分子生物学实验经常使用缓冲液的配制方式.docx
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分子生物学实验经常使用缓冲液的配制方式
各类缓冲液的配制方式
Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液
PH
LNa2HPO4(ml)
L柠檬酸钠(ml)
PH
LNa2HPO4(ml)
L柠檬酸钠(ml)
Na2HPO4。
2H2O,分子量=L溶液含L
柠檬酸.H2O,分子量=L溶液含L
柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(L)
PH
L柠檬酸
(ml)
L柠檬酸
钠(ml)
PH
L柠檬酸
(ml)
L柠檬酸钠(ml)
柠檬酸.H2O,分子量=L溶液含L
柠檬酸钠.2H2O,分子量=;L溶液含g/L
醋酸缓冲液(L,18℃)
PH
LNaAC(ml)
LHAC(ml)
PH
LNaAC(ml)
LHAC(ml)
H2O,分子量=L溶液含L
(1)醋酸盐溶液的配制:
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60~80ml,至溶液从蓝色转变成纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠18g,加冰醋酸,再加水稀释至1000ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值至,再加水稀释至100ml,即得。
醋酸-醋酸钠缓冲液
取醋酸钠,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。
用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)](在此,C(HAc)指醋酸的浓度,C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=*10-5(乘10的-5次方),PKa=-lgKa=,将PH=代入,可得C(NaAc)/C(HAc)=通常咱们配制时会使C(HAc)=L,或是C(HAc)=L等。
若是配制C(HAc)=L,则C(NaAc)=L称量醋酸钠固体质量为82*=46克量取冰醋酸体积为*1000/=。
将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。
固然若想配制其它的浓度,也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不能配的太稀,不然缓冲能力要下降,太浓的话又浪费试剂。
苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH(ml)
L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(ml)
L苯二甲酸氢钾溶液:
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾溶于水中,稀释至500ml。
磷酸缓冲液(L)
PH
LNa2HPO4(ml)
LNaH2PO4(ml)
PH
LNa2HPO4(ml)
LNaH2PO4(ml)
5.8
Na2HPO4.2H2O,分子量=,L溶液含L
NaH2PO4.2H2O,分子量=,L溶液含L
NaH2PO4.H2O,分子量=,L溶液含L
Na2HPO4.12H2O,,分子量=,L溶液含L
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方式
PBS
PBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK2HPO4,pH
PBS缓冲液(~):
NaCl137mmol/L,KClL,Na2HPO4L,KH2PO4L
称7.9gNaCl,0.2gKCl,0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)和1.8gK2HPO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调剂溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1L。
保留于4℃冰箱中即可。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调剂渗透压的。
母液的配制:
0.2MNa2HPO4:
称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于1000ml水
0.2MNaH2PO4:
称取31.2gNaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水
各类浓度PB(pH=的配制:
先配0.2MPB(pH=,100ml):
取19mlL的NaH2PO4,81mlL的Na2HPO4,即可。
然后只需将0.2MPB(pH=按相应比例适当稀释即可,如:
0.1MPB(PH=):
取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
0.01MPB(PH=):
取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
0.02MPB(PH=):
取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。
若需要NaCl的话,加入NaCl至%(g/100ml)即可。
另:
其它各类另PH值的0.2MPB(100ml)配方:
pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)
928
9010
8515
5149
4555
3862
3367
2872
2377
1981
1684
1387
793
0.01M磷酸盐缓冲液(PBS)配制方式
称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调剂溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1L即可。
在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保留存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na离子或K离子的浓度,Na离子和K离子只是用来调剂渗透压的。
若是是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候别离加入100u/ml青霉素和链霉素以后再调PH、定容、灭菌消毒。
PH
H2O1000100010001000
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4
依照体会来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在之间,可是在温度的阻碍下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在通过日夜的时刻后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。
因此做实验的同窗可要注意了,PH值可能会阻碍实验结果,乃至可能致使阴性。
因此务必记得那个时候和天气,要增强实验条件操纵问题。
每次利用前最好用试纸测一下留宿了的PBS,若是发生偏酸或偏碱,注意从头换新液。
PBS缓冲液
称取NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4?
12H2O3.63g,KH2PO40.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至,加水定容至1L,常温保留备用。
PBST缓冲液
取300μlTween-20加入PBS100ml中,混匀后即刻利用。
现用现配。
若是是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在左右,明显偏酸。
不能用盐酸调。
尽管能够用氢氧化钠颗粒调,可是有更方便的方式。
十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。
不需要其它任何处置。
那个能够先取少量试一试,配好以后再测一次~
的PBS配方详细
1.NaCl137mmol/L,KClL,Na2HPO4L,KH2PO4L
2.向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3.滴加浓盐酸将pH值调剂至,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4.高温高压灭菌后,室温保留。
注意:
上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。
LPBS(磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBS)的配制:
甲液:
LNa2HPO4溶液:
称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸馏水至1000ml;
乙液:
LKH2P04溶液:
称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸馏水至1000m1。
将甲乙液分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保留,历时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH甲液ml乙液mI
你要配制pH=的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可。
硼酸缓冲液(L硼酸盐)
PH
L硼砂(ml)
L硼酸(ml)
PH
L硼砂(ml)
L硼酸
(ml)
硼砂,分子量=,L溶液=L硼砂含L
硼酸,分子量=,L溶液含L
硼砂易失去结晶水,必需在带塞得瓶中保留;硼砂溶液也能够用半中和的硼酸溶液代替
盐酸-氯化钾缓冲液
PH
LHCl(ml)
LKCl(ml)
加水至(ml)
PH
LHCl(ml)
LKCl(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
LKCl溶液:
溶氯化钾于水中,稀释至500ml
苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液
PH
LHCl(ml)
L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(mi)
PH
LHCl(ml)
L苯二甲酸氢钾(ml)
加水至(mi)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
L苯二甲酸氢钾溶液:
称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾溶于水中,稀释至500ml
磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH(ml)
L磷酸二氢钾(ml)
加水至(ml)
PH
LNaOH(ml)
L磷酸二氢钾(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
25.00
100
100
L磷酸二氢钾溶液:
溶磷酸二氢钾于水中,稀释至500ml
硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液
PH
LNaOH(ml)
L硼酸-氯化钾(ml)
加水至(ml)
PH
LNaOH(ml)
L硼酸-氯化钾(ml)
加水至(ml)
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
L硼酸-氯化钾溶液:
溶硼酸和氯化钾于水中稀释至500ml
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