食品分离技术总结版.docx
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食品分离技术总结版
食品分离技术——提取分离的原理与技术
天然产物天然存在的物质,确切的说生命体动植物、微生物等中的代谢产物
天然产物化学——提取与分离是研究天然药物的起点。
保健食品——以纯天然提取成分为卖点的高附加值产品大蒜素:
大蒜中的活性天然产物(硫代亚磺酸酯),具抗菌的作用(经常吃蒜的人不容易得胃溃疡)over300million$。
深海鱼油——(二十二碳六烯酸)
天然的食品添加剂——果酸、甜味素。
柠檬酸;苹果酸;甜叶菊甙
乌饭树叶山矾研究方法:
1将植物鲜叶用70%稀酒精提取。
2提取物用水混悬后用大孔吸附树脂梯度洗脱。
(甜味跟踪)3甜味部分经过硅胶柱层析、凝胶柱层析等方法分离(甜味跟踪)4单体化合物5光谱鉴定结构。
经前期实验,发现A,B部分有甜味,硅胶TLC。
展开剂:
氯仿:
甲醇:
水=5:
1.5:
0.5
显色:
UV,碘蒸汽
T-2的1HNMR显示其可能为两种二氢查儿酮同分异构体的混合物,但是这两者--用多种常规方法都分离不开
分离方法:
T-2a,T-2b用聚酰胺薄层层析。
展开剂:
甲醇:
水:
乙酸=1:
1:
0.01。
T-2a和T-2b用聚酰胺柱层析分离得到。
化学分类学的意义
从现有的文献看,许多山矾属植物都含有二氢查尔酮葡萄糖甙类成分,这种化学成分的特征性是将本植物归属于山矾属的化学证据;能够从本植物中分离得到新化合物vacciniifolin,又成为将本植物与本属其他植物区分开来定为新种的辅证之一。
3.合适的分离方法,是重要基础。
生物材料中的有效成分可分为:
有效成分和无效成分无效成分:
是相对于有效成分来说的,或是到目前还没有发现这些成分具有有效的生物活性(一般的,初生代谢产物大多是无效成分)。
有效成分:
通过试验证明具有医疗效用或生物活性的物质(大多是次生代谢产物生物材料有效成分的提取方法:
溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法、压榨法传统溶剂提取法:
根据生物材料中各成分在不同溶剂中的溶解度不同,选用对有效成分溶解度大,对杂质成分溶解度小的溶剂,将有效成分从生物材料组织内溶解出来的方法。
传统溶剂提取法原理:
溶剂在材料中,由于扩散、渗透作用,会逐渐通过细胞壁进入细胞内。
在溶解其中的化合物后,细胞内的浓溶液通过浓度差不断向外扩散,细胞外的溶剂不断进入细胞,此过程不断重复,可把所需要的成分基本溶出。
如何判断有效成分的极性:
1.分子中的亲水基团多,或基团极性大,则分子极性大,易溶于极性溶剂而不易溶于非极性溶剂;反之亦然。
2.分子平面性越强,极性越低,亲脂性越强。
另外,分子中的酸性基团或碱性基团在提取时也可被利用。
生物碱可溶于酸,羟基蒽醌和一些类黄酮类成分可溶于碱。
一些含内酯环的化合物(如香豆素)也可因开环反应而溶于碱水。
提取用溶剂的选择:
溶剂的极性同样与其分子结构有关:
