植物组织培养复习.docx
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植物组织培养复习
一、什么叫植物组织培养技术?
它有哪些类型?
其理论依据是什么?
(1)广义的植物组织培养(planttissueculture)是指在无菌和人工预知的控制条件下,利用适当的培养基,对离体的植物器官、组织或细胞进行离体培养,使其再生细胞或生长、分化成完整植株的技术。
狭义的植物组织培养仅指对植物的组织(如分生组织、表皮组织、薄壁组织等)及培养产生的愈伤组织(callus)进行离体培养的技术。
(2)类型:
植株的培养;胚胎培养;器官培养;组织培养;细胞培养;原生质体培养。
(3)植物细胞全能性(totipotency)是植物组织培养的理论基础。
它是指一个生活的植物细胞,只要有完整的膜系统和细胞核,它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息,在适当的条件下,这些信息可以表达,再生成一个完整植株。
二、从外植体到小植株有哪些培养途径?
答:
愈伤组织再分化时,可经过两条途径,一是由愈伤组织的部分细胞先分化产生芽(或根),再在另一种培养基上产生根(或芽),形成一个完整的植株,因为芽和根都是植物体的器官,所以这一过程叫器官发生途径。
二是在愈伤组织中产生出一些与种子中的胚相似的结构,即同时形成一个有苗端和根端的两极性结构,然后再在另一种培养基上同时发展成带根苗,由于这一过程与种子中胚的形成和种子萌发时形成幼苗的过程相似,所以叫做胚状体发生或无性胚胎发生
三、试述目前植物组织培养的应用。
答:
(1)植物离体快繁、
(2)无病毒苗木培育、(3)培育新品种或创制新物种、(4)次生代谢物生产、(5)种质资源保存(6)人工种子。
第1章植物组织培养实验室的基本设备和一般技术
一、简述培养基和器具的灭菌方法和技术。
培养基的灭菌方法:
高压蒸汽灭茵法:
培养基消毒灭菌时间不宜过长,也不可超过灭菌锅规定的压力范围(1.15kgf·cm-2或O.15MPa,温度126℃);否则,培养基中的蔗糖、有机物质,特别是维生素类物质就会分解,导致培养基变质、变色,甚至难以凝固。
过滤除菌法:
过滤灭菌的原理是溶液通过滤膜后,细菌的细胞和孢子等因大于滤膜孔径而被阻。
器具的灭菌方法:
(1)干热灭菌法
干热灭菌法是将器具长时间放在高温下消除杂菌的一种方法。
其具体做法是将需要灭菌的器具(玻璃器皿或器械)先用铝箔包好,放入温度设定为150℃的恒温干燥箱内,保温2h,取出冷却后便可以使用。
(2)高压蒸汽灭茵法
高压蒸汽灭菌法是将需灭菌的玻璃器皿、器械或培养基等放在高压蒸汽灭菌锅内,通过高温高压进行灭菌的一种方法。
一般在1.06kg/cm2的压力下(121℃)下保持15~20min,就可达到灭菌效果。
对于无菌操作所用的各种器械,如镊子、解剖刀、解剖针等,可采用灼烧灭菌。
一般的消毒办法是把它们先在95%酒精中浸一下,然后再置火焰上灼烧,然后放在灭过菌的支架上,待冷却后使用。
二、简述植物材料消毒的一般过程。
第一步:
材料的修整、刷洗、冲洗。
第二步:
是用洗衣粉水或肥皂水浸洗并搅动。
第三步:
材料的表面灭菌。
三、常用灭菌剂有哪些?
其消毒原理是什么?
各有哪些优缺点?
灭菌剂
使用浓度(%)
持续时间(分钟)
去除的难易
效果
次氯酸钙
次氯酸钠
过氧化氢(双氧水)
溴水
硝酸银
氯化汞(升汞)
抗生素
5~10
2
10~12
1~2
1
0.1~1
4~50ppm
5~30
5~30
5~15
2~10
5~30
2~15
30~60
易
易
最易
易
较难
较难
中
很好
很好
好
很好
好
最好
比较好
四、简述植物组织培养无菌操作技术的一般过程。
目前多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。
具体的无菌操作步骤如下:
①在实验之前30min将超净工作台的紫外灯打开,进行灭菌。
工作人员要避免紫外线照射。
做实验时将紫外灯关闭。
②用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台消毒(酒精浓度为70%)。
③实验操作前,工作人员的手和小臂用70%酒精消毒。
③使用的镊子、解剖刀等用90%酒精浸泡,之后放在酒精灯上火烧灭菌,再放在灭菌支架上冷却后使用。
④在植入或移植材料的前后,培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌。
第二章
一、常用培养基分为哪几类?
