板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证专项方案.docx
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板蓝根颗粒微生物限度检查检验方法验证专项方案
1.概述
1.1板蓝根颗粒是《中国药典》一部品种,同意文号:
国药准字Z4660,其处方由板蓝根组成,含有清热解毒,凉血利咽之功效,用于肺胃热盛所致咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀;急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证候者。
使用期:
18个月。
1.2依据剂型和产品处方判定,板蓝根颗粒微生物程度检验内容应包含需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数、大肠埃希菌检验;依据板蓝根颗粒成份和历史验证数据分析,该产品无显著抑菌活性,拟采取“平皿法”进行微生物程度检验,采取“常规法”进行控制菌检验。
2.目标
确定所采取方法适适用于该产品微生物计数,以确保测定方法可靠性,确保检验结果正确可靠。
若检验程序或产品发生改变可能影响检验结果时,计数方法应重新进行适用性试验。
3.依据
《中国药典》四部“非无菌产品微生物程度检验:
微生物计数法”、“非
无菌产品微生物程度检验:
控制菌检验法”、“非无菌产品微生物程度标准”。
4.范围
本验证方案适适用于企业板蓝根颗粒微生物程度检验检验方法适用性试验。
5.职责
5.1验证领导小组
5.1.1负责验证方案审批。
5.1.2负责验证协调工作,以确保本验证方案要求项目标顺利实施。
5.1.3负责验证数据及结果审核。
5.1.4负责验证汇报审批。
5.1.5负责发放验证证书。
5.2质量部
5.2.1负责验证所需培养基、样品、菌液、缓冲液等准备。
5.2.2负责取样及对样品检验。
5.3项目验证小组
5.3.1负责拟订验证方案。
5.3.2负责验证方案实施和搜集各项验证试验统计,并对试验结果进行分析后,起草验证汇报,报验证领导小组。
6.验证实施条件
6.1验证方案培训:
在验证实施前,应对参与验证人员进行验证方案和和验证相关文件进行培训,确保相关人员掌握了验证相关要求和知识。
6.2微生物程度检测室:
检验所使用检测室应经过HVAC系统确定,并符合要求。
6.3检验用水:
验证过程使用纯化水其制备系统应经过确定并符合要求,纯化水质量应经过检验并符合《中国药典》二部要求。
6.4检验仪器设备:
验证包含检验仪器(设备)和检验方法,应经过技术监督局校验合格或企业确定/验证合格。
6.5培养基:
验证所使用培养基应经过培养基适用性检验,其结果符合《中国药典》相关要求。
见附件2:
培养基确定。
6.6验证菌种:
验证所使用菌种,其种类和传代次数应符合《中国药典》相关要求。
菌种情况见附件3:
菌种确定。
7.合格标准
7.1在需氧菌、霉菌及酵母菌计数三次独立平行试验中,试验组菌落数减去供试品对照组菌落数值和菌液对照组菌落数比值应在0.5~2范围内。
7.2在控制菌检验试验中试验组应检出试验菌,阳性对照组应检出试验菌,阴性对照组不得检出试验菌。
8.验证方法
8.1菌液制备:
8.1.1取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌新鲜培养物各1ml,分别加0.9%无菌氯化钠溶液9ml,10倍递增稀释至10-5-10-7。
取黑曲霉新鲜培养物加入3-5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨脂800.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱。
然后,采取适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%(ml/ml)聚山梨脂800.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度黑曲霉孢子悬液。
8.1.2取1ml上述制备铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液分别注入平皿中,立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌数。
8.1.3、取1ml上述制备白色念珠菌、黑曲霉菌液注入平皿中,立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌数。
8.1.4结果:
见附件4:
菌液浓度确定。
8.2需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验
8.2.1、供试液制备:
称取供试品10g,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100ml,制成1:
10供试液。
8.2.2、试验组:
吸收1:
10供试液9.9ml,共5份,每份中加入0.1ml试验菌悬液后摇匀。
8.2.3、菌液对照品:
吸收稀释液胰酪大豆胨液体培养基9.9ml,共5份,每份中加入和试验组相同菌悬液后摇匀。
8.2.4、试验组和菌液对照组摇匀后,分别从全部试验菌试管中吸收1ml注入直径90mm平皿中,倾注胰酪大豆胨固体培养基;另分别吸收白色念珠菌1ml注入直径90mm平皿中,倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基;平行2份。
8.2.5、供试品对照组:
吸收1:
10供试液1ml注入直径90mm平皿中,平行四份,其中两个平皿中注入胰酪大豆胨琼脂培养基,另两个注入沙氏葡萄糖琼脂培养基,摇匀。
8.2.6、将以上平皿分别置30~35℃或20~25℃培养,需氧菌培养不超出3天,真菌培养不超出5天,在3天和5天分别进行计数。
8.2.7、计算公式:
8.2.8、试验结果:
8.2.8.1见附件5:
需氧菌总数计数方法适用性检验结果
8.2.8.2附件6:
霉菌和酵母菌总数计数方法适用性检验结果
8.3控制菌检验(大肠埃希菌)
8.3.1供试液制备:
同“需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验”供试液制备。
8.3.2试验组:
取1:
10供试液10ml和≤100cfu大肠埃希菌菌液加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中,混匀,30~35℃培养18~24h;取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中,42~44℃培养24~48h;取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~72h。
8.3.3阳性对照:
取≤100cfu大肠埃希菌菌液加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中,其它同试验组。
8.3.4阴性对照:
取100ml胰酪大豆胨液体培养基,30~35℃培养18~24h;其它同试验组。
8.3.5结果:
见附件6:
大肠埃希菌方法适用性检验结果
9.异常情况和偏差处理:
当出现偏差时,应按《偏差处理管理规程》进行处理。
10.验证结果评定、结论和提议
验证小组组长负责搜集各项验证、试验统计,依据验证、试验结果对验证效果进行综合评审,起草验证汇报、做出验证结论。
对验证结果评审应包含一下内容:
10.1验证试验是否有遗漏?
