简单染色实验报告.docx
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简单染色实验报告
简单染色实验报告
篇一:
细菌简单染色法
生物实验简单染色
峰峰高中生物组
适用微生物染色原理
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
此法操作简便,适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色,这是因为:
在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时,其分子的染色部分带正电荷),因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。
染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比,在显微镜下更易于识别。
其它情况分析:
常用作简单染色的染料有:
美蓝、结晶紫、碱性复红等。
使用草酸铵结晶紫染色液,染色迅速,着色深,菌体呈紫色。
一|、步骤
1、涂片
1.取一块干净的载玻片,平放,在载玻片中央滴一小滴生理盐水;
2.用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔;
3.将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。
注意:
载玻片要洁净无油迹;滴生理盐水和取菌不宜过多;涂片要涂抹均匀,不宜过厚。
2、干燥
将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。
也可用电吹风低温吹干。
3、固定
手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片,涂面朝上,在酒精灯火焰上通过2~3次。
原理:
加热使细菌细胞的蛋白质凝固,从而固定细菌细胞形态,并使之牢固附着在载玻片上。
注意:
热固定温度不宜过高,否则会改变甚至破坏细胞形态。
4、染色
将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上,滴加染液于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。
染色时间:
吕氏碱性美蓝染色1~2min;石炭酸复红染色约1min;草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗
将细菌涂片上染液倒入废液缸中;手持细菌染色涂片,置于废液缸上方,用洗瓶中自来水冲洗涂片,直至流下的水无色为止。
注意:
水洗时,不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下。
水流不宜过急,过大,以免涂片薄膜脱落。
6、干燥
自然干燥:
平放于室温,自然干燥;
吹干:
用电吹风冷风或低温热风吹干;
吸干:
平放在一张吸水纸上,上面覆盖一张吸水纸,将细菌涂片两面水分吸干。
二、配方
1、吕氏碱性美蓝染液
溶液A美蓝0.6克;95%乙醇30毫升
溶液B氢氧化钾0.01克;蒸馏水100毫升分别配制溶液A和B配好后混合即可。
2、石碳酸复红液:
称取碱性复红10g,研细,加95%乙醇100ml,放置过夜,滤纸过滤。
取该液10ml,加5%石碳酸水溶液90ml混合,即为石碳酸复红液。
再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。
3、草酸铵结晶紫染液
A液:
结晶紫(crystalviolet)1g,95%酒精20ml
B液:
草酸铵(ammoniumoxalate)0.8g,蒸馏水80ml
混合A、B二液,静置48小时后使用。
篇二:
细菌的简单染色和革兰氏染色实验
细菌的简单染色和革兰氏染色实验
实验目的
1.学习微生物涂片,染色的基本技术,掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
、
2.巩固显微镜的使用方法。
基本原理
1.简单染色法:
用单一染料对细菌进行染色的方法。
此法操作简单,适用于一般形态的观察。
在中性,碱性或酸性溶液中,细菌细胞通常带负电荷,所以用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱,和其他染料一样是一种盐,电离时染料离子带正电,易于带负电荷的细菌结合而是细菌着色。
带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
通常的碱性染料除了美蓝外,还有结晶紫,碱性复红,番红等。
细菌体积较小,较透明,如未经染色常不易识别,而经染色后与背景形成鲜明的对比,是易于在显微镜下观察。
2.革兰氏染色法:
将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类,是细菌
上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以将细菌分为G+和G-菌,是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄,交联度低,故用乙醇脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透,结果细菌被脱色,在经复红染色后就成了红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少,经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低,因此细菌仍保留初染时颜色。
革兰氏染色需要四种不同的溶液,碱性染料初染液,煤染剂,脱色剂和复染液。
碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力,即已某种方式帮助染料固定在细胞上,是不易脱落,碘是常用的媒染剂。
脱色剂是被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精。
复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染剂,复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色,从而将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的染色液是复红。
器材
1.活材料,培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。
2.染色液和试剂,碱性美兰,结晶紫,碘页,95%酒精,石炭酸复红,蒸馏水,乙醚-乙醇
混合液,香柏油。
3.器材,废液缸,洗瓶,载玻片,接种杯,酒精灯,擦镜纸和显微镜。
