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综合实习
学生实习报告
实习名称
食品质量与安全综合实习
学生姓名
李家俊
学生学号
201211221115
所在专业
食品质量与安全
所在班级
食安1121班
实习地点
广东省湛江市质量计量监督检测所
国家海产品质量监督检验中心(湛江)
指导老师
孙力军
实习日期
2015年7月日至2015年8月31日
目录
1.实习目的3
2.实习内容4
2.1.水分直接干燥法4
2.2.蛋白凯氏定氮法5
2.3.脂肪6
2.4.二氧化硫7
2.5.菌落总数9
2.6.大肠菌群11
2.7.霉菌和酵母菌12
2.8.化工化肥中的钾13
3.实习总结16
1.实习目的
本所于2003年8月经广东省质量技术监督局批准,由原广东省湛江市产品质量监督检验所、广东省湛江市计量测试所和广东省湛江市衡器管理所三所合并而成立(批准文号:
粤质监人函[2003]223号,)其上级领导部门为广东省湛江市质量技术监督局。
本所属事业法人性质,是依法设置的国家法定计量检定机构,授权证书号为:
(粤)法计(2004)01013号,又是经广东省质量技术监督局质量认可和计量认证的产品质量检测机构,授权证书号为:
(广东)省质监认字(052)号;计量认证号为:
(89)量认(粤)字(20179)号。
有自己的名称、组织机构和场所,负责人具有法人资格,由上级质量、计量行政部门的正式任命。
本所独立、公正地对外开展产品质量检测及计量器具的检定、校准和商品量的检测工作,能独立承担民事责任。
在本所内设置的广东省技术监督制糖产品质量监督检验站(湛江站),广东省海产品质量监督检测站、湛江市农产品质量检测中心,其授权部门为广东省质量技术监督局。
与本所是同一机构不同牌子,根据下达任务的主管部门或客户的要求可以用不同的名义出具报告/证书。
本所的业务范围包括产品质量检测及计量检定/校准和商品量检测三大部分,现有检测设备400多台套,产品质量检测承检范围包括食品、化工产品(化验室)、机电产品(机电室)、轻工建材产品(轻建室)等600多种,计量器具检定/校准方面建立了长度、力学、电磁、时间频率、无线电、温度、光学、声学、化学、电离辐射等10大类64项社会公用计量标准,授权检定项目131项,授权校准项目145项,还授权开展商品量检测工作。
本所现有员工110人,技术人员占77%,其中,具有工程师以上职称的占38.9%。
本所具有固定的场所,总面积为4600平方米。
2.实习内容
2.1.水分直接干燥法
2.1.1原理
利用食品中水分的物理性质,在101.3kPa(一个大气压),温度101℃~105℃下采用挥发方法测定样品中干燥减失的重量,包括吸湿水、部分结晶水和该条件下能挥发的物质,再通过干燥前后的称量数值计算出水分的含量。
2.1.2试剂和材料
2.1.3仪器和设备
2.1.3.1玻璃制称量瓶。
2.1.3.2电热恒温干燥箱。
2.1.3.3干燥器:
内附有效干燥剂。
2.1.3.4天平:
感量为0.1mg。
2.1.4分析步骤
取玻璃制的扁形称量瓶,置于105℃干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,加热1.0h,取出盖好,置干燥器内冷却0.5h,称量,并重复干燥至前后两次质量差不超过2mg,即为恒重。
将混合均匀的试样迅速磨细至颗粒小于2mm,不易研磨的样品应尽可能切碎,称取1g~1.5g试样(精确至0.0001g),放入此称量瓶中,试样厚度不超过5mm,如为疏松试样,厚度不超过10mm,加盖,精密称量后,置105℃干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,干燥4h后,盖好取出,放入干燥器内冷却0.5h后称量。
然后再放入101℃~105℃干燥箱中干燥1h左右,取出,放入干燥器内冷却0.5h后再称量。
并重复以上操作至前后两次质量差不超过2mg,即为恒重。
注:
两次恒重值在最后计算中,取最后一次的称量值。
2.1.5分析结果的表述
试样中的水分的含量按式
(1)进行计算。
……………………………………………………
(1)
式中:
X——试样中水分的含量,单位为克每百克(g/100g);
m1——称量瓶(加海砂、玻棒)和试样的质量,单位为克(g);
m2——称量瓶(加海砂、玻棒)和试样干燥后的质量,单位为克(g);
m3——称量瓶(加海砂、玻棒)的质量,单位为克(g)。
水分含量≥1g/100g时,计算结果保留三位有效数字;水分含量<1g/100g时,结果保留两位有效数字。
2.1.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。
2.2.蛋白凯氏定氮法
2.2.1原理
食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质的含量。
2.2.2试剂和材料
除非另有规定,本方法中所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。
2.2.2.1硫酸铜(CuSO4·5H2O)。
2.2.2.2硫酸钾(K2SO4)。
2.2.2.3硫酸(H2SO4密度为1.84g/L)。
2.2.2.4硼酸(H3BO3)。
2.2.2.5甲基红指示剂(C15H15N3O2)。
2.2.2.6溴甲酚绿指示剂(C21H14Br4O5S)。
2.2.2.7亚甲基蓝指示剂(C16H18ClN3S·3H2O)。