各类的主要特点是什么?
MS培养基
答:
(1)MS培养基:
特点是无机盐的浓度高,有加速愈伤组织生长的作用,能满足植物组织对矿质营养的要求。
铵盐和硝酸盐含量高,比例也比较适合,也不需要添加更多的有机附加物,这是目前应用最广泛的一种培养基。
但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求较低的植物,尤其不适合过高易发生毒害的植物。
White培养基:
特点是一个无机盐浓度较低的培养基。
它的使用也很广泛,同时它还非常适合于生根培养和胚胎培养。
B5培养基:
它的主要特点是含有较低的铵盐,该营养成分可能对不少培养物的生长有抑制作用,对有些植物如双子叶植物(如豆科植物)特别是木本植物,却更适合生长。
N6培养基:
其KN03和(NH4)2S04含量高且不含钼,广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养和组织培养。
SH培养基:
与B5相似,不用(NH4)2S04而改用NH4H2P04,在不少单子叶和双子叶植物上使用,效果很好。
马铃薯简化培养基是为适应经济条件较差的农村农科站和中学而设计的,既经济又适用,容易取材,有利于组培技术推广和普及。
二、培养基的成分有哪些?
各有什么作用?
答:
目前,不论液体培养还是固体培养,大多数植物组织培养中所用的培养基都是由水、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。
(1).水分:
生物的生命活动离不开水分,构成培养基的绝大部分组分为水分。
(2).无机营养物(无机盐):
提供植物所必需的16种营养元素
(3).碳源和能源:
①作为生长发育的能源;②具有维持培养基一定渗透压的作用
(4).维生素类:
与植物体内各种酶的形成有关,在植物组织培养中通常以B族维生素为主
)
(5).氨基酸及有机附加物:
是培养基中重要的有机氮源,最常用的是甘氨酸,它能促进离体根的生长,对植物组织培养物的生长也有良好的促进效果
(6)植物生长调节物质:
生长调节物质是培养基中不可缺少的关键物质,其用量虽极少,但它们对外植体愈伤组织的诱导和器官分化起着重要和明显的调节作用,其中以生长素类和细胞分裂素类最为常用。
生长素类常用的是2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲哚丁酸),它们作用的强弱顺序为:
2,4-D>NAA>IBA>IAA。
在培养基中加入细胞分裂素的目的,主要是为促进细胞分裂和由愈伤组织或器官上分化不定芽。
作用的强弱顺序为:
TDZ,4PU>ZT>2-iP>6-BA>KT
(7)琼脂:
它的主要作用是使培养基在常温下凝固,同时不参与代谢
(8)其他成分:
①活性炭减少一些有害物质的影响,性炭使培养基变黑,有利于某些植物生根,对形态发生和器官形成有良好的效应。
②
硝酸银起到促进愈伤组织器官发生或体细胞胚胎发生的作用,并能使某些原来再生困难的物种分化出再生植株。
③抗生素防止由外植体内生菌造成的污染,减少培养物中材料的损失。
④防止酚类物质污染的添加剂洗涤刚切割的外植体伤口表面,或过滤灭菌后加入固体培养基的表层.
三、试述培养基选择的方法。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:
一是基本培养基;二是各种激素的浓度及相对比例。
组织培养中对培养物影响最大的是外源激素,在基本培养基确定之后,实验中要大量进行的工作是用不同种类的激素进行浓度和各种激素间相互比例的配合试验。
四、简述培养基配制的基本过程。
1、药品及用具的准备;
(1)MS培养基母液的配制
(2)用具、用品的准备
2、MS培养基配置步骤
(1)称量琼脂,假如适量蒸馏追,加热溶解
(2)加入规定用量的母液、蔗糖、生长调节物质等
(3)调节培养基的PH至5.8,加蒸馏水至所需体积
(4)培养基的分装
(5)培养基的灭菌
第三章细胞全能性与器官发生
一、简述植物细胞全能性、细胞分化、脱分化与再分化的概念。
(1)植物细胞全能性(totipotency)是指一个生活的植物细胞,只要有完整的膜系统和细胞核,它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息,在适当的条件下,这些信息可以表达,再生成一个完整植株。
(2)细胞分化(differentiation)是指生物在个体发育过程中细胞由一般变为特殊的现象,即普通形态结构的细胞,向着不同形态结构的方向发展,从而在机能上也各不相同。
(3)脱分化(dedifferentiation)由失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂,形成一种高度液泡化的呈无定形态的薄壁细胞即愈伤组织的现象
(4)再分化(redifferentiation)由无分化的愈伤组织的细胞再转变成为具有一定结构,执行一定生理功能的细胞团和组织,进而构成一个完整的植物体或植物器官的现象(或过程),
二、再分化有哪几种方式?