石油醚 相似相溶极性低的溶质用极性低的溶剂提取,反之亦然。 注意: 1.溶剂对材料中所需成分的溶解度很大,对非目标化合物的溶解度要小。 2.化学性质稳定,经济、易得、易回收,不能与植物成分产生化学反应(水、乙醇、甲醇、苯、氯仿、乙酸乙酯、乙醚) 常用的提取溶剂: 1.水: 一种强极性的溶剂。 生物材料里的亲水性成分,如有机酸盐、水溶性生物碱及甙类都能被水溶出来。 但无机盐、糖类、氨基酸和蛋白质也同时会被提取出来。 有时为了增加某些成分的溶解度,也采用酸水或碱水作为提取溶剂。 (如: 多数游离的生物碱是亲脂性化合物,不溶或难溶与水,但与酸结合成盐后,可离子化,变成亲水性的物质。 在萃取的时候进入水相,而与其他脂溶性成分分开。 存在的问题: 甙类易酶解,易滋生霉菌;对含黏液多的生物材料,其水溶液易呈胶状,不易处理;对含淀粉多的生物材料,沸水煎煮会使其糊化;含皂甙类成分多的生物材料,因为加热而产生的大量气泡使提取液难以浓缩。 2.亲水性的有机溶剂: 指能与水混溶的有机溶剂,如乙醇、甲醇、丙酮等 乙醇的优秀特性: 分子小,对细胞的穿透力强;对亲水性和亲脂性的成分都有较好的溶解能力,却难溶解蛋白质、果胶、淀粉等出生代谢产物;毒性小,价格便宜,可回收再利用 3.亲脂性有机溶剂: 指与水不混溶的有机溶剂,如石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯等。 特点: 对细胞的穿透力较弱,易被生物材料中的水干扰;只对亲脂性的成分有较好的溶解能力;一般有毒,价格较贵,易挥发损失。 影响提取效率的因素: 首要因素: 合适的溶剂、提取方法 其次: 生物材料的颗粒度——尽量粉碎,但无需太细;提取时间——无需太长,热提每次1-2h,冷提每次48h;提取温度——热提比冷提效率高,但杂质也增多,还可能导致化合物变构,在不了解化合物性质的情况下,宜用冷提法;生物材料的干湿度——尽量干燥。 常用的提取方法: 1.浸渍法,渗漉法——冷——适用于有效成分遇热易挥发和易破环的生物材料。 2.煎煮法,回流提取法——热——适用于有效成分遇热稳定的生物材料。 浸渍法: 分为温浸(50-60度)和冷浸(室温)(静态)将材料粉末装入适宜的容器,加入溶剂浸泡,溶出其中的成分。 每次48小时,反复3-4次。 特点: 简单易行,但提取效率低。 费时。 渗漉法: (动态)装生物材料的容器成为渗漉器。 先浸润生物材料,然后顶端不断加入新的溶剂,溶剂自上而下通过材料粉,溶出成分,从底部流出。 特点: 流动的溶液使生物材料粉末表面始终保持较高的浓度差,提取效率高。 煎煮法(水加热提取)特点: 简单易行,但提取液中水溶性杂质较多,易霉变。 回流提取法——(有机溶剂加热提取)容器底部有加热装置,上方有球形冷凝管。 3.其他方法: 连续提取法索氏提取器,使用的溶剂量少超声波提取破环植物的细胞壁微波辅助提取本质是一种加热提取方式超临界流体提取高压下的超临界的co2酶提取法用纤维素酶破环细胞壁,以有利于细胞内成分溶出 水蒸气蒸馏法: 只适用于难溶或不溶于水、与水不会发生化学反应、能随水蒸气蒸馏而不被破坏的生物材料的提取。 原理: 生物材料中的挥发性成分与水在一起加热时,当其蒸汽压和谁的蒸汽压之和为一个大气压时,液体就开始沸腾,水蒸气将挥发性物质一并带出。 例如丹皮中大丹皮酚。 升华法: 原理: 有些固体物质受热后会直接汽化,遇冷后又凝固为原来的固体化合物。 如樟脑的提取。 特点: 虽然简单易行,但在实际提取时很少采用,因为升华所需温度较高,中草药容易碳化,其次,升华产产率低,有时还伴随化合物分解现象。 压榨法: 原理: 某些生物材料中的有效成分含量较高且存在于植物的液汁中时,可将新鲜原料直接压榨,压出汁液,在进行提取。 如从香料植物中提取精油溶剂分离法: 采用从小到大极性不同的溶剂依次抽题;天然的有机化学成分,在不同溶剂中的溶解度不同,根据溶解度的差异进行分离纯化是最常用的方法。 操作方法: 将用溶剂提取得到的总提取物拌入适量吸附剂(硅藻土或纤维粉或粗硅胶等),然后低温或自然干燥,粉碎后,置于容器中,选用三四种不同极性的溶剂,由低极性到高极性分步依次进行提取,使总提取物中各组分,依其在不同极性溶剂中的溶解度的差异而得到分段分离。 