2.2.2.8氢氧化钠(NaOH)。
2.2.2.995%乙醇(C2H5OH)。
2.2.2.10硼酸溶液(20g/L):
称取20g硼酸,加水溶解后并稀释至1000mL。
2.2.2.11氢氧化钠溶液(400g/L):
称取40g氢氧化钠加水溶解后,放冷,并稀释至100mL。
2.2.2.12硫酸标准滴定溶液(0.0500mol/L)或盐酸标准滴定溶液(0.0500mol/L)。
2.2.2.13甲基红乙醇溶液(1g/L):
称取0.1g甲基红,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。
2.2.2.14亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L):
称取0.1g亚甲基蓝,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。
2.2.2.15溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L):
称取0.1g溴甲酚绿,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。
2.2.2.16混合指示液:
2份甲基红乙醇溶液(4.13)与1份亚甲基蓝乙醇溶液(4.14)临用时混合。
也可用1份甲基红乙醇溶液(4.13)与5份溴甲酚绿乙醇溶液(4.15)临用时混合。
2.2.3仪器和设备
2.2.3.1天平:
感量为1mg。
2.2.3.2自动凯氏定氮仪。
2.2.3.3电热消化加热板
2.2.4分析步骤
2.2.4.1试样处理:
称取充分混匀的固体试样0.2g~2g、半固体试样2g~5g或液体试样10mL(约相当于30mg~40mg氮),精确至0.001g,移入干燥的消化管中,加入0.2g硫酸铜(4.1)、6g硫酸钾(4.2)及20mL硫酸(4.3),轻摇后于瓶口放一小漏斗,将消化管置于消化加热板上。
小心加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色并澄清透明后,再继续加热0.5h~1h。
取下放冷。
同时做试剂空白试验。
2.2.4.2测定:
放冷后,启动自动凯氏定氮仪,按程序清洗仪器,将消化管装在自动凯氏定氮仪上。
向接收瓶内加入10.0mL硼酸溶液(4.10)及1滴~2滴混合指示液(4.16),并使冷凝管的下端插入液面下,启动程序开始蒸馏。
蒸馏程序完成后移动蒸馏液接收瓶,液面离开冷凝管下端。
然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下蒸馏液接收瓶。
以硫酸或盐酸标准滴定溶液(4.12)滴定至终点,其中2份甲基红乙醇溶液(4.13)与1份亚甲基蓝乙醇溶液(4.14)指示剂颜色由紫红色变成灰色,pH5.4;1份甲基红乙醇溶液(4.13)与5份溴甲酚绿乙醇溶液(4.15)指示剂,颜色由酒红色变成绿色,pH5.1。
同时作试剂空白。
2.3.脂肪
2.3.1原理
利用乙醚浸泡分离固体样品中的脂肪,加热挥发乙醚后称量,减少的质量即为样品的粗脂肪含量。
2.3.2仪器和试剂
2.3.2.1乙醚
2.3.2.2滤纸
2.3.2.3带盖浸泡罐(2个)
2.3.2.4电热干燥箱
2.3.2.5干燥器
2.3.2.6天平:
感量为1mg。
2.3.3试样处理
将试样充分切碎,混匀备用。
在天平上垫上滤纸,称量滤纸质量。
将样品置于滤纸上进行称量。
称取0.5g~1g样品,然后将滤纸折成纸包,置于浸泡罐内,加入乙醚至完全浸没,盖紧盖子,于避光处静置过夜。
将纸包取出,置于另一个浸泡罐内,加入乙醚至完全浸没,盖紧盖子,于避光处静置1~2h,将纸包再次取出后,置于电热干燥箱中干燥4h。
干燥后的纸包置于干燥器中冷却0.5h后称重。
2.3.4结果表述
测量结果代入下式进行计算
……………………………………………………………
(1)
式中:
A表示样品中粗脂肪含量
表示滤纸的质量,单位为g
表示滤纸和未浸提脂肪的样品的质量,单位为g
表示滤纸和已经浸提脂肪的样品的质量,单位为g
方法讨论:
可以同时测定多个样品,索氏提取法一套器材一次只能测定一个样品。
浸提、干燥等步骤无需全程看守,索氏提取法需要有人全程看守防止乙醚在提取的高温下点燃。
第一次浸提可以静置过夜,可以安排在下班时间,上班时间可以直接得出结果,无需将上班时间消耗在看守提取过程中。
2.4.二氧化硫
2.4.1原理
亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物,再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物,与标准系列比较定量。
2.4.2试剂
2.4.2.1四氯汞钠吸收液:
称取13.6g氯化高汞及6.0g氯化钠,溶于水中并稀释至1000mL,放置过夜,过滤后备用。
2.4.2.2氨基磺酸铵溶液(12g/L),
2.4.2.3甲醛溶液(2g/L):
吸取0.55mL无聚合沉淀的甲醛(36%),加水稀释至100mL,混匀。
2.4.2.4淀粉指示液:
称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100mL沸水中,随加随搅拌,煮沸,放冷备用,此溶液临用时现配。
2.4.2.5亚铁氰化钾溶液:
称取10.6g亚铁氰化钾[K,Fe(CN)6·3H2O),加水溶解并稀释至100mL。
2.4.2.6乙酸锌溶液:
