基础(北京陆桥110121)、牛肉粒(北京陆桥110522)、细菌琼脂粉(北京陆桥100520)、厌氧袋(美国BD)。
4.1.4实验设备
恒温培养箱shellabL120-2、拍击式均质器Interscience400VW、天平BSA2202S-CW、恒温水浴锅DK-8D。
4.1.5实验方法
取产气荚膜梭菌ATCC13124增菌液,从100稀释至10-7,每个稀释度分别取1mL加入到4个无菌平皿中,每个平皿加入约15mL冷却至50℃的亚硫酸铁琼脂培养基,待混合物凝固后,再倾注10mL2%无菌琼脂于已凝固的培养基上作为隔层。
待该隔层凝固后,将制备好的平板每个稀释度2个一组,分别放于35℃、37℃,厌氧培养24h、48h、72h。
表1在不同培养温度、不同培养时间细菌数量
培养温度
35℃
37℃
培养时间
24h
48h
72h
24h
48h
72h
平板计数法CFU/mL
3.0×104
9.2×104
9.2×104
2.0×105
6.8×105
6.8×105
取产气荚膜梭菌ATCC13124增菌液,从100稀释至10-7,每个稀释度分别取1mL加入到2个无菌平皿中,每个平皿加入约15mL冷却至50℃的亚硫酸铁琼脂培养基,待混合物凝固后,再倾注10mL2%无菌琼脂于已凝固的培养基上作为隔层。
待该隔层凝固后,分别放于,于,计算该方法的检测灵敏度。
表2灵敏度实验结果
细菌添加量
平板计数法
10-1
多不可计
10-2
多不可计
10-3
625、650
10-4
66、70
10-5
3、4
10-6
1、0
10-7
0、0
取,放入装有225mL氯化钠胰蛋白胨稀释液的无菌均质袋内,用拍击式均质器拍击1min,制成1:
10样品匀液,进行系列稀释,按照标准8.1平板计数法,进行检测,计算模拟样品中细菌量CFU/g。
表3模拟样品试验结果(平板计数法)
序号
样品名
试验结果CFU/g
1
鲜鱼
3.2×104
2
冻牛肉
2.9×104
3
冻鸡肉
6.5×104
4
熟鸡肉串
4.1×104
5
冷冻白菜
1.0×102
4.1.6结果与分析
通过以上实验结果,厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌在37℃培养48h,菌生长完全,菌落形态明显,在亚硫酸铁琼脂上呈黑色菌落,灵敏度实验结果6.8×105CFU/mL,结果准确、适当。
4.2厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌——最近似值(MPN)法
4.2.1实验菌种
产气荚膜梭菌ATCC13124
4.2.2实验样品
鲜鱼、冻牛肉、冻鸡肉、熟鸡肉串、冷冻白菜各25g,分别加入1mL培养24h的产气荚膜梭菌ATCC13124。
4.2.3实验试剂
亚硫酸铁琼脂(北京陆桥100203)、庖肉培养基基础(北京陆桥110121)、牛肉粒(北京陆桥110522)、细菌琼脂粉(北京陆桥100520)、厌氧袋(美国BD)。
4.2.4实验设备
恒温培养箱shellabL120-2、拍击式均质器Interscience400VW、天平BSA2202S-CW、恒温水浴锅DK-8D。
4.2.5实验方法
取产气荚膜梭菌ATCC13124增菌液,从100稀释至10-7,从每个稀释度中分别吸取1mL稀释样液,接种于9管装有庖肉培养基的试管中,将每个稀释度的试管3个一组,分别放于35℃、37℃,厌氧培养24h、48h、72h。
表4在不同培养温度、不同培养时间细菌数量
培养温度
35℃
37℃
培养时间
24h
48h
72h
24h
48h
72h
最近似值MPN法MPN/mL
2.3×104
4.3×104
4.3×104
2.0×105
2.1×105
2.1×105
取产气荚膜梭菌ATCC13124增菌液,从100稀释至10-7,每个稀释度分别取1mL加入到接种于3管装有庖肉培养基的试管中,分别放于,于,计算该方法的检测灵敏度。
表5灵敏度实验结果
细菌添加量
MPN法
10-1
3管阳性
10-2
3管阳性
10-3
3管阳性
10-4
2管阳性
10-5
2管阳性
10-6
无
10-7
无