它们的特点是什么?
再分化有两种途径,一种是器官发生(organogenesis)途径,一种是胚胎发生(embryogenesis)途径。
前者具体包括:
①先形成芽,后在芽基部长根;②先形成根,再从根基部形成芽;③在愈伤组织不同部位分别形成芽和根,然后根、芽的维管束接通形成完整植株;④仅形成芽或根(如茶树的花粉愈伤组织诱导器官分化时,往往只形成根,而芽的发生则十分困难)。
在大多数情况下,再分化过程是在愈伤组织细胞中发生的,但在有些情况下,再分化可以直接发生于脱分化的细胞中,无须经历愈伤组织阶段。
三、愈伤组织形成的条件是什么?
其形成过程分为哪几个阶段?
(1)愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类,而是培养条件,其中激素的种类和浓度最为重要。
诱导愈伤组织常用的生长素是2,4-D,IAA和NAA,常用的细胞分裂素是KT和6-BA。
(2)外植体的类型
(3)外植体原来在植株上所处的位置
四、试述优良愈伤组织应用具备的特点及获得优良愈伤组织的方法。
特点
(1)高度的胚性或再分化能力,以便从这些愈伤组织得到再生植株。
(2)容易散碎,以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮系,并且在需要时能从中分离出全能性原生质体。
(3)旺盛的自我增殖能力,以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系。
(4)经过长期继代保存而不丧失胚性,以便有可能对它们进行各种遗传操作。
方法
(1)选择适当的基因型和适当的外植体。
(2)选择正确的培养基,
(3)采用某些特殊的理化因素改变愈伤组织诱导培养基和培养条件。
其中最主要的是植物激素和氮源形态。
5、影响茎芽分化的因素有哪些?
(1)生长素和蔗糖是对维管组织分化过程有显著影响的两种物质。
它们能从质和量两个方面影响维管组织的分化。
某些证据还指出,细胞分裂素和赤霉素也可能与木质部发生过程有关。
生长素
(2)一般来说,低浓度的生长素能刺激木质部的发生,在生长素浓度和木质部分化程度之间存在着一种反比关系。
在洋丁香愈伤组织中,改变生长素浓度还能导致维管组织分化位置的变化。
(3)生长素对维管组织分化所起的作用看来在很大程度上取决于糖的存在。
当培养基中含有低浓度生长素时,通过改变蔗糖浓度,即可改变洋丁香和菜豆愈伤组织块中所形成的木质部和韧皮部的相对数量。
(4)现在已有愈来愈多的证据表明,细胞分裂素也可能与木质部发生有关。
此外也有报道,对于木质部分化来说,在生长素和赤霉素之间存在着一种刺激性的相互作用。
(5)物理因子对维管分化也起一定作用的作用
第4章体细胞胚胎发生
一、植物体细胞胚胎发生的概念是什么?
有哪些途径?
(1)由单细胞或一群细胞被诱导不断再生非合子胚,并萌发形成完整植株的发育过程称为体细胞胚胎发生。
(2)直接途径是指从培养中的器官、组织、细胞或原生质体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎,中间不经过愈伤组织阶段间接途径是指外植体先脱分化形成愈伤组织,再从愈伤组织的某些细胞,即重新“决定”为胚性细胞的细胞分化出体细胞胚胎
二、影响体细胞胚胎发生的主要因子有哪些?
对于体细胞胚胎发生特别重要的是培养基中的两种成分,即生长素和氮源。
(1)在培养基中添加生长素,通常对体细胞胚诱导是必不可缺少的。
(2)除生长素外,培养基中氮源的形态也会显著影响离体条件下的胚胎发生。
体细胞胚诱导和成熟需要大量氮素,通常为还原态氮如铵盐。
(3)其他因子:
在培养基中加入活性炭也能提高胡萝卜细胞胚胎发生的频率;某些组织释放挥发性和非挥发性物质到培养基中,能抑制愈伤组织中的体细胞胚胎发生。
乙醇是这些挥发性抑制物质中的一种,非挥发性抑制物包括IAA、ABA和GA3。
三、长期培养物形态发生潜力丧失的可能原因有哪些?
