细菌常见的生化反应试验.docx
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细菌常见的生化反应试验
细菌常见的生化反应试验
(一)什么是生化试验?
Ø指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。
Ø生化试验或称生化反应:
细菌的酶不完全相同,对营养物质的分解能力不一致,因此其代谢产物各异。
在培养基中加入可与被测终产物反应的指示剂,产生肉眼可见的变化,如颜色的改变等,利用生化方法来鉴定细菌的试验,统称为细菌的生化试验或称生化反应
(二)生化试验的方法:
1在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的pH值变化。
2在培养物中加入试剂,观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
3根据酶作用的反应特性,测定酶的存在。
4根据细菌对理化条件和药品的敏感性,观察细菌的生长情况。
(三)生化试验的注意事项
1.待检菌应是新鲜培养物,培养18~24h。
2.待检菌应是纯种培养物。
3.遵守观察反应的时间。
观察结果的时间,多为24或48小时。
4.应做必要的对照试验。
5.提高阳性检出率,至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。
(四)检验细菌的生化试验范围
:
1、糖(醇)类代谢试验2、氨基酸和蛋白质代谢试验
3、有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验5、毒性酶类试验
二、糖醇类代谢试验
(一)糖醇类发酵试验
(二)葡萄糖氧化发酵(O/F)试验
(三)V-P试验
(四)甲基红(MethylRed)试验MR
(五)七叶苷水解试验(六)甘油品红试验
(一)糖醇类发酵试验
1、原理:
不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同,有的能分解多种糖(醇),有的只能分解1~2种糖(醇),有的分解糖(醇)能产酸产气,有的分解糖(醇)只产酸不产气,根据这些特点,可鉴别细菌。
常用的糖醇
Ø单糖:
葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖
Ø双糖:
乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖
Ø三糖:
棉子糖
Ø多糖:
菊糖、肝糖、淀粉
Ø醇类:
甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇
2试验方法:
用接种针或环移取纯培养物少许,接种于糖发酵管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。
置36±1.0℃培养1~3天,每天观察结果。
3、结果观察和记录:
•产酸产气,阳性,以“⊕”表示
•产酸不产气,阳性,以“+”表示
•不产酸产气,阴性,以“-”表示
应用:
沙门氏菌可发酵葡萄糖但不发酵乳糖。
大肠埃希菌可发酵葡萄糖及乳糖。
有些菌可发酵同一种糖类,其发酵产生的代谢产物也不尽相同。
如大肠埃希菌和志贺菌均可发酵葡萄糖,但前者产酸产气,而后者仅产酸,故可利用此试验来鉴定细菌。
(二)葡萄糖氧化发酵OF试验
1、原理:
细菌对葡萄糖的分解,分为氧化型和发酵型。
氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖,无氧的条件下不能分解葡萄糖;
发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖;
不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。
根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。
2、方法:
取待检菌,以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基上,在其中一管加入一层(约1cm)灭菌的液体石蜡以隔绝空气,在37℃培养2~4h天,每天观察结果。
应用:
可用于鉴别肠杆菌科细菌(发酵型)与非发酵菌(氧化型或产碱型)。
也可用于鉴定葡萄球菌(发酵型)和微球菌(氧化型)。
3、结果观察与记录
(三)V-P试验
1、原理:
某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的O2氧化为二乙酰,在α-萘酚和肌酸的催化作用下,二乙酰与培养基中的蛋白胨中精氨酸等所含的胍基生成红色化合物,即V-P试验阳性,称V-P(+)反应。
应用:
本试验常与甲基红试验一起使用。
二者结果通常相反。
即如大肠埃氏菌、沙门菌、志贺菌等甲基红呈阳性反应,而VP反应则为阴性。
