食品中残留农药检验方法多重残留分析方法.docx

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食品中残留农药检验方法多重残留分析方法

食品中殘留農藥檢驗方法－多重殘留分析方法（四）

97年9月3日署授食字第0971800329號公告訂定

98年7月29日署授食字第0981800278號公告修正

99年4月6日署授食字第0991900925號公告修正

100年12月19日署授食字第1001904777號公告修正

101年7月17日署授食字第1011902441號公告修正

1.適用範圍：

本檢驗方法適用於蔬果類、穀類、乾豆類、茶類、香辛植物及其他草本植物等食品中251項農藥多重殘留分析。

2.檢驗方法：

檢體經萃取後，以液相層析串聯質譜儀（liquidchromatograph/tandemmassspectrometer,LC/MS/MS）及氣相層析串聯質譜儀（gaschromatograph/tandemmassspectrometer,GC/MS/MS）分析之方法。

2.1.裝置：

2.1.1.液相層析串聯質譜儀：

2.1.1.1.離子源：

電灑離子化（electrosprayionization,ESI）。

2.1.1.2.層析管：

AtlantisT3®，3m，內徑2.1mm10cm，或同級品。

2.1.2.氣相層析串聯質譜儀：

2.1.2.1.離子源：

電子撞擊游離（electronimpactionization,EI）。

2.1.2.2.層析管：

VF-5MS毛細管，內膜厚度0.25m，內徑0.25mm×30m，或同級品。

2.1.3.攪拌均質器（Blender）。

2.1.4.粉碎機（Grinder）

2.1.5.振盪器（Shaker）。

2.1.6.減壓濃縮裝置（Rotaryevaporator）。

2.1.7.氮氣濃縮裝置（Nitrogenevaporator）。

2.2.試藥：

丙酮採用殘留量級；乙酸乙酯、乙腈、甲醇及正己烷均採用液相層析級；醋酸銨及氯化鈉均採用試藥特級；去離子水（比電阻於25℃可達18M‧cm以上）；農藥對照用標準品3-酮加保扶（3-ketocarbofuran）等251項（品項見表一、表二及表三）。

2.3.器具及材料：

2.3.1.廣口瓶：

500mL，PE材質。

2.3.2.抽氣瓶：

500mL。

2.3.3.布赫納漏斗（Buchnerfunnel）：

直徑11cm。

2.3.4.液／液萃取匣（Liquid/liquidextractioncartridge）：

多孔性矽藻土，VarianChemElutcartridge，檢液負荷量20mL，附流速控制閥，或同級品。

2.3.5.濃縮瓶：

300mL。

2.3.6.濾膜：

孔徑0.22m，Nylon材質。

2.3.7.容量瓶：

25mL，褐色。

2.4.試劑之調製：

2.4.1.正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液：

　　取正己烷與丙酮以1:

1（v/v）比例混勻。

2.4.2.20%氯化鈉溶液：

　　稱取氯化鈉20g，以去離子水溶解使成100mL。

2.5.移動相溶液之調製：

2.5.1.移動相溶液A

　　  取甲醇50mL與去離子水450mL混合後，加入醋酸銨0.19g，溶解並混合均勻，以濾膜過濾，取濾液作為移動相溶液A。

2.5.2.移動相溶液B

　　  取甲醇450mL與去離子水50mL混合後，加入醋酸銨0.19g，溶解並混合均勻，以濾膜過濾，取濾液作為移動相溶液B。

2.6.標準溶液之配製：

2.6.1.取農藥對照用標準品各約25mg，精確稱定，以甲醇、乙腈、丙酮或正己烷溶解並定容至25mL，作為標準原液，於-18C避光貯存。

取適量標準原液混合後，以乙腈稀釋至10g/mL，作為混合標準原液。

臨用時，取混合標準原液以甲醇稀釋至1g/mL，供作LC/MS/MS分析用標準溶液。

2.6.2.取農藥對照用標準品各約25mg，精確稱定，以丙酮或正己烷溶解並定容至25mL，作為標準原液，於-18C避光貯存備用。

取適量標準原液混合後，以正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液稀釋至10g/mL，作為混合標準原液。

臨用時，取混合標準原液以正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液稀釋至1g/mL，供作GC/MS/MS分析用標準溶液。

2.7.檢液之調製：

2.7.1.蔬果類、香辛植物及其他草本植物（鮮食）（註）：

　　  取均質後之檢體約18g，精確稱定，置於廣口瓶中，加入丙酮70mL，振搖萃取3分鐘，倒入附有濾紙之布赫納漏斗內，抽氣過濾入抽氣瓶，殘渣再以丙酮30mL重複萃取1次，過濾後合併濾液，於35℃以下水浴減壓濃縮至無丙酮。