(1)遗传假说,培养细胞中细胞核物质变化,如多倍性、非整倍性和染色体结构突变,可能与长期培养物器官发生或胚胎发生潜能丧失有关。
这种由遗传原因造成的形态发生潜力的丧失是不可逆的。
(2)生理假说在某些情况下,形态发生潜力的下降可能是由于细胞或组织内激素平衡关系的改变造成的,或是由于细胞对外源生长物质敏感性的改变造成的。
(3)竞争假说在复合多细胞外植体中,只有少数细胞能产生胚性细胞团,其余细胞没有细胞全能性。
四愈伤组织培养中存在哪两种类型的细胞?
它们的特点是什么?
(1)紧密型(compact):
愈伤组织内无大的细胞间隙,细胞间被果胶质紧密结合,不易形成良好的悬浮系统。
(2)松脆型(friable):
愈伤组织内有大量大的细胞间隙,细胞排列无次序,容易分散成单细胞或少数几个细胞组成的小细胞团,是进行悬浮培养的最合适的材料。
两类愈伤组织通过激素调节可互相转变。
五简述制造单胚人工种子的方法和工业化生产人工种子的步骤。
植物人工种子是指将植物离体培养中产生的体细胞胚或能发育为完整植株的分生组织(芽,愈伤组织,胚状体)包埋在含有营养物质和具有保护功能的外壳内形成的在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体
1方法:
(1)人工种子由包裹在防护层中的体细胞组成,在制造单胚人工种子的时候,主要采用诸如藻酸钠一类的水凝胶作为体细胞胚的包被物质。
(2)当体细胞胚与藻酸钠混合以后,再滴人到硝酸钙或氯化钙溶液中,30min内表面即可完全络合,形成一层持久的种皮
(3)在种皮基质中还可加入一些对体细胞胚有益的物质,如能促进生长的微生物、营养物质、生长调节物质、杀虫剂以及用于旱地播种的亲水性化合物等作为人工胚乳。
2步骤,首先,必须建立起适当的组织培养技术,从中能产生高质量的大小一致和发育期同步的、功能像合子胚一样的体细胞胚。
为了促成体细胞胚的同步发育,现在常常采用的方法有以下3种:
(1)在细胞培养初期,于培养基中加入DNA合成抑制剂如5-氨基尿嘧啶等,使细胞分裂暂停,或将培养物置于低温之下,以抑制细胞分裂。
一定时间之后,除掉抑制剂或转入正常温度下培养,以促使细胞同步分裂。
(2)将培养细胞用不同直径的玻璃珠或不同孔径的尼龙网过滤,以收集不同发育时期的胚状体。
(3)利用渗透压控制胚胎发育同步性。
还必须建立大规模自动化的液体培养体系,以便生产数量足够的体细胞胚。
生产具有适当水分含量的种皮的方法,掺入营养物质和其他附加物质的方法,以及用于包埋体细胞胚的设备等,也都有待改进。
六、试述体细胞胚胎发生的实际应用。
(1)无性繁殖
由于胚性细胞生长和随后的体细胞胚发育可以在液体培养基中进行,所以将体细胞胚发生与工程技术结合,可以建立大规模的机械化或自动化培养体系。
这种培养体系能循环生产大量的繁殖体(体细胞胚胎),且成本低廉。
在重复体细胞胚胎发生(又称为副体细胞胚发生、不定胚发生或次级体细胞胚胎发生)的过程中,从原有的体细胞胚增殖体细胞胚,经过一次循环,可以形成体细胞胚无性系。
(2)人工(合成)种子的制备
通过用人工种皮包被体细胞胚而制造人工种子(或称合成种子),用以繁殖遗传工程植物、减数分裂不稳定的基因型、自交不亲合植物、稀有的和珍贵的物种或远缘杂交种,以及通过人工授粉而得到的杂种等是当前的一个研究热点之一。
(3)分离可再生的原生质体的材料
胚性愈伤组织、悬浮培养物和体细胞胚已作为许多植物原生质体分离的材料。
这些培养体系中的细胞或组织在培养过程中表现出再生植株的潜能,为此,其原生质体也有形成完整植株的能力。
在禾本科植物、松柏类植物和柑橘植物中,胚性培养物作为可再生的原生质体
材料具有特别的价值。
(4)遗传转化