10.2验证实施过程中对验证方案有没有修改?
修改原因、依据和是否经过同意?
10.3验证统计是否完整?
10.4验证试验结果是否符合标准要求?
偏差及对偏差说明是否合理?
是否需要深入补充试验?
11.附件
11.1附件1:
验证实施条件确定
11.2附件2:
培养基确定
11.3附件3:
菌种确定
11.4附件4:
菌液浓度确定
11.5附件5:
需氧菌总数计数方法适用性检验结果
11.6附件6:
霉菌和酵母菌总数计数方法适用性检验结果
11.7附件7:
大肠埃希菌方法适用性检验结果
11.8附件8:
验证结果审批表
11.9附件9:
人员培训统计
附件1:
设施设备验证确定
设施设备名称
验证汇报编号
验证结果
试验室HVAC系统
纯化水系统
LDZX-40A型立式自控电热压力蒸汽灭菌器
PSH-500A型生化培养箱
303AS-2型电热恒温隔水式培养箱
SW-CJ-1C型双人净化工作台
确定结论:
确定人:
确定日期:
附件2:
培养基确定
培养基名称
起源
批号
适用性检验结果
胰酪大豆胨琼脂培养基
胰酪大豆胨液体培养基
沙氏葡萄糖琼脂培养基
胰酪大豆胨琼脂对照培养基
/
胰酪大豆胨液体对照培养基
/
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
/
麦康凯液体培养基
麦康凯琼脂培养基
麦康凯液体对照培养基
/
麦康凯琼脂对照培养基
/
确定结论:
确定人:
确定日期:
附件3:
菌种确定
培养基名称
起源
批号
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]
白色念珠菌[CMCC(F)98001]
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]
黑曲霉[CMCC(B)98003]
确定结论:
确定人:
确定日期:
附件4:
菌液浓度确定
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
Ι
П
Ш
Ι
П
Ш
Ι
П
Ш
Ι
П
Ш
Ι
П
Ш
铜绿假单胞菌
皿1
皿2
金黄色葡萄球菌
皿1
皿2
大肠埃希菌
皿1
皿2
枯草芽孢杆菌
皿1
皿2
白色念珠菌
皿1
皿2
白色念珠菌(沙氏)
皿1
皿2
黑曲霉
皿1
皿2
黑曲霉(沙氏)
皿1
皿2
结论:
依据要求,菌数要控制在每1ml中含菌数在≤100cfu,所以,我们确定菌液制备:
铜绿假单胞菌:
稀释金黄色葡萄球菌:
稀释大肠埃希菌:
稀释
枯草芽孢杆菌:
稀释白色念珠菌(胰酪):
稀释白色念珠菌(沙氏):
稀释
黑曲霉(胰酪):
稀释黑曲霉(沙氏):
稀释
检验人
检验时间
年月日-年月日
复核人
复核时间
年月日
附件5:
需氧菌总数计数方法适用性检验结果
样品批号:
菌种
菌液对照组
试验组
稀释度:
1:
10
比值
(0.5-2)
3天
5天
3天
5天
3天
5天
金黄色葡萄球菌
/
/
/
铜绿假单胞菌
/
/
/
枯草芽孢杆菌
/
/
/
白色念珠菌
黑曲霉
供试品对照组:
胰酪大豆胨琼脂培养基:
()CFU/平皿1,()CFU/平皿2
阴性对照组:
胰酪大豆胨琼脂培养基:
()CFU/平皿1,()CFU/平皿2
检验人
检验时间
年月日-年月日
复核人
复核时间
年月日
附件6:
霉菌和酵母菌总数计数方法适用性检验结果
样品批号:
菌种
菌液对照组
试验组
比值
(0.5-2)
3天
5天
3天
5天
3天
5天
白色念珠菌
黑曲霉
供试品对照组:
沙氏葡萄糖琼脂培养基:
()CFU/平皿1,()CFU/平皿2
阴性对照组:
沙氏葡萄糖琼脂培养基:
()CFU/平皿1,()CFU/平皿2
检验人
检验时间
年月日-年月日
复核人
复核时间
年月日
附件7:
大肠埃希菌方法适用性检验结果
样品批号:
皿号
麦康凯液体培养基
麦康凯琼脂培养基
检验结果
试验组
1
2
阳性对照组
1
2
阴性对照组
1
2
检验人
检验时间
年月日-年月日
复核人
复核时间
年月日
附件8:
验证结果审批表
验证对象
验证开始日期
验证结束日期
评审意见(在方框中打√)
1、验证试验有否遗漏□遗漏□未遗漏
2、验证实施过程中对验证方案有没有修改□有修改□无修改
3、方案修改原因□经过同意□未经同意
4、验证统计是否完整□完整□不完整
5、是否出现偏差□出现偏差□未出现偏差
6、对偏差说明是否合理□合理□不合理
7、是否需要作深入试验□是□否
验证项目小组组长
年月日
验证领导小组组长
年月日
附件9:
人员培训统计
培训主题
板蓝根颗粒微生物程度检验方法适用性试验验证方案
主讲人/主持人
培训部门
质量管理部
培训日期
培训方式
理论培训
培训地点
质检中心办公室
培训内容:
非无菌产品微生物程度检验用培养基适用性检验验证文件
序号
部门/工序
姓名
职务
个人培训情况
备注
01
02
03
04
05
06
07
08
09
10
- 配套讲稿:
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- 板蓝根 颗粒 微生物 限度 检查 检验 方法 验证 专项 方案