最新整理凝血四项检查说课讲解.docx
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最新整理凝血四项检查说课讲解
凝血四项检查
APTT
【检验原理】
37℃下,在待检血浆中加入APTT试剂,即以脑磷脂作为血小板的替代物加入贫血小板血浆中,在Ca2+的参与下,使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块,测定凝固所需要的时间,即为待测血浆的APTT。
【样本制备】
1.采血与抗凝:
采血后立即与抗凝剂充分混合,血液与抗凝剂(0.109mmol/L枸橼酸钠)比例为9:
1。
2.离心:
抗凝血以2500xg离心10分钟,用微量移液器吸出待测血浆。
3.保存:
血浆样本应立即测试。
22~24℃条件下保存,应2小时内测定,2~4℃条件下保存,应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热:
开机,按照仪器使用说明书预热,达到要求稳定温度,进入正常工作状态。
2.试剂配制:
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂,将试剂瓶直立在18~25℃中静置30分钟,使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解,勿剧烈振摇。
氯化钙用前应放入仪器37℃预温槽。
3.正常质控血浆制备:
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定:
以半自动高性能血凝仪为例:
①将测试杯置于预温槽中,用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②试剂放相应位置,37℃预温,需混匀放搅拌子。
③将待测血浆100μl(患畜或者质控血浆)加入测试杯,再将APTT试剂100μl加入测试杯,混匀,启动预温时间计时,37℃,5分钟,将测试杯从预温槽移至测试槽。
④使用联动加样器加入氯化钙100μl,仪器自动启动计时器开始计时并自动打印结果。
【正常值参考范围】
犬:
10.0~18.0秒,建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
【检验结果解释】
APTT延长见于FⅧ、FⅨ、FⅪ血浆水平减低。
APTT缩短见于高凝状态、血栓性疾病。
口服避孕药会影响检测结果。
PT
【检验原理】
在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子,使凝血酶原转变为凝血酶,凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块,测定凝固所需要的时间,即为待测血浆的凝血酶原时间(PT)。
PT与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。
【样本制备】
1.采血与抗凝:
采血后立即与抗凝剂充分混合,血液与抗凝剂(0.109mmol/L枸橼酸钠)比例为9:
1。
草酸钠、EDTA、肝素不适于作抗凝剂。
2.离心:
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.保存:
血浆样本应立即测试。
22~24℃条件下保存,应2小时内测定,2~4℃条件下保存,应3小时内测定。
如不能立即测试,应采样后60分钟内分离血浆。
【检验方法】
1.仪器预热:
开机,按照仪器使用说明书预热,进入正常工作状态。
2.试剂配制:
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂,将试剂瓶直立在室温中静置30分钟,使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解,勿剧烈振摇。
3.正常质控血浆制备:
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定:
以半自动高性能血凝仪为例:
①将测试杯置于预温槽中,用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②试剂放相应位置,37︒C预温,混匀需放搅拌子。
③将待测血浆100μl(患畜或者质控血浆)加入测试杯。
④启动预温时间计时,37℃,3分钟,将测试杯从预温槽中移至测试槽中。
⑤使用联动加样器加入试剂100μl,仪器自动启动计时器开始计时进行测试。
记录结果。
【正常值参考范围】
犬:
5.0~15.0秒,建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
质量控制程序:
实验室应建立质量控制程序,使用质控血浆测定。
FIB
【检验原理】
在待检稀释血浆中加入高浓度的凝血酶,使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块,测定凝固所需要的时间,在以参比血浆制作的标准曲线上查得待测血浆的纤维蛋白原浓度,即为待测血浆的纤维蛋白原(FIB)含量。
【样本制备】
1.采血与抗凝:
采血后立即与抗凝剂充分混合,血液与抗凝剂(0.109mmol/L枸橼酸钠)比例为9:
1。
2.离心:
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.稀释:
用咪唑缓冲液按照1:
5比例稀释血浆。
4.保存:
血浆样本应立即测试。
22~24℃条件下保存,应2小时内测定,2~4℃条件下保存,应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热:
开机,按照仪器使用说明书预热,进入正常工作状态。
2.试剂配制:
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂,并放室温静置30分钟,使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解,勿剧烈振摇。
3.定标血浆制备:
以蒸馏水复溶血浆,加入量标识在试剂瓶上。
正常质控血浆制备:
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.FIB标准曲线制备:
以半自动血凝仪为例:
①按下表稀释标准血浆(假设FIB标定液浓度2.57g/L):
比例
标准血浆(μl)
咪唑缓冲液(μl)
总体积(μl)
FIB浓度(g/L)
1:
5
100
400
500
5.14
1:
10
50
450
500
2.57
1:
15
40
560
600
1.72
1:
20
30
570
600
1.28
1:
40
20
780
800
0.64
②每份稀释血浆宜重复测试4次(至少测定2次),求秒数均值。
③进入FIB标定菜单,选录入,将不同稀释度血浆凝固时间均值和FIB浓度输入仪器。
④选计算,按2次确认,标准曲线输入完成并打印。
则检测样本时,同时报告秒数和g/L。
更换试剂批号时应重做标准曲线。
5.测定:
以半自动高性能血凝仪为例:
①将测试杯置于预温槽中,用加珠器在测试杯中放一粒钢珠。
②将5倍稀释血浆100μl(患畜或者质控血浆)加入测试杯,37︒C预温3分钟,将测试杯移至测试槽。
③用联动加样器加入已预温的凝血酶试剂100μl,启动计时器,仪器记录时间并自动打印结果。
【正常值参考范围】
犬:
4.0~14.0秒。
建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
TT
【检验原理】
在待检血浆中加入标定的凝血酶,使纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝块,测定凝固所需要的时间,即为待测血浆的凝血酶时间(TT)。
【样本制备】
1.采血与抗凝:
采血后立即与抗凝剂充分混合,血液与抗凝剂(0.109mmol/L枸橼酸钠)比例为9:
1。
2.离心:
抗凝血以2500xg离心10分钟。
3.保存:
血浆样本应立即测试。
22~24℃条件下保存,应2小时内测定,2~4℃条件下保存,应3小时内测定。
【检验方法】
1.仪器预热:
开机,按照仪器使用说明书预热,达到要求稳定温度,进入正常工作状态。
2.试剂配制:
严格按照标示量加入蒸馏水复溶试剂,将试剂瓶直立在室温中静置30分钟,使用前轻轻旋转试剂瓶至完全溶解,勿剧烈振摇。
3.正常质控血浆制备:
按照质控血浆试剂盒使用说明书。
4.测定:
以半自动高性能血凝仪为例:
①将测试杯置于预温槽中,用加珠器在每个测试杯中放一粒钢珠。
②将待测血浆100μl(患畜或者质控血浆)加入测试杯,启动预温时间计时,37℃,3分钟,将测试杯从预温槽中移至测试槽中。
③使用联动加样器加入试剂100μl,仪器自动启动计时器开始计时进行测试。
报告凝血酶时间。
【正常值参考范围】
犬:
7.0~17.0秒,建议各实验室建立自己的正常值参考范围。
质量控制程序:
实验室应建立质量控制程序,使用质控血浆测定。
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