常用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次提取。 实验室和工业生产中通常采用的分离方法: 色谱法、溶剂分离法、两相溶剂萃取法、沉淀法、透析法、结晶法、超滤法、吸附法、澄清法 溶剂分离法: 酸碱分离: 原理: 利用某些成分能在酸水或碱水中溶解,当加酸或碱调整溶液的ph后,所需成分又变成不溶物析出,以达到分离的目的。 操作: 总提取物先用酸水(碱水)处理成盐溶解于水,然后再经碱水(酸水)处理,恢复原来的结构,使欲分离成分得以沉淀析出,最后可以离心或利用与水不相混溶的有机溶剂把这些化合物萃取分离。 如内酯类化合物、生物碱、酚类成分 萃取法的原理: 是利用提取物中各成分在两种互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而达到分离目的。 萃取时如果各组分在两相溶剂中的分配系数相差越大,则分离效率越高,分离的效果越好。 实验室萃取常用的有机溶剂有: 石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等。 如果水提取液中的欲分离的成分是亲脂性物质,一般多采用亲脂性有机溶剂,如石油醚、苯、氯仿或乙醚与水相之间进行两相萃取;如果有效成分是亲脂性弱的物质,就需要改用亲脂性弱的有机溶剂,如乙酸乙酯、正丁醇等与水相之间进行两相萃取(黄酮类成分多用乙酸乙酯和水的两相萃取;提取亲水性强的皂甙类成分则多选用正丁醇和水做两相进行萃取) 萃取的操作: 两相溶剂萃取一般是在分液漏斗或萃取罐中进行,在水提取液中加入约1/3的有机溶剂,缓缓摇荡几分钟,放置令其自然分层,要避免剧烈振摇,以免产生乳化(尤其是氯仿和水萃取时,),影响分层。 万一碰到乳化现象,可将乳化层分出,再用新溶剂萃取,或将乳化层稍稍加热,或放入超声波清洗器中清洗,或长时间放置并不时旋转。 )控制初始水体液的浓度,使其不稠即可。 以后每种有机溶剂萃取3-4次。 逆流连续萃取法: 一种连续的两相溶剂萃取法。 有一、数根或更多的萃取管构成装置。 管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充,以增加两相溶剂萃取时的接触面积。 逆流分配法: 与两相溶剂逆流萃取法原理相似,两相之间萃取的过程——分配。 沉淀法: 在植物提取液中加入某些试剂使其析出其中某种或某些成分,或析出其杂质,产生沉淀,以获得有效成分或除去杂质的方法。 醇沉淀法: 植物的水提取液中常含有树胶、粘液质、蛋白质、淀粉等,可以加入一定量的乙醇,使这些不溶于乙醇的成分从溶液中沉淀析出,而达到与其他成分分离的目的。 如从白及水提取液中提取白及胶。 酸碱沉淀法: 是利用某些成分能在酸或碱液中溶解,当加碱或加酸调整溶液的ph后,所需成分又恢复原来结构,成不溶物而析出以达到分离的目的。 铅盐沉淀法: 是分离某些植物化学成分的经典方法之一。 由于中性醋酸铅或碱性醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种天然化学成分生成难溶的铅盐或络合物沉淀,故可以利用这种性质使有效成分与杂质分离。 中性醋酸铅能与酸性成分或某些酚类物质结合成不溶性铅盐。 因此常用于沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、黏液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。 