称取22g乙酸锌〔Zn(CH3COO)2·2H2O]溶于少量水中,加入3mL冰乙酸,加水稀释至100ml。
2.4.2.7盐酸副玫瑰苯胺溶液:
称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺于研钵中,加少量水研磨使溶解并稀释至100mL。
取出20mL,置于100mL容量瓶中,加盐酸(1+1),充分摇匀后使溶液由红变黄,如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色,再加水稀释至刻度,混匀备用(如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替)。
2.4.2.8盐酸副玫瑰苯胺的精制方法:
称取20g盐酸副玫瑰苯胺于400mL水中,用50mL盐酸(1+5)酸化,徐徐搅拌,加4g~5g活性炭,加热煮沸2min。
将混合物倒入大漏斗中,过滤(用保温漏斗趁热过滤)。
滤液放置过夜,出现结晶,然后再用布氏漏斗抽滤,将结晶再悬浮于1000mL乙醚一乙醇(10:
1)的混合液中,振摇3min~5min,以布氏漏斗抽滤,再用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止,于硫酸干燥器中干燥,研细后贮于棕色瓶中保存。
2.4.2.9碘溶液c(1/212)=0.100mol/L
2.4.2.10硫代硫酸钠标准溶液[c(
)=0.100mol/L]o
2.4.2.11二氧化硫标准溶液:
称取0.5g亚硫酸氢钠,溶于200mL四氯汞钠吸收液中,放置过夜,上清液用定量滤纸过滤备用。
吸取10.0mL亚硫酸氢钠一四氯汞钠溶液于250mL碘量瓶中,加100mL水,准确加入20.00mL碘溶液(0.1mol/L),5mL冰乙酸,摇匀,放置于暗处,2min后迅速以硫代硫酸钠(0.100mol/L)标准溶液滴定至淡黄色,加0.5mL淀粉指示液,继续滴至无色。
另取100mL水,准确加入碘溶液20.0mL(0.1mol/L),5mL冰乙酸,按同一方法做试剂空白试验。
二氧化硫标准溶液的浓度按式
(1)进行计算。
……………………………………………
(1)
X—二氧化硫标准溶液浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);
V2—测定用亚硫酸氢钠—四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积,单位为毫升(mL);
V1—试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液体积,单位为毫升(mL);
c—硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度,单位为摩尔每升(mol/L);.
32.03—每毫升硫代硫酸钠c(
)=1.000mol/L标准溶液相当于二氧化硫的质量,单位为毫克(mg)
2.4.2.12二氧化硫使用液:
临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于2ug二氧化硫
2.4.2.13氢氧化钠溶液(20g/L)。
2.4.2.14硫酸(1+71)
2.4.3仪器
分光光度计。
2.4.4分析步骤
2.4.4.1试样处理
水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀试样(试样量可视含量高低而定),以少量水溶解,置于100mL容量瓶中,加入4mL氢氧化钠溶液((20g/L),5min后加入4mL硫酸(1+71),然后加入20ml四氯汞钠吸收液,以水稀释至刻度。
其他固体试样如饼干、粉丝等可称5.0g~10.0g研磨均匀的试样,以少量水湿润并移入100mL容量瓶中,然后加入20mL四氯汞钠吸收液,浸泡4h以上,若上层溶液不澄清可加入亚铁氰化钾(3.5)及乙酸锌(3.6)溶液各2.5mL,最后用水稀释至100mL刻度,过滤后备用。
液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.0mL~10.0mL试样,置于100mL容量瓶中,以少量水稀释,加20mL四氯汞钠吸收液,摇匀,最后加水至刻度,混匀,必要时过滤备用。
2.4.4.2测定
吸取0.50mL-5.0mL上述试样处理液于25mL带塞比色管中。
另吸取0.00、0.20、0.40,0.60、0.80、1.00、1.50、2.00mL二氧化硫标准使用液(相当于0.0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0,3.0,4.0μg二氧化硫),分别置于25mL带塞比色管中。
于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10mL,然后再加入1mL氨基磺酸铵溶液(12g/L),1mL甲醛溶液((2g/L)及1mL盐酸副玫瑰苯胺溶液,摇匀,放置20min。
用1cm比色杯,以零管调节零点,于波长550nm处测吸光度,绘制标准曲线比较。
计算
试样中二氧化硫的含量按式
(2)进行计算。
…………………………………………………………
(2)
式中:
X—试样中二氧化硫的含量,单位为克每千克(9/kg);
A—测定用样液中二氧化硫的质量,单位为微克(拜9);
m—试样质量,单位为克(9):
V一测定用样液的体积,单位为毫升(mL).