操作步骤
1.涂片,取干净的载玻片与实验台上,在正面边角作记号,并滴一滴无菌蒸馏水与载玻片
中央,灼烧接种杯,待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混均后,在载玻片上涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。
2.干燥,干燥过程最好在空气中自然晒干,为了加速干燥,也可以在微小火焰上方烘干。
烘干后再在火焰上方快速通过3-4次,使菌体完全固定在载玻片上。
但不宜在高温下长时间烤干,否则急速失水会使菌体变形。
3.染色,滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,染色液量以盖满菌膜为宜。
4.水洗,倾去染液,斜置载玻片,用水冲去多余染液,直至流出的水呈无色为止。
5.干燥,用微热烘干或自然晾干。
6.镜检,按显微镜的操作步骤观察细菌形态,及时记录,并进行形态图绘制。
革兰氏染色
各种细菌经革兰氏染色法染色后,能区分成两大类,一类最终染色成紫色,称为革兰
氏阳性细菌G+,另一类被染成红色,称革兰氏阴性细菌G-。
操作步骤
1.涂片,固定。
同简单染色法。
2.初染
滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,水洗。
3.媒染
滴加革兰氏碘液,染1-2min,水洗。
4.脱色
滴加体积分数为95%的乙醇,约45S后水洗;或滴加体积分数为95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇,如此重复2-3次后即水洗。
5.复染
滴加沙皇液(番红),染2-3min,水洗并使之干燥。
6.镜检
同简单染色,并根据呈现的颜色判断该菌属是G+细菌还是G-细菌,也可与已知菌对照。
观察时先用低倍镜观察,发现目的物后用油镜观察。
注意事项
1.涂片所用载玻片要洁净无油污迹,否则影响涂片。
2.挑菌量应少些,涂片易薄,过厚重叠的菌体则不易观察清楚。
3.染色过程中勿使染色液干涸。
用水冲洗后,应甩去玻片上的残水以免染色液被稀释而影
响染色效果。
4.革兰氏染色成败的关键是脱色时间时候合适,如果脱色过度,革兰氏阳性细菌也可以被
脱色而被误认为是革兰氏阴性细菌。
而脱色时间过短革兰氏阴性细菌则会被误认为是革兰氏阳性细菌。
脱色时间的长短还受涂片的薄厚,脱色时玻片晃动的程度等因素的影响。
篇三:
实验1显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用和简单染色
一、实验目的:
1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术;
2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理:
细菌小且透明,当把细菌悬浮于水滴内,由于菌体和背景没有显著的明暗差,用光学
显微镜难以看清它们的形态结构。
所以,先将细菌进行染色,借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色,
这是因为碱性染料电离后带有正电荷,很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料:
1.菌种:
枯草杆菌Bacillussubtilis、大肠杆菌Escherichiacoli、金黄色葡萄球菌Staphyloccusaureus等培养好的细菌斜面;
2.染料和试剂:
美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油
3.器材:
显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤:
1.涂片:
在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水,用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜,涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥:
室温自然干燥
3.固定:
手执载玻片一端,使涂菌一面向上,通过火焰2~3次。
此操作也称热固定,其目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在玻片上。
4.染色:
将涂片置于水平位置,滴加结晶紫染色液(以刚好覆盖涂片薄膜为宜),染色1min左右。
5.水洗:
倾去染液,斜置载片,用自来水的细水流由载片上端流下,不得直接冲洗在涂菌处,直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥:
自然干燥,或用电吹风吹干,也可用滤纸吸干,注意不要檫掉菌体。
7.镜检:
待标本片完全干燥后,先用低倍镜和高倍镜观察,将典型部位移至视野中央,再用油镜观察。
五、注意事项
1.学生使用显微镜固定镜号、位置,填写使用卡,本学期一直使用本台显微镜。
2.不准
擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏
3.镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度。
4.观察标本时,必须依次用低、高倍镜,最后用油镜。
当目视接目镜时,特别在使用
油镜时,切不可使用粗(转自:
小草范文网:
简单染色实验报告)调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。
5.观察时,两眼睁开,养成两眼能够轮换观察的习惯,以免眼睛疲劳,并且能够在左
眼观察时,右眼注视绘图。
6.拿显微镜时,一定要右手拿镜臂,左手托镜座,不可单手拿,更不可倾斜拿。
7.染色过程中勿使染色液干涸。
用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀
释而影响染色效果。
六、实验报告
1.结果
绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图,注明放大倍数、及观察到的颜色。
2.思考题(任选两题)
(1)使用油镜时,为什么必须用香柏油?
应特别注意哪些问题?
(2)油镜与普通物镜在使用方法上有何不同?
对同一微生物制片,用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点?
(3)镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用高倍镜或油镜观察?
(4)涂片在染色前为什么要先进行固定?
固定时应注意什么问题?
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