碱性醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。 常将植物的水或醇提取液先加入醋酸铅浓溶液,静置后滤出沉淀。 然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中,通以h2s,使铅转化成不溶性硫化铅沉淀除去。 盐析法: 在植物的水提液中加入无机盐使之达到一定的浓度或半饱和状态后,可使提取液中的水溶性较小的某些成分在水中的溶解度降低而沉淀析出,从而达到与水溶性大的杂质分开的一种分离方法。 例如三七水中加硫酸镁至饱和状态提取三七皂甙。 常用的无机盐: 氯化钠。 氯化钾 透析法: 利用小分子物质在溶液中可通过半透膜而大分子物质不能通过半透膜的性质来达到分离的一种纯化方法。 常用于分离纯化蛋白质、多肽、多糖、皂甙等 结晶法: 一般天然产物成分在常温下多半是固体物质,常具有结晶的通性,因此可根据溶解度的不同,用结晶法来达到分离、纯化、精制的目的。 (结晶前应该先尽可能地除去杂质) 除杂质方法: 溶剂法、少量活性炭脱色处理、层析法、沉淀法、透析法、超滤法 弱经反复处理仍不能使近于纯品的成分结晶,则可先将其制备成结晶态的衍生物,再还原纯化。 结晶剂的选择: 最好是在冷时对所要的成分的溶解度较小,热时溶解度又较大的溶剂。 溶剂的沸点不太高。 常用甲醇、氯仿、丙酮、乙醇、乙酸乙酯等。 制备结晶溶液也常采用混合溶剂。 一般是先将化合物溶于易溶的溶剂中,再在室温下滴加适量的难溶的溶剂,直至溶液微呈浑蚀,并将此溶液微微加温,使溶液完全澄清后放置。 如虎杖苷重结晶。 结晶: 是把含有固体溶质的饱和溶液加热蒸发溶剂或降低温度后,使原来溶解的溶质成为有一定几何形状的固体(晶体)析出的过程,析出晶体后的溶液仍是饱和溶液,又称母液。 结晶法分类: 1.蒸发溶剂法,也叫浓缩结晶法。 对于溶解度受温度变化影响不大的固体溶质适用。 使溶液慢慢挥发,过饱和的溶质就能成为晶体析出。 2.冷却热的饱和溶法液法,也叫降温结晶法。 适用于溶解度受温度变化影响较大的固体溶质的结晶。 先用适量的溶剂(或混合溶剂)在加温的情况下,将化合物溶解制成过饱和的溶液,然后再放置冷处,通常放于冰箱中让其溶质从溶液中析出。 结晶法注意: 1,许多化合物的晶核的形成和分子的定向排列是需要时间的。 2.欲速则不达——溶液太浓或降温太快,往往只能得到无定形粉末。 3.如果放置一段时间后没有结晶析出,常用加入极微量的晶种,即同种化合物结晶的微小颗粒,来诱导晶核的形成。 没有晶种时,可用玻璃棒蘸过饱和结晶溶液一滴,在空气中挥发掉溶剂,再用玻璃棒来摩擦容器内壁溶液边缘处,以诱导结晶的形成。 如仍无结晶析出,可打开瓶塞任溶液逐渐挥发,慢慢析晶。 通常都需要进行重结晶,才可以达到高纯度。 超滤技术: 膜提取分离技术的一种,是根据分子量的差异,选择一定截留分子量的膜除去杂质,富集有效部位或有效成分的分离方法。 吸附技术: 是利用特殊的吸附剂——大孔吸附树脂的吸附性和分子筛相结合的原理,从植物提取液中有选择性的吸附其中的有效成分,富集有效成分、去除杂质的一种分离技术。 在药用植物有效部位的提取新工艺上得到了广泛的应用。 适合于已知、未知成分的植物性中药复方有效部位(黄酮类、生物碱类、甙类)的分离,工艺简单,成本低、效果好。 澄清技术: 澄清剂无毒,适用面广,成本不高。 在中药口服液的制备中应用较多。 经典方法是醇沉法。 