计算结果表示到三位有效数字。
2.4.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过10%。
2.5.菌落总数
2.5.1设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.5.1.1恒温培养箱:
36℃±1℃,30℃±1℃。
2.5.1.2冰箱:
2℃~5℃。
2.5.1.3恒温水浴箱:
46±1℃℃。
2.5.1.4天平:
感量为0.1g。
2.5.1.5均质器。
2.5.1.6振荡器。
2.5.1.7微量移液器及吸头。
2.5.1.8无菌培养皿:
直径90mm。
2.5.1.9pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.5.1.10放大镜或/和菌落计数器。
2.5.2培养基和试剂
2.5.2.1平板计数琼脂培养基
2.5.2.2无菌生理盐水
2.5.3操作步骤
2.5.3.1固体和半固体样品:
称取5~15g样品至盛有均质袋中,按照设定的程序以1:
10的比例加入。
即为1:
10稀释液。
2.5.3.2液体样品:
以无菌吸管吸取1mL样品至盛有9mL灭菌生理盐水的带盖玻璃管中,充分混匀,制成1:
10的样品匀液。
2.5.3.3选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液,各取1mL分别加入无菌培养皿内.
2.5.3.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:
100的样品匀液。
2.5.3.5按2.5.3.4操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次吸头。
2.5.3.6根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
2.5.3.7及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46±1℃℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
2.5.3.8培养
待琼脂凝固后,将平板翻转,36±1℃培养48h±2h。
水产品30±1℃培养72h±3h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,以相同条件进行培养。
2.5.3.9菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。
选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
2.5.4结果与报告
2.5.4.1菌落总数的计算方法
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式
(1)计算:
…………………………………
(1)
式中:
N——样品中菌落数;
∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d——稀释因子(第一稀释度)。
若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
2.5.4.2菌落总数的报告
菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。
若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。
2.6.大肠菌群
2.6.1设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.6.1.1恒温培养箱:
36℃±1℃。
2.6.1.2冰箱:
2℃~5℃。
2.6.1.3恒温水浴箱:
46±1℃℃。
2.6.1.4天平:
感量0.1g。
2.6.1.5均质器。
2.6.1.6振荡器。
2.6.1.7无菌吸管:
1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。
2.6.1.8无菌锥形瓶:
容量500mL。
2.6.1.9无菌培养皿:
直径90mm。
2.6.1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2.6.1.11菌落计数器。
2.6.2培养基和试剂
2.6.2.1.结晶紫中性红胆盐琼脂(VioletRedBileAgar,VRBA):
见附录A中A.3。
2.6.2.2.无菌生理盐水:
2.6.3检验程序
2.6.3.1.样品的稀释
2.6.3.1.1.固体和半固体样品:
称取5~15g样品至盛有均质袋中,按照设定的程序以1:
10的比例加入。
即为1:
10稀释液。
2.6.3.1.2.液体样品:
以无菌吸管吸取1mL样品至盛有9mL灭菌生理盐水的带盖玻璃管中,充分混匀,制成1:
10的样品匀液。
2.6.3.1.3.选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液,
2.6.3.1.4.各取1mL分别加入无菌培养皿内
2.6.3.1.5.用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:
100的样品匀液。
2.6.3.1.6.按6.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次吸头。
2.6.3.1.7.根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
2.6.3.2.培养
待琼脂凝固后,将平板翻转,36±1℃培养48h±2h。
水产品30±1℃培养72h±3h。
2.6.3.3平板计数
选取2个~3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿1mL。
同时取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
及时将15mL~20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约倾注于每个平皿中。
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