沙雷菌、阴沟肠杆菌等,VP反应为阳性,而甲基红反应为阴性。
2、试验方法
(1)奥梅拉(O’Meara)法
(2)贝立脱(Barritt)氏法(3)快速法
(1)奥梅拉法
Ø将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基,于36±1℃培养48h,每1mL培养液加奥梅拉O’Meara试剂0.1ml,摇动试管1~2min,静置于37℃恒温箱4h,或在48~50℃水浴放置2h后判定结果。
(2)贝立脱法
Ø将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基,于36±1℃培养2天,每2mL培养液先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1mL,再加40%氢氧化钾水溶液0.4ml,摇动2~5min,阳性菌常立即呈现红色,若无红色出现,静置于室温或36±1℃培养4h,如显现红色为阳性,呈黄色或有类似铜色者,可判定为阴性。
(3)快速法
Ø将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中,挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后放置5min,判定结果。
不产酸的培养物不能使用。
3、结果观察与记录
Ø
(1)发酵管出现红色者,为阳性,记V-P+
Ø
(2)发酵管为黄色或铜绿色者,为阴性,记V-P-
(四)甲基红试验(MR)
1、原理:
细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后,由于代谢的途径不同,有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物,使培养基pH值下降至pH4.5以下,使甲基红指示剂变红色,为甲基红试验阳性;有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物,培养液pH>5.4,甲基红指示剂呈桔黄色,为甲基红试验阴性。
2、试验方法:
挑取新鲜的待试培养物少许,接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基,于36±1℃或30℃(以30℃较好)培养3~5天,从第48h起,每日取培养液1mL,加入甲基红指示剂1~2滴,立即观察结果。
3、结果观察与记录
(1)呈鲜红色或橘红色为阳性,呈淡红色为弱阳性,记MR+;
(2)呈橘黄色或黄色为阴性,记MR-,迄至发现阴性并培养至第5天仍为阴性,即可判定结果。
应用:
主要用于大肠埃希菌(阳性)和产气肠杆菌(阴性)的鉴别。
•肠杆菌中许多细菌甲基红试验为阳性,如沙门菌、志贺菌、枸橼酸杆菌、变形杆菌等为阳性,但肠杆菌属和克雷伯菌属为阴性。
(五)七叶苷水解试验
1、原理:
七叶苷被细菌分解后,生成葡萄糖和七叶素,七叶素与Fe2+结合,生成黑色化合物,使培养基呈黑色,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
将待试纯培养物少许,接种于七叶苷培养基,于36±1℃培养24h,观察结果。
3、结果观察与记录
Ø
(1)培养基变为黑色或棕黑色者,为阳性,记录为+
Ø
(2)培养基不变色者,为阴性,记录为-
(六)甘油品红试验
1、原理:
某些细菌可分解甘油成为丙酮酸,并进一步脱羧生成乙醛,乙醛与无色品红生成醌式化合物,呈深紫红色,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
取待检菌的新鲜纯培养物,接种于甘油品红肉汤培养基中,于36±1℃培养8天,并用未接种的培养基在相同条件下培养作为阴性对照,观察结果。
3、结果观察与记录
Ø
(1)出现紫色或紫红色者,为阳性,记录为+
Ø
(2)与对照管颜色相同者,为阴性,记录为-
三、氨基酸和蛋白质代谢试验
(一)靛基质(吲哚)试验
1、原理:
某些细菌含有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基质(吲哚)。
吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合,可形成红色化合物,即玫瑰吲哚,以此鉴别细菌。
应用:
主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。
2、试验方法所用试剂:
(1)柯凡克(Kovacs)试剂或
(2)欧-波试剂
Ø将待检菌小量接种于培养基中,于36±1℃培养24~48h时后,加入柯凡克试剂数滴,轻摇试管,呈红色者为阳性。
Ø或沿试管壁缓慢加入欧-波试剂约0.5ml覆盖液面,两液接触处呈现玫瑰红色者,为阳性反应,无红色者为阴性反应。
3、结果观察与记录:
Ø呈现玫瑰红色,为阳性反应,记+
Ø无红色者,为阴性反应,记-