果汁澄清剂: 成分为食用级原料,是水溶性的胶状物质,安全无毒,不引入杂质并可随沉淀后的不溶性杂质一同除去,通常配5%的水溶液使用。 甲壳素: 是一种含氨基多糖的天然高分子物质,带正电荷,可沉降药液中带负电荷的悬浮物。 ZTC天然澄清剂: 可除去鞣质、蛋白质、胶体等不稳定成分,并且不影响中药的有效成分,如黄酮、生物碱、甙类、氨基酸、多肽、多糖等。 实验证明应用于八珍口服液的澄清,药液中芍药甙、氨基酸、多糖、总固体的含量高于水醇法所得药液,药理实验也证明该法所得药液临床作用优于八珍丸。 明胶、鞣酸、蛋清主要作用是除去鞣质,还有酶、焦糖等杂质成分。 色谱学术语色谱柱: 玻璃管固定相: 玻璃管中相对石油醚固定不动的填充物(碳酸钙)流动相: 流经碳酸钙颗粒孔隙和表面的冲洗剂(石油醚)(为流体)洗脱: 冲洗层析柱的过程 色谱法是一种物理化学的奋力分析方法。 它是利用样品中各种组分在固定相和流动相中受到的作用力不同,而将待分析样品中得各种组分进行分离,然后按顺序检测各组分的方法 色谱(层析)——包括1,纸层析2,薄层层析---a硅胶薄层层析b聚酰胺薄层层析c氧化铝薄层层析3,柱层析-----a硅胶柱层析b凝胶柱层析c离子交换柱层析d聚酰胺柱层析 3.1纸色谱一,纸色谱的原理 纸色谱(纸层析)是一种分配色谱的一种。 固定相为滤纸上吸附的水,滤纸是水的支持物或载体,流动相通常为有机溶剂。 (滤纸纤维中含有的羟基会从空气中吸收水分,并以氢键和滤纸纤维素结合) 层析过程---当流动相(展开剂)在滤纸上移行时,样品也就在流动相和水相间反复分配,由于各组分在俩相中分配系数不同,迁移速度也就不同,从而使不同的组分在滤纸上得以分离。 各组分的位置—一般用比移值Rf(定义)表示(在相同的分析条件下,Rf值的大小与化合物的结构有关)。 二,色谱柱的操作1滤纸的选择 滤纸的质地要均一,厚薄要适宜,平整物折痕,杂质要少。 若含有过多的杂质,会影响分析的结果。 一般定性的分析需要使用较薄的滤纸,而分离制备则需要专用厚质滤纸。 2,纸色谱展开剂的选择 纸色谱的展开剂常由有机溶剂和水组成,往往不是单一溶剂,如常用的正丁醇-水,是指水饱和的正丁醇;而展开系统正丁醇: 乙酸: 水(4: 1: 5)则是指将溶剂先按此比例混合,然后置分液漏斗中静置分层,取上层正丁醇溶液作为展开剂。 展开剂的选择可以多参考文献,尽量使欲分离的样品的各组分在该溶剂系统中的RF值差异较大。 5、点样样品的浓度一般配置成浓度适宜溶液(溶剂沸点要尽量低,易挥发),然后用毛细点样管(定量试验时采用刻度毛细管或微量注射器点样)点于离滤纸底边2cm左右的点样线上。 点样的斑点直径不超过0.5cm(如果吸出的溶液不能一次点完,则采用少量多次点样的方法,每次点少量样品后立即用电吹风吹干,再进行下一次的点样,这样可以避免样品溶液斑点的扩散过大): 各样品之间的距离以结果不互相干扰为准(2Cm以上为宜): 如果超过滤纸的载荷会导致拖尾现象,所以点样量不宜过大。 点样结束要用电吹风吹干溶剂(高沸点溶剂),放冷。 此时整个纸张处于干冷的状态,待下一步实验。 6、展开方式: 在专门的展开缸内进行(密封),根据溶剂的移行方向,可以分为上行法和下行法。 在分离一些复杂组分时,还常采用双向纸层析,就是先用一种展开系统展开。 7、显色与检识展开结束后,取出滤纸,马上用铅笔记下溶剂前沿的位置,吹干滤纸后进行检识。 本身有颜色的成分,可以直接观察,计算RF值;对于无色又荧光的化合物,则可以先采用一定的显色剂显色后检识{碘蒸汽可作通用(含C=C的化合物)显色剂;生物碱的显色可用碘化铋试剂;氨基酸,肽类可用茚三酮显色检识}。 