微生物限度检验操作规程版.docx
- 文档编号:3750330
- 上传时间:2022-11-25
- 格式:DOCX
- 页数:14
- 大小:26.61KB
微生物限度检验操作规程版.docx
《微生物限度检验操作规程版.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《微生物限度检验操作规程版.docx(14页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
微生物限度检验操作规程版
11 目得
规范微生物限度检验操作,确保检验结果准确、可靠.
12 依据
《中国药典》2015版。
13 范围
本标准适用于微生物限度检验。
14 责任
中心化验室负责人:
对本规程得实施负责.
中心化验室检验人员:
严格按照本规程执行检验操作。
15 程序
15.1 执行标准:
《中国药典》2015版。
15.2 抽样:
照《取样标准操作规程》进行。
6 内容
6、1需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数计数
计数方法包括平皿法、薄膜过滤法与最可能数法(MPN法)。
检查时,按已验证得计数方法进行供试品得需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数得测定。
6、1、1 设备、仪器及用具
6、1、1、1设备
微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱(30~350C)、生化培养箱(20~250C)、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。
6、1、1、2仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等.
6、1、1、3用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等.
6、1、2试液
6、1、2、1 消毒液
A.0、1% 新洁尔灭溶液
B.75%乙醇溶液
6、1、2、2 稀释液、试剂及配制
A。
pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液:
取磷酸二氢钾3、56g、无水磷酸氢二钠5、77g、氯化钠4、3g、蛋白胨1、0g,加纯化水1000ml,微温溶解,滤清,分装,1210C灭菌15分钟。
B。
聚山梨酯80
C.无菌十四烷酸异丙酯
D。
pH6、8无菌磷酸盐缓冲液
6、1、3培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基
6、1、4 操作方法
6、1、4、1 试验前准备
6、1、4、1、1 将供试品及所有已灭菌得平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头(1ml、10ml)、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。
每次试验所用物品必须事先计划,准备足够用量,避免操作中出入操作间。
6、1、4、1、2开启微生物检测室紫外灯与空调净化系统,并使其工作不低于30min。
6、1、4、1、3操作人员进入一更,用洗手液或肥皂洗手,烘干。
进入二更,用0、1%新洁尔灭溶液洗手,穿戴洁净无菌服、口罩、手套。
6、1、4、1、4操作前先用乙醇棉球擦手,再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等得开口处周围,待干后用灭菌得手术镊或剪将供试品启封。
6、1、4、2 供试液得制备
根据供试品得理化特征与生物学特性,采取适宜得方法制备供试液。
供试液制备若需加温时,应均匀加热,且温度不应超过45℃.供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1小时.
常用得供试液制备方法如下.如果下列供试液制备方法经确认均不适用,应建立其她适宜得方法。
6、1、4、2、1 水溶性供试试品
取供试品,用pH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:
10供试液。
若需要,调节供试液pH值至6~8。
必要时,用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
水溶性液体制剂也可用混合得供试品原液作为供试液。
6、1、4、2、2水不溶性非油脂类供试品
取供试品,用pH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:
10供试液。
分散力较差得供试品,可在稀释液中加入表面活性剂如0、1﹪得聚山梨酯80,使供试品分散均匀。
若需要,调节供试液pH值至6~8。
必要时,用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。
6、1、4、2、3 油脂类供试品
取供试品,加入无菌十四烷酸异丙酯使溶解,或与最少量并能使供试品乳化得无菌聚山梨酯80或其她无抑菌性得无菌表面活性剂充分混匀。
表面活性剂得温度一般不超过40℃(特殊情况下,最多不超过45℃),小心混合,若需要可在水浴中进行,然后加入预热得稀释液使成1:
10供试液,保温,混合,并在最短时间内形成乳状液。
6、1、4、2、4肠溶及结肠溶制剂供试品
取供试品10g,加入pH6、8无菌磷酸盐缓冲液,置45℃水浴中,振摇,使溶解,制成1:
10得供试液。
6、1、4、3 供试液得稀释
取1:
10均匀供试液1ml,加入装有9mlpH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液得试管中混匀,即为1:
100供试液。
以此类推,根据供试品污染程度,可稀释至1:
1000、1:
10000等适宜稀释级.每递增1稀释剂,必须另换一支吸管。
6、1、4、4检查法
6、1、4、4、1检验量
检验量即一次试验所用得供试品量(g、ml、cm2)。
一般应随机抽取不少于2个最小包装得供试品,混合,取规定量供试品进行检验。
除另有规定外,一般供试品得检验量为10g或10ml;膜剂为100cm2;贵重药品、微量包装药品得检验量可以酌减。
检验时,应从2个以上最小包装单位中抽取供试品。
6、1、4、4、2 平皿法
6、1、4、4、2、1 取规定量供试品,按方法适用性试验确认得方法进行供试液得制备与菌数测定,每稀释级每种培养至少制备2个平板。
6、1、4、4、2、2 阴性对照以稀释液代替供试液进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长.如果阴性对照有菌生长,应进行偏差调查。
6、1、4、4、2、3倾注培养基
将预先配制好得培养基(需氧菌总数计数用胰酪大豆胨琼脂培养基,霉菌与酵母菌总数计数用沙氏葡萄糖琼脂培养基)熔化,置45。
C水浴中,备用。
将45.C左右得琼脂倾注上述各个平皿约15ml,以顺时针或反时针方向快速转动平皿(勿使培养基溢出)使供试液与培养基混匀,放置,待凝。
6、1、4、4、2、4培养与计数
需氧菌总数计数平板倒置于30~35℃培养箱中培养3~5天。
霉菌与酵母菌总数计数平板倒置于20~25℃培养箱中培养5~天,必要时可延长至7天.观察菌落生长情况,点计平板上生长得所有菌落数,计数并报告。
菌落蔓延生长成片得平板不宜计数。
点计菌落数后,计算各稀释级供试液得平均菌落数,按菌数报告规则报告菌数。
若同稀释级两个平板得菌落平均数不小于15,则两个平板得菌落数不能相差1倍或以上。
6、1、4、4、2、5菌数报告规则
需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu得稀释级、霉菌与酵母菌总数测定宜选取平均菌数小于100cfu得稀释级,作为菌数报告得依据.以最高得平均菌落数,计算1g、1ml或10cm2供试品中所含得微生物,取两位有效数字报告。
如各稀释级得平板均无菌落生长,或仅最低稀释级得平板有菌落生长,但平均菌落数小于1时,以〈1乘以最低稀释倍数得值报告菌数。
6、1、4、4、3薄膜过滤法
6、1、4、4、3、1 薄膜过滤法所采用滤