(二)硫化氢(H2S)试验
1、原理:
某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸或含硫化合物,产生硫化氢,硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS,以此鉴别细菌
2、试验方法:
挑取待检菌,用穿刺接种法接种于三糖铁培养基上,于36±1℃培养24~48h,观察结果。
3、结果观察与记录
Ø培养基底部呈黑色,为阳性,记+
Ø培养基底部无黑色,为阴性,记-
应用:
用于肠道杆菌鉴定试验,如:
沙门氏菌属、爱德华菌属、枸橼酸杆菌属及变形杆菌等为阳性;肠道杆菌中其他菌属为阴性,沙门菌属中的甲型副伤寒沙门菌也为阴性。
(三)尿素酶试验
1、原理:
某些细菌能产生尿素酶,将尿素分解产生氨,氨使培养基变为碱性,使培养基中的酚红指示剂呈粉红色,培养基由黄色变为红色,为阳性。
以此鉴别细菌。
应用:
主要用于肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。
奇异变形杆菌和普通变形杆菌尿素酶阳性,雷氏普罗威登斯菌和摩氏摩根菌阳性,斯氏和产碱普罗威登斯菌阴性。
2、试验方法:
挑取大量培养18~24h的待试菌,浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上,不要到达底部,留底部作变色对照。
培养2、4和24h分别观察一次结果,培养基变为粉红色为阳性,颜色不变者为阴性。
如阴性应继续培养至4天,作最终判定。
3、结果观察与记录:
Ø培养基变呈粉红色,为阳性,记+
Ø培养基颜色不变,为阴性,记-
(四)氨基酸脱羧酶试验
1、原理:
某些细菌能产生氨基酸脱羧酶,可使赖氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用,生成胺类物质和CO2。
胺类物质使培养基呈碱性变紫色,为阳性,如呈黄色为阴性,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
取待检菌,分别接种于含有氨基酸的培养基内和不含氨基酸的对照培养基内,在36±1℃培养1~4天,每天观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø试验管呈紫色,对照管呈黄色,为阳性,记+
Ø试验管、对照管都呈黄色,为阴性,记-。
阳性反应试验管颜色变化过程:
紫色→黄色→紫色
原理:
对照管呈黄色,说明有细菌生长。
在培养的早期(10~12h),细菌发酵葡萄糖产酸使培养液pH下降,指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色,以后由于氨基酸脱羧生成胺,pH又回升至碱性,指示剂显紫色。
应用:
沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外,其余沙门菌的鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶试剂均为阳性。
志贺菌除宋氏和鲍氏志贺菌外其他志贺菌均阳性。
故可作为肠杆菌科细菌鉴定的重要方法。
此外,对链球菌和弧菌科细菌的鉴定也有重要价值。
(五)苯丙氨酸脱氨酶试验
1、原理:
某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶,使苯丙氨酸脱去氨基,形成苯丙酮酸,苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物,接种于苯丙氨酸培养基上,在36±1℃培养18~24h后,加入氯化铁溶液4~5滴,转动试管,使试剂与菌苔表面充分接触,立即观察结果。
3、结果观察与记录
Ø试验管立即出现绿色,为阳性,记+
Ø无色为阴性,记-。
Ø应用:
本试验特异性较高,主要用于肠杆菌科细菌鉴定。
变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌均为强阳性,肠杆菌科中其他细菌均为阴性。
(六)明胶液化试验
1、原理:
有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽,又进一步将多肽水解为氨基酸,明胶失去凝胶性质,使培养基由固态变为液态。
2、试验方法:
Ø挑取培养18~24h的待试菌,以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度。
于20~22℃培养7~14天。
明胶高层亦可培养于36±1℃。
Ø另取一支未接种的培养基一同培养作对照,每天取出两支试管,放入冰箱放置20~30min后,再观察结果。
3、结果观察与记录:
明胶液化,为阳性,+。
明胶凝固,为阴性,-。
四、有机酸盐和铵盐的利用试验
碳源利用试验:
细菌对单一来源的碳源利用的鉴定试验
(一)枸橼酸盐利用试验
1、原理:
