各种缓冲液的配制方法.docx
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各种缓冲液的配制方法
各种缓冲液的配制方法之杨若古兰创作
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
0.2mol/LNa2HPO4(ml)
0.1mol/L柠檬酸钠(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPO4(ml)
0.1mol/L柠檬酸钠(ml)
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(0.1mol/L)
PH
(ml)
钠(ml)
PH
(ml)
0.1mol/L柠檬酸钠(ml)
醋酸缓冲液(0.2mol/L,18℃)
PH
0.2mol/LNaAC(ml)
0.2mol/LHAC(ml)
PH
0.2mol/LNaAC(ml)
0.2mol/LHAC(ml)
(1)醋酸盐溶液的配制:
醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6)
取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水浓缩至250ml,即得. 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.7)
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝唆使液1ml及冰醋酸60~80ml,至溶液从蓝色改变成纯绿色,再加水浓缩至1000ml,即得.醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.8)
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水浓缩至1000ml,即得.醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水浓缩至1000ml,即得. 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.6)
取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值至4.6,再加水浓缩至100ml,即得. 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0)
取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水浓缩至500ml,即得.
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)](在此,C(HAc)指醋酸的浓度,C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5(1.8乘10的-5次方),PKa=-lgKa=4.75,将PH=5.5代入,可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L,或是C(HAc)=0.2mol/L等.若是配制C(HAc)=0.1mol/L,则C(NaAc)=0.56mol/L称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL.将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可.当然若想配制其它的浓度,也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不克不及配的太稀,否则缓冲能力要降低,太浓的话又浪费试剂.
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaOH(ml)
0.2mol/L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(ml)
0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液:
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中,浓缩至500ml.
磷酸缓冲液(0.2mol/L)
PH
0.2mol/LNa2HPO4(ml)
0.2mol/LNaH2PO4(ml)
PH
0.2mol/LNa2HPO4(ml)
0.2mol/LNaH2PO4(ml)
5.8
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
0.01MPBS
PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4,pH7.2)
称NaCl,KCl,KH2PO4(orNa2HPO4)和K2HPO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最初加蒸馏水定容至1L.保管于4℃冰箱中即可.
须要留意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.
母液的配制:
Na2HPO4:
称取Na2HPO4-12H2O,溶于1000ml水
NaH2PO4:
称取NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制:
先配PB(pH=7.4,100ml):
取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可.
然后只需将PB(pH=7.4)按响应比例适当浓缩即可,如:
PB(PH=7.4):
取500mlPB,加水浓缩至1000ml即可.
PB(PH=7.4):
取50mlPB,加水浓缩至1000ml即可.
PB(PH=7.4):
取100ml0.2MPB,加水浓缩至1000ml即可.
若须要NaCl的话,加入NaCl至0.9%(g/100ml)即可.
另:
其它各种另PH值的PB(100ml)配方:
pHNaH2PO4(ml)Na2HPO4(ml)
5.8928
5.99010
6.18515
6.85149
6.94555
7.03862
7.13367
7.22872
7.32377
7.419ml81ml
7.51684
7.61387
7.9793
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法
称取8gNaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最初加蒸馏水定容至1L即可.在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至多20分钟),保管存于室温或4℃冰箱中.
须要留意的是,通常所说的浓度指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调节渗透压的.如果是用于免疫组化的话,则须要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素以后再调PH、定容、灭菌消毒.
PH7.67.47.27.0
H2O1000100010001000
NaCl8.58.58.58.5
Na2HPO42.22.22.22.2
根据经验来看,新颖配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,特别在炎天,其电离常数发生了改变,在经过日夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸).所以做实验的同学可要留意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性.所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制成绩.每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,留意从头换新液.
PBS缓冲液
称取NaCl8g,KCl,Na2HPO4?
12H2O,KH2PO4,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保管备用.
PBST缓冲液
取300μlTween-20加入PBS100ml中,混匀后即刻使用.现用现配.
如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍浓缩,那么,在刚配好浓缩液时,PH在6.5摆布,明显偏酸.不克不及用盐酸调.虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法.
十倍浓缩当前,PH主动升高到所须要的值.不须要其它任何处理.这个可以先取少量试一试,配好以后再测一次~
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解.
3.滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1L.
4.高温高压灭菌后,室温保管.
留意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如须要,可在配方中弥补1mMCaCl2和0.5mMMgCl2.
0.05mol/LPBS(磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBS)的配制:
甲液:
0.05mol/LNa2HPO4溶液:
称取磷酸氢二钠,加蒸馏水至1000ml;
乙液:
0.05mol/LKH2P04溶液:
称取磷酸二氢钾,,加蒸馏水至1000m1.
将甲乙液分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保管,用时甲、乙两液各按分歧比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH甲液ml乙液mI
5.292.597.5
5.595.095.0
5.9110.090.0
6.2420.080.0
6.4730.070.0
6.6440.060.0
6.8150.050.0
6.9860.040.0
7.1770.030.0
7.3880.020.0
7.7390.010.0
8.0495.05.0
你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可.
硼酸缓冲液(0.2mol/L硼酸盐)
PH
0.05mol/L硼砂(ml)
0.2mol/L硼酸(ml)
PH
0.05mol/L硼砂(ml)
(ml)
硼砂易失去结晶水,必须在带塞得瓶中保管;硼砂溶液也能够用半中和的硼酸溶液代替
盐酸-氯化钾缓冲液
PH
0.1mol/LHCl(ml)
0.02mol/LKCl(ml)
加水至(ml)
PH
0.1mol/LHCl(ml)
0.02mol/LKCl(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
0.02mol/LKCl溶液:
溶7.455g氯化钾于水中,浓缩至500ml
苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液
PH
0.1mol/LHCl(ml)
0.02mol/L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(mi)
PH
0.1mol/LHCl(ml)
0.02mol/L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(mi)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
0.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液:
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中,浓缩至500ml
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
(ml)
0.2mol/L磷酸二氢钾(ml)
加水至(ml)
PH
(ml)
0.2mol/L磷酸二氢钾(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
25.00
100
100
0.2mol/L磷酸二氢钾溶液:
溶13.616g磷酸二氢钾于水中,浓缩至500ml
硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液
PH
0.1mol/LNaOH(ml)
0.2mol/L硼酸-氯化钾(ml)
加水至(ml)
PH
0.1mol/LNaOH(ml)
0.2mol/L硼酸-氯化钾(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
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