由于叶圆盘转化体系的出现,使成功培育遗传工程植物(烟草、苜蓿)成为可能,而这些植物的培养组织能够通过体细胞胚胎发生途径再生植株。
在这些植物中,遗传转化从培养物分离的单细胞,然后将其培养在选择培养基上(营养培养基含抗生素、卡那霉素),形成愈伤组织系,最后在除去生长素的培养基上形成体细胞胚。
由于间接体细胞胚胎发生中愈伤组织阶段似乎很重要,所以不能排除从转化和未转化组织形成嵌合体细胞胚的可能性。
为此,可以通过重复体细胞胚胎发生,绕过愈伤组织阶段。
(5)代谢产物的合成
重复体细胞胚胎发生体系在合成代谢产物如药物和油脂中有潜在的应用前景。
如玻璃苣种子含有高水平的γ-亚麻酸,用作前列腺素前体或治疗遗传性过敏症。
玻璃苣体细胞胚也产生该代谢产物,而且通过重复体细胞胚胎发生,能连续形成γ-亚麻酸,否则这种代谢产物会局限在合子胚生长的季节。
(6)遗传资源的保存
起源于单细胞的体细胞胚,接着再生遗传上几乎完全一致的植株,是遗传资源(种质资源)保存需要的良好材料。
我们可将胚性培养物以及体细胞胚室温贮藏、冷藏或低温贮藏,能保持其活力。
七、愈伤组织的形成过程:
(1)、启动期(诱导期):
是外植体细胞进行分裂准备的时期。
在这一时期外植体细胞大小虽然没有多大变化,但细胞内合成代谢活跃,RNA含量迅速增加,细胞核体积明显增大,其长短由一系列内外因素决定。
(2)、分裂期:
经过诱导期之后,外植体外层细胞开始迅速分裂,不过外植体中间部分的细胞不分裂,形成了一个静止的芯。
其细胞分裂的速度大大超过了细胞伸张的速率,细胞体积迅速变小,逐渐回复到分生状态(脱分化),脱分化细胞不断进行分裂,从而形成了愈伤组织。
(3)、分化期(形成期):
外植体细胞经过诱导期和分裂期后形成了无序结构的愈伤组织的时期。
其细胞的平均大小相对稳定,不再减少,细胞分裂由原来局限在组织外缘的平周分裂转为组织内部较深层细胞的分裂,结果形成瘤状或片状的拟分生组织。
八、体细胞胚与合子胚的比较:
(1)、体细胞胚是由愈伤组织或胚性细胞团的表面细胞起源的,所处的发育条件与合子胚不相同。
(2)、在自然界,不定胚早期分裂顺序与合子胚也不完全相同:
即使是合子胚本身,他们的早期胚胎发育过程也常偏离正常的方式。
(3)、合子胚和不定胚一般都能发育成正常的成熟胚。
与合子胚相似,球形期后的体细胞胚呈现一种固定的极性,根极指向愈伤组织或胚性细胞团的中央,茎芽极朝外,与合子比,成熟体细胞胚的进一步发育过程及形态特征也是相当正常的。
(4)、多数情况下,体细胞胚并不具有一个明显的胚柄。
(5)、与合子胚不同的是,在培养中形成的体细胞胚常常具有两个以上的子叶。
第五章细胞培养
一、简要说明分离单细胞的方法。
1由完整的植物器官分离单细胞
(1)机械法:
现在广泛用于分离叶肉细胞的方法是先把叶片轻轻研碎,然后再通过过滤和离心把细胞净化。
(2)酶解法:
利用果胶酶(pectase)处理植物叶片,使细胞间的中胶层发生降解,分离出具有代谢活性的细胞。
(酶解法分离细胞能得到较均匀一致的海绵组织细胞或栅栏组织细胞。
)
2由培养组织中分离单细胞
由愈伤组织获得游离细胞的具体做法是,把未分化的和易散碎的愈伤组织转移到装有液体培养基的三角瓶中,在25℃±1℃,弱光或黑暗中,将三角瓶置于摇床上不断振荡。
初期每10d左右用新鲜培养液更换掉三角瓶中大约4/5的旧液,同时将飘浮在原培养液上层的细胞碎片和长弯形衰败细胞淘汰。
几个周期之后,培养液由浊变清,开始出现胞质浓密的单细胞和小细胞团。
此后不断进行继代培养,直至建成良好的悬浮培养物。
震荡的作用:
①可对细胞团施加一种缓和的压力,使它们破碎成小细胞团和单细胞。
②振荡可以使细胞和小细胞团在培养基中保持均匀的分布。
③培养基的运动还会促进培养基和容器内空气之间的气体交换。
二、单细胞培养的基本方法有几种?