紫外光下有荧光的结构,乳香豆素,部分黄酮等,可在紫外灯下检识其位置。 纸层析RF值规律的探讨 (1)纸色谱的应用3.1纸色谱在中,低极性的化合物分析中应用较少,但是在糖类,氨基酸,甙类大极性化合物的分离,分析方面,具有较重要的应用价值。 3.2一。 薄层色谱简介薄层色谱是将作为固定相的吸附剂均匀涂布到平板载板上,如玻璃板,塑料膜,铝箔等,形成一薄层。 将样品点于薄层上,借助展开剂的移行,根据各组分的吸附性能的差异来达到分离的目的。 2.薄层色谱的操作 吸附剂的选择1.薄层吸附色谱用的吸附剂常用的是硅胶,聚酰胺,氧化铝反相硅胶(薄层分配色谱的支持剂为硅藻土和纤维素)。 薄层层析用吸附剂(支持剂)的粒度要求细腻均匀。 展开距离一般不超过14cm,否则不带扩散影响分离效果(一般市售高效薄层板5*10cm). 2、硅胶是无定形多孔性物质,略具酸性,适用于酸性和中性物质的分离和分析。 薄层用的硅胶分为: 硅胶H,硅胶G,(含煅石膏作为粘合剂),硅胶HF254,硅胶GF254等。 3、氧化铝有中性,酸性,碱性种类型。 其中中性氧化铝(PH7.5)的用途最广,适于分离生物碱,萜类,甾体,挥发油及在酸和碱中不稳定的甙类,内酯类等化合物。 H,HF254,G,GF254四种类型。 4、聚酰胺可以分离极性和非极性物质,尤其在黄酮类,蒽酮类,酚类化合物的分离方面,明显有优越性。 市售的聚酞胺薄膜,在天然产物的分离鉴定上应用非常广泛。 聚酰胺可以分离极性和非极性物质,尤其在黄酮类,蒽酮类,酚类化合物的分离方面明显有优越性。 聚酰胺分子中既有非极性的脂肪键,又有极性的酰胺基团。 双重分析: 1当流动相为含水的极性溶剂时,聚酰胺称为非极性固定相,类似反相层析2当流动相为不含水的非极性溶剂时(氯仿-甲醇),聚酰胺成为极性固定相,类似正相层析对碱较稳定,对酸的稳定较差。 当所分离的物质为黄酮体,酚,醌,糖,生物碱,氨基酸衍生物都可以试用聚酰胺层析。 反相硅胶可分离的化合物种类很多,对许多天然产物的分离都有重要的作用。 制板: 若用硅胶,则将硅胶和羧甲基纤维素钠溶液的比例一般按1: 2.5混合均匀成糊状,若为氧化铝,则与水的比例常用1: 1调制,聚酰胺薄层板可购买。 把糊状物均匀铺在玻璃板上,将薄层板放在平台上阴晾至干透。 讲干透的薄层板置烘箱中105度加热活化1小时,置于干燥器中备用。 3点样在离薄层板一端约1cm处,用铅笔轻轻地画一条线作为点样线。 先选择低沸点的合适的有机溶剂将样品溶解成适宜浓度的溶液,用点样毛细管少量的点于点样线的某点上,点样斑点不宜超过0.3cm,样品太多,往往出现斑点拖尾的现象,以致样品不容易分开。 吹干放冷,待展开。 4展开剂的选择层析中多组分能否获得满意的分离,关键在于展开剂的选择。 天然有机化学成分大致可按其极性不同而分为弱极性,中极性与强极性。 在正相硅胶薄层板上,凡展开剂的极性越大,对化合物的洗脱力越大,展开剂极性越小,对化合物的洗脱力越小。 正相薄层色谱用的展开剂绝大多数是有机溶剂。 5展开在专门的层析缸内展开,也可在标本缸等密闭的容器内展开展开的方式可分为上行展开,下行展开,平卧展开以及径向展开。 上行法: 把薄板层放在缸内,将点有样品的一端浸入展开剂中,展开剂不能超过点样线,溶剂展开的距离可达顶端。 6检识与纸层析的检识类似,另外还有硫酸乙醇溶液的喷雾显色,改方法能使大多数有机化合物显色,显色后需立即记录,薄层板不可再利用。 记录斑点RF值 7、特殊薄板1)荧光薄层有些天然成分本身无色,在紫外灯下也只有吸收紫外光的性质,而无荧光,又无适当的显色剂检识时,则可将吸附剂先行处理,加入荧光物质制成荧光薄层进行层析。 