將20%氯化鈉溶液2mL加入濃縮液中，混合均勻，注入液／液萃取匣，靜置20分鐘。

以乙酸乙酯80mL分次溶洗濃縮瓶，洗液注入液／液萃取匣進行沖提，流速控制為每分鐘約3～5mL，收集沖提液，於35℃以下水浴減壓濃縮至乾，殘留物以正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液溶解並定容至5mL（V），供作檢液原液（Ι）。

取檢液原液（Ι）1mL，以氮氣吹至剛乾，以甲醇溶解並定容至1mL，供作檢液原液（ІІ），經濾膜過濾後，取200L與甲醇800L，混合均勻，以LC/MS/MS分析。

另取檢液原液（Ι）500L與正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液500L，混合均勻，經濾膜過濾後，以GC/MS/MS分析。

註：

水分含量＜80%之蔬果檢體，可酌量添加適當水分2～5mL以利萃取。

2.7.2.穀類及乾豆類：

　　  取磨粉後之檢體約9g，精確稱定，置於廣口瓶中，加去離子水18mL，靜置20分鐘，加入丙酮70mL，振搖萃取3分鐘，倒入附有濾紙之布赫納漏斗內，抽氣過濾入抽氣瓶，殘渣再以丙酮30mL重複萃取1次，過濾後合併濾液，於35℃以下水浴減壓濃縮至無丙酮。

將20%氯化鈉溶液2mL加入濃縮液中，混合均勻，注入液／液萃取匣，靜置20分鐘。

以乙酸乙酯80mL分次溶洗濃縮瓶，洗液注入液／液萃取匣進行沖提，流速控制為每分鐘約3～5mL，收集沖提液，於35℃以下水浴減壓濃縮至乾，殘留物以正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液溶解並定容至5mL（V），供作檢液原液（Ι）。

取檢液原液（Ι）1mL，以氮氣吹至剛乾，以甲醇溶解並定容至1mL，供作檢液原液（ІІ），經濾膜過濾後，取200L與甲醇800L，混合均勻，以LC/MS/MS分析。

另取檢液原液（Ι）500L與正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液500L，混合均勻，經濾膜過濾後，以GC/MS/MS分析。

2.7.3.茶類、香辛植物及其他草本植物（乾燥）：

　　   取磨粉後之檢體約2g，精確稱定，置於廣口瓶中，加去離子水18mL，靜置20分鐘，加入丙酮70mL，振搖萃取3分鐘，倒入附有濾紙之布赫納漏斗內，抽氣過濾入抽氣瓶，殘渣再以丙酮30mL重複萃取1次，過濾後合併濾液，於35℃以下水浴減壓濃縮至無丙酮。

將20%氯化鈉溶液2mL加入濃縮液中，混合均勻，注入液／液萃取匣，靜置20分鐘。

以乙酸乙酯80mL分次溶洗濃縮瓶，洗液注入液／液萃取匣進行沖提，流速控制為每分鐘約3～5mL，收集沖提液，於35℃以下水浴減壓濃縮至乾，殘留物以正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液溶解並定容至5mL（V），供作檢液原液（Ι）。

取檢液原液（Ι）1mL，以氮氣吹至剛乾，以甲醇溶解並定容至1mL，供作檢液原液（ІІ），經濾膜過濾後，取200L與甲醇800L，混合均勻，以LC/MS/MS分析。

另取檢液原液（Ι）500L與正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液500L，混合均勻，經濾膜過濾後，以GC/MS/MS分析。

2.8.鑑別試驗：

2.8.1.LC/MS/MS：

　　   精確量取檢液及標準溶液各10L，分別注入液相層析串聯質譜儀中，依下列條件進行分析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間及多重反應偵測相對離子強度（註1）鑑別之。

　　液相層析串聯質譜分析測定條件（註2）：

　　　　移動相溶液：

A液與B液以下列條件進行梯度分析。

時間（min）

A（%）

B（%）

0.010.0

1000

0100

10.020.0

00

100100

20.020.1

0100

1000

20.125.0

100100

00

　　　　移動相流速：

0.25mL/min。

　　　　毛細管電壓（Capillaryvoltage）：

　　　　　　電灑離子化正離子（ESI＋）採用3.2kV，

　　　　　　電灑離子化負離子（ESI－）採用0.6kV。

　　　　離子源溫度（Ionsourcetemperature）：

100℃。

　　　　溶媒揮散溫度（Desolvationtemperature）：

350℃。

　　　　進樣錐氣體流速（Conegasflow）：

50L/hr。

　　　　溶媒揮散流速（Desolvationflow）：

700L/hr。

　　　　　　　偵測模式：

多重反應偵測（multiplereactionmonitoring,MRM）。

偵測離子、進樣錐電壓（conevoltage）與碰撞能量（collisionenergy）如表一及表二。

2.8.2.GC/MS/MS：

　　  精確量取檢液及標準溶液各1L，分別注入氣相層析串聯質譜儀中，依下列條件進行分析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間及多重反應偵測相對離子強度（註1）鑑別之。