单细胞培养方法有平板培养法、看护培养法、微室培养法和条件培养基培养法。
三、什么是细胞悬浮培养?
简述分批培养和连续培养的特点。
1悬浮培养是指将游离的植物细胞按一定的细胞密度,悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
悬浮细胞培养的主要优点是:
能大量提供比较均匀一致的细胞,也就是同步分离的细胞;细胞增殖的速度比愈伤组织快;适宜大规模培养,成为细胞工程中独特的产业。
2分批培养是指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养,当培养物增殖到一定量时,转接继代,建立起单细胞培养物。
特点:
会呈现出细胞生长周期。
在整个生长周期中,细胞数目增加的变化过程大致呈“S”形。
延滞期:
细胞很少分裂,细胞数目不增加
对数增长期:
生长快,细胞分裂活跃,数目迅速增加
直线生长期:
单位时间内细胞数目增长大致恒定,细胞数目达到最高峰
缓慢期:
细胞增长逐渐变慢
静止期:
细胞增长趋于停止
3连续培养是利用特制的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。
特点:
在连续培养中由于不断注入新鲜培养基,排掉旧的培养基,保证养分的充足供应,不会出现悬浮培养物发生营养亏缺的现象,可使细胞长久地保持在对数生长期中,细胞增殖速度快。
连续培养有封闭型和开放型之分。
四、试述诱导细胞同步化的方法及原理。
同步化培养是大多数细胞同时通过细胞周期每一阶段(G1、S、G2和M,)的培养方法。
1、物理方法
物理方法主要是通过对细胞物理特性(细胞或小细胞团的大小)或生长环境条件(光照、温度等)的控制,实现高度同步化,其中包括按细胞团的大小进行选择(以最优质的潜在悬浮培养物中细胞团大小为标准选择细胞团,有可能获得同步化生长的细胞)的方法和低温休克法等。
2、化学方法
(1)饥饿法
在这种方法中,先对细胞断绝供应一种进行细胞分裂所必需的营养成分或激素,使细胞停滞在G1期或G2期,经过一段时间的饥饿之后,当重新在培养基中加入这种限制因子时,静止细胞就会同步进入分裂。
(2)抑制法
使用DNA合成抑制剂如5-氨基尿嘧啶、羟基脲和胸腺嘧啶脱氧核苷等,也可使培养细胞同步化。
当细胞受到这些化学药物的处理之后,细胞周期只能进行到G1期为止,细胞都滞留在G1期和S期的边界上。
当把这些抑制剂去掉之后,细胞即进入同步分裂。
应用这种方法取得的细胞同步性只限于一个细胞周期。
五、试述细胞培养的应用。
1突变体选择
2植物次生代谢产物的生产(细胞的工厂化生产、高产细胞系的建立、“种子”培养、细胞的大量培养)
3生产天然的植物成分
4生物转化
5细胞固定化
名词解释
继代培养:
把愈伤组织由外植体上剥离,转移到成分相同的新鲜培养基上,促使愈伤组织生长,这个过程称做继代培养。
单细胞培养:
是对分离得到的单个细胞进行培养,诱导其分裂增殖,形成细胞团,再通过细胞分化形成芽、根等器官或胚状体,直至长成完整植株的技术。
嵌合体:
由不同基因型的细胞所构成的生物体。
第6章单倍体的产生
一、简述单倍体在遗传研究和植物育种中的意义和单倍体获得的途径。
所谓单倍体,指的是具有配子染色体数的个体或细胞。
意义:
(1)单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。
在诱导频率较高时,单倍体能在植株上较充分地显现重组的配子类型,可提供新的遗传资源和选择材料。
显著缩短了育种年限。
途径;
(1)整体操作技术(雌核发育、胚珠雄核发育、通过远缘杂交消除一个亲本的基因组、半
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