常用的荧光物质多在254nm和365nm紫外光激发下发出荧光(HF254,和GF254硅胶板)。 展开后置于紫外光下照射,就可检出样品的位置。 2)络合薄层原理: AgNO3对C=C双键有络合作用,且对其中的顺式双键作用力更大。 硅胶在硝酸银溶液中浸泡,可实现对结构中双键的性质有差异(双键数目不同;双键顺反异构)的不同化合物的分离。 3)酸碱薄层线索: 碱性成分在碱性条件下有较好的层析效果;反之亦然。 硅胶在0.5--1M的NaOH溶液中浸泡,烘干活化,对生物碱的分离效果提高。 三、制备型薄层色谱(productiveTLC)前面介绍的薄层色谱都是ug级的样品分析量(也可以说是分析型),在薄层板上被分离开的化合物已经没有再回收进行其他分析(mg级)的可能。 如需更多的样品量来进行下一步的分析,或者批量制备,必须加分离载体的载荷,可1)柱层析(大量分离材料装于玻璃柱内)2)制备薄层(在玻璃板上铺多点分离材料) 1、吸附剂硅胶是最常用的吸附剂,粒度极细,与TLC级吸附剂相似。 适宜的薄层吸附剂的厚度为0.5--2mm,板的尺寸一般为20x20cm或20x10cm。 2、点样,展开于普通薄层层析不同的是----点样呈带状(浓度适当加大尽量窄);以普通薄层相同系统而较小极性的展开剂展开3次,可比同系统大极性展开一次,达到相同Rf值的分离效果更好。 3、展开结束后,通过检识(用碘或硫酸时要留意),用铅笔标出化合物的谱带位置,用刮刀将该色带连同硅胶粉一起从板上刮下,装于玻璃柱内,然后用丙酮或乙醇洗脱,收集洗脱液,回收溶剂即可。 (甲醇洗脱力强,但也会溶解硅胶及其中含有的一些杂质) 四、薄层色谱的作用主要应用于1)化学成分的预实验2)摸索柱层析的分离条件3)对柱层析的结果进行检测4)(真伪的检查、质量控制盒资源调查) 1、预实验用薄层色谱法进行天然化学成分的预实验,可依据各类成分的性质,选择不同的显色剂和显色方法,有针对性地进行。 由于化合物在薄层上展开分离后,可和一些杂质分离,排除杂质的干扰,选择性高,可使预实验结果更为可靠。 根据预实验的结果,判断可能含有哪些类型的化学成分,然后按照所含化学成分的性质,设计有效成分分离的具体方法。 2、摸索柱层析的分离条件在进行柱层析分离前,首先考虑选用合适的吸附剂与洗脱剂。 通过薄层的前期试验,就可以摸索到比较满意的分离条件,即可将此条件用于柱层析。 一般在薄层展开时使组分达到较好分离效果的溶剂系统可选为柱层析的溶剂分离系统;而待分离物质Rf值达0.1左右的极性配比可用于柱层析的洗脱剂配比。 3、对柱层析的各个馏分进行薄层分析,判断柱层析的分离效果并将相同的馏分合并 一.预实验细则 1.生物碱: 碘化铋试剂: 试样于波曾色谱展开后,喷碘化铋试剂立即有橘红色或黄色斑点出现,表示可能有生物碱。 本反应在薄层色谱中很敏感。 溶液1: 0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸,40ml水中。 溶液2: 8gKI溶于20ml水中。 试剂液1+2等体积混合,可于棕色瓶中保存较长时间。 喷洒液: 将1ml此试剂与2ml醋酸,10ml水混合。 2.氨基酸,肽和蛋白质: ①茚三酮试剂: 样品薄层展开后,喷洒0.2%茚三酮的酒精溶液,在100℃左右的烘箱中放置2min,如有氨基酸和肽就呈紫红色或蓝色斑点,也有少数氨基酸呈黄色斑点。 茚三酮试
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