取,放入装有225mL氯化钠胰蛋白胨稀释液的无菌均质袋内,用拍击式均质器拍击1min,制成1:
10样品匀液,进行系列稀释,按照标准8.2最近似值(MPN)法,进行检测,计算模拟样品中细菌量MPN/g。
表6模拟样品试验结果(最近似值MPN法)
序号
样品名
试验结果MPN/g
1
鲜鱼
1.5×104
2
冻牛肉
2.3×104
3
冻鸡肉
2.3×104
4
熟鸡肉串
9.1×103
5
冷冻白菜
3.6×102
通过以上实验结果,厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌在37℃培养72h,菌生长完全,培养液混浊、产气、出现异味,灵敏度实验结果2.1×105CFU/mL,结果准确、适当。
5验证情况(适用于方法类标准)
5.1验证单位情况
验证单位
验证人员
验证时间
吉林出入境
检验检疫局
王振国
2011年8月22日-30日
内蒙古出入境
检验检疫局
赵林立
2011年8月22日-30日
黑龙江出入境
检验检疫局
李苏龙
2011年8月22日-30日
山东出入境
检验检疫局
房保海
2011年8月22日-30日
中国检验检疫
科学研究院
赵贵明
2011年8月22日-30日
XXXX年XX月XX日
XXXX年XX月XX日
5.2验证过程
1.验证实验内容
进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌检验方法的验证。
2.验证实验材料
供验证样品为辽宁出入境检验检疫局提供的5种厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌模拟污染食物样品。
实验所用培养基、厌氧袋由辽宁出入境检验检疫局提供;一些常用的化学试剂由验证单位自备。
3.验证实验仪器
电动均质器;电动试管振荡器;恒温箱:
36℃±1℃;恒温水浴箱:
46℃±1℃等。
4.验证实验方法
根据送审标准的方法要求,检测方法按照标准中8检测步骤中规定的方法进行。
5.3验证数据分析
冻鸡肉
山东局
吉林局
黑龙江局
内蒙古局
检科院
平板计数法CFU/mL
2.9×104
3.2×104
3.6×104
2.5×104
2.6×104
最近似值MPN法MPN/mL
2.1×104
2.3×104
2.1×104
2.3×104
2.3×104
分析
对同一种样品冻鸡肉,五家实验室验证结果经复现性分析R<0.45。
5.4验证评价
研究所建立的进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌平板计数法和最近似值(MPN)法,技术路线科学、合理,检测步骤简洁,具有很强的操作性。
验证试验数据表明:
方法的准确度及灵敏度等各项技术指标均达到目前厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌常规检测的技术要求。
方法分析结果准确,再现性良好,是一个行之有效的对厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌进行常规筛选检测的方法,适用于进出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的常规检测。
5.5其他应说明的情况
无
6附加说明(可选项)
6.1宣贯标准的建议
6.2修订和废除现行有关标准的建议
6.3作为强制性标准或推荐性的建议
6.4其他需要说明的情况
6.5参考文献
联系人
曹际娟
联系电话
7
电子邮箱
注1:
本模版表的共性部分为第1章、第2章、第4章和第6章。
注2:
3.4适用于标准草案送审稿,3.5适用于标准草案报批稿,3.6中预期的管理目标适用于规程类标准,3.6中技术指标适用于方法类标准,第5章适用于方法类标准编制说明的编写。
注3:
3.1和第6章为可选项,其余为必填项。
编写日期:
2011年8月31日
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 进出口 食品 中厌氧 亚硫酸盐 还原 芽孢 杆菌 编制 说明