某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源,分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐;同时分解培养基的铵盐生成氨,使培养基变为碱性,使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色,为阳性。
2、试验方法:
挑取待检菌,在西蒙枸橼酸盐培养基斜面上密集划线接种,在36±1℃培养1~4天,每天观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø斜面有菌苔生长,培养基斜面变为蓝色或深蓝色,为阳性,记+;
Ø无菌苔生长,培养基斜面仍为绿色者,为阴性,记-
应用:
枸橼酸盐利用试验用于肠杆菌科中各菌属间的鉴别,在肠杆菌科中,埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属等为阴性,其他菌属为阳性。
(二)丙二酸盐利用试验
1.原理:
某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
取待检菌新鲜纯培养物,接种于丙二酸钠培养基上,于36±1℃培养48h,观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+
Ø培养基无颜色变化,为阴性,记-
应用:
常用于肠杆菌科细菌鉴定,亚利桑那和克雷伯菌属为阳性,枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属中有些菌种也呈阳性反应,其他各属均为阴性。
Mimic试验:
吲哚(I)、甲基红(M)、VP(Vi)、枸橼酸盐利用(C)四种试验常用于鉴定肠道杆菌,合称为IMViC试验。
I-吲哚(indol)试验M-甲基红(methylred)试验
Vi-VP(Voges-Proskauer)试验
C-枸橼酸盐利用(citrateutilization)试验
IMViC试验
大肠埃希菌++--
产气杆菌--++
五、呼吸酶类试验
(一)氧化酶试验
1.原理:
氧化酶使细胞色素C氧化后,氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化,使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类化合物,再和α-萘酚结合,生成吲哚酚蓝,呈蓝色反应,为阳性。
试剂:
1%α-萘酚-乙醇液1%盐酸二甲基对苯二胺
2、试验方法:
用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂1~2滴在培养物上,再加入1%α-萘酚-乙醇液1~2滴,在30秒内判定试验结果。
3、结果观察与记录:
Ø在30秒内呈蓝色反应,为阳性,记+
Ø不变色或为红色者,为阴性,记-
应用:
奈瑟菌属的菌种均呈阳性反应。
也用于区别假单胞菌与肠杆菌,肠杆菌科细菌为阴性,假单胞菌为阳性。
莫拉菌属也为阳性。
Ø本试验中避免接触含铁物质,否则易出现假阳性,选铜绿假单胞菌为阳性对照,大肠埃希菌为阴性对照。
(二)过氧化氢酶(触酶)试验
1.原理:
某些细菌可分泌过氧化氢酶,加入过氧化氢后,可将过氧化氢分解生成水和氧气,产生气泡,即为阳性反应。
2、试验方法:
挑取固体培养基上的新鲜菌落一环,置于洁净玻片上(或试管),滴加3%过氧化氢液数滴,或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧化氢液,立即观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø产生气泡者,为阳性,记+
Ø不产生气泡者,为阴性,记-
应用:
绝大多数细菌均能产生过氧化氢酶,但链球菌属触酶阴性,故常用此试验来鉴别链球菌。
应注意本试验不宜用血琼脂平板上的菌落(易出现假阳性)。
由于陈旧培养物可失去酶活性,所以试验应取新鲜培养菌。
用金黄色葡萄球菌作阳性对照,阴性对照用链球菌。
(三)硝酸盐还原试验
1、原理:
某些细菌具有还原硝酸盐的能力,可将硝酸盐还原为亚硝酸盐,在酸性条件下,亚硝酸盐可生成亚硝酸,亚硝酸与对氨基苯磺酸作用,生成重氮苯磺酸,重氮苯磺酸再与α-萘胺作用,生成红色的化合物,呈红色反应,为阳性反应
试剂:
A、对氨基苯磺酸试剂B、α-萘胺试剂
2、试验方法:
取待检菌新鲜纯培养物,在硝酸盐培养基上接种,在36±1℃培养1~4天,每天取2mL培养液,加入A、B试剂的等量混合物各二滴混匀,立即观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø呈现红色,为阳性,记+
Ø若无红色出现,为阴性,记-
(四)氰化钾试验
1.原理:
氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长,以此鉴别细菌.