　　氣相層析串聯質譜分析測定條件（註2）：

　　　　層析管溫度：

初溫：

100℃，2min；

溫度上升速率：

8℃/min；

終溫：

300℃，5min。

　　　　移動相流速：

氦氣，1mL/min。

　　　　注入器溫度（Injectortemperature）：

250C。

　　　　注入模式（Injectmode）：

不分流（splitless）。

　　　　離子化模式：

電子撞擊游離（EI），70eV。

　　　　離子源溫度：

250C。

　　　　偵測模式：

多重反應偵測，偵測離子對及碰撞能量如表三。

　　註：

1.相對離子強度由定性離子與定量離子之波峰面積相除而得（100%）。

容許範圍如下：

相對離子強度（%）

容許範圍（%）

＞50

±20

＞2050

±25

＞1020

±30

≦10

±50

　　　　2.上述測定條件分析不適時，依所使用之儀器，設定適合之測定條件。

2.9.含量測定：

2.9.1.LC/MS/MS：

2.9.1.1.基質匹配檢量線法（Matrix-matchedcalibrationcurve）

　　   取空白檢體，依2.7.節調製空白檢液原液（ІІ），分別量取200L（a），分別加入1g/mL標準溶液5～500L，再加入甲醇使成1000L（b），混合均勻，依2.8.1.節條件進行分析。

就定量離子波峰面積與對應之濃度，製作成0.005～0.5g/mL（芬普尼為0.001～0.5g/mL）之基質匹配檢量線，並依下列計算式求得檢體中各農藥之含量（ppm）：

　　　　檢體中各農藥之含量（ppm）=

　　C：

由各農藥之基質匹配檢量線求得檢液中各農藥之濃度（g/mL）

　　V：

檢體定容之體積（mL）

　　M：

取樣分析檢體之重量（g）

　　F：

稀釋倍數，由b/a求得

2.9.1.2.標準品添加法（Standardaddition）：

　　   量取檢液原液（ІІ）200L（a），分別加入1g/mL標準溶液0～400L，再加入甲醇使體積為1000L（b），混合均勻，使添加農藥濃度為0～0.4g/mL，依2.8.1.節條件進行分析。

以定量離子波峰面積與添加濃度製作線性迴歸曲線y＝mx+n（如圖一），並依下列計算式求得檢體中各農藥之含量（ppm）：

圖一　標準品添加法線性迴歸曲線

　　　　檢體中各農藥之含量（ppm）=

　　C：

檢液中各農藥之濃度，由n/m求得（g/mL）

　　V：

檢體定容之體積（mL）

　　M：

取樣分析檢體之重量（g）

　　F：

稀釋倍數，由b/a求得

2.9.2.GC/MS/MS：

2.9.2.1.基質匹配檢量線法（Matrix-matchedcalibrationcurve）

　　   取空白檢體，依2.7.節調製空白檢液原液（Ι），分別量取500L（a），分別加入1g/mL標準溶液5～500L，再加入正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液使成1000L（b），混合均勻，依2.8.2.節條件進行分析。

就定量離子波峰面積與對應之濃度，製作成0.005～0.5g/mL之基質匹配檢量線，並依下列計算式求得檢體中各農藥之含量（ppm）：

　　　　檢體中各農藥之含量（ppm）＝

　　C：

由各農藥之基質匹配檢量線求得檢液中各農藥之濃度（g/mL）

　　V：

檢體定容之體積（mL）

　　M：

取樣分析檢體之重量（g）

　　F：

稀釋倍數，由b/a求得

2.9.2.2.標準品添加法（Standardaddition）：

　　    量取檢液原液（Ι）500L（a），分別加入1g/mL標準溶液0～400L，再加入正己烷：

丙酮（1:

1,v/v）溶液使體積為1000L（b），混合均勻，使添加農藥濃度為0～0.4g/mL，依2.8.2.節條件進行分析。

以定量離子波峰面積與添加濃度製作線性迴歸曲線y＝mx+n（如圖一），並依下列計算式求得檢體中各農藥之含量（ppm）：

　　　　檢體中各農藥之含量（ppm）＝

　　C：

檢液中各農藥之濃度，由n/m求得（g/mL）

　　V：

檢體定容之體積（mL）

　　M：

取樣分析檢體之重量（g）

　　F：

稀釋倍數，由b/a求得

附註：

1.本檢驗方法除茶類、香辛植物及其他草本植物（乾燥）外，其檢出限量如表一、表二及表三；茶類、香辛植物及其他草本植物（乾燥）之檢出限量則為表列數值之5倍。

2.食品中有影響檢驗結果之物質時，應自行探討。

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表一

3-酮加保扶等164項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（正離子模式）（續）

表二

二‧四地等6項農藥之液相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（負離子模式）

表三

α-蟲必死等81項農藥之氣相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量

表三

α-蟲必死等81項農藥之氣相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（續）

表三

α-蟲必死等81項農藥之氣相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（續）

表三

α-蟲必死等81項農藥之氣相層析串聯質譜儀多重反應偵測模式參數及檢出限量（續）