2、试验方法:
取培养20~24h的营养肉汤培养液或菌落1环,接种至对照培养基及氰化钾培养基内,立即以橡胶塞塞紧,36±1℃培养24~48h,观察结果。
3、结果观察与记录:
Ø对照管有菌生长,试验管有菌生长为阳性,记+。
Ø对照管有菌生长,试验管无菌生长为阴性。
记-。
Ø
六、毒性酶类试验
(一)溶血试验
1、原理:
某些细菌在代谢过程中能产生溶血素,可使人或动物的红细胞发生溶解,不同的细菌有不同的溶血反应,借此可鉴别细菌。
2试验方法:
平板法试管法
(1)平板法:
将培养物接种于血平板培养基上,36±1℃培养24~48h,观察结果。
溶血试验的溶血类型及现象:
Ø
(1)α(甲型)溶血:
菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。
Ø
(2)β(乙型)溶血:
菌落周围出现较宽的透明溶血环。
Ø(3)γ(-丙型)溶血:
菌落周围无溶血环。
(2)试管法:
将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合,在36±1℃培养16~18h,观察结果。
如溶血,培养液可出现透明状。
3、结果观察与记录:
Ø有溶血现象,为阳性,记+;
Ø无溶血现象,为阴性,记-
(二)链激酶试验
1、原理:
A群链球菌群能产生链激酶,该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶,而后溶解纤维蛋白,使血凝块溶解,为阳性反应。
此试验用于测定链球菌的致病性。
阳性反应具有致病性。
2、试验方法:
Ø吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀,经离心沉淀,吸取上清液),加入0.8mL生理盐水,混匀后,再加入待检菌36℃下培养18-24h肉汤培养物0.5mL和0.25%氯化钙0.25mL,混匀,放37℃水浴中,2min观察一次。
Ø待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。
如2h内不溶化,继续放置24h后观察。
同时用肉浸液肉汤做阴性对照,用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。
3、结果观察与记录;
Ø如凝块全部溶化,为阳性+
Ø凝块24h仍不溶化,为阴性-
(三)卵磷脂酶试验
1、原理:
某些微生物能产生卵磷脂酶,在钙离子存在时,能迅速分解卵磷脂,生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱,在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环,或使血清、卵黄液变混浊,以此鉴别细菌。
2、试验方法:
(1)卵黄平板法
A法:
将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上,36±1℃培养3~6h,观察结果。
B法:
先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半,置于36℃待干后,将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上,再转划已涂过抗血清的一半,36±1℃厌氧培养24~48h,观察结果。
在未涂抗血清的一半平板上,菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区,在涂抗血清的一半平板上,菌落周围无不透明混浊区,为阳性。
两边均无不透明区,为阴性。
乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。
卵磷脂酶具抗原性,其活性可被相应抗血清所抑制,
(2)卵黄盐水法:
Ø将庖肉培养基培养物经除菌过滤,收集滤液。
在两支灭菌试管内,每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL,另一管加入生理盐水0.2mL作对照。
在36℃水浴中,经2h、4h、8h、24h观察结果。
Ø管底发生混浊沉淀,对照管无沉淀者,为阳性。
3、结果观察与记录:
Ø菌落周围形成较大的不透明区,为阳性。
Ø两边均无不透明区,为阴性。
Ø管底发生混浊沉淀,对照管无沉淀者,为阳性。
Ø两管无沉淀者,为阴性。
(四)血浆凝固酶试验
1、原理:
致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白,附着在细菌的表面,形成凝块;或作用于血浆凝固酶原,使它成为血浆凝固酶,从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。
2、试验方法
(1)玻片法:
取清洁干燥载玻片,一端滴加一滴生理盐水,另一端滴加一滴兔(人)血浆,挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合,5min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块,而盐水滴仍呈均匀混浊,则为阳性;如两者呈均匀混浊,无凝固则为阴性。
(2)试管法:
取灭菌小试管3支,各加入血浆①-无菌水(1:
1)0.5ml,1支加入被检菌株的营养肉汤培养液(或浓菌悬液)0.5ml;其余2支作对照管,1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9%氯化钠溶0.5ml作空白对照。
将3管同时放37℃温箱或水浴中培养,每0.5h观察一次,4h内无凝固现象者,观察直至24小时。
3、试管法的结果观察与记录:
Ø空白对照管的血浆流动自如,阳性对照管血浆凝固,试验管血浆凝固者为阳性;均无凝固则为阴性。
七、三糖铁(TSI)试验
1、三糖铁试验的原理:
Ø如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气,培养基全部变黄;
Ø如果只可以利用葡萄糖,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面最后为红色,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,仍保持黄色。
Ø如果细菌又能分解含硫化合物,产生硫化氢,培养基底部变黑。
2、试验方法:
以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,穿刺接种并涂布于斜面,置36±1℃培养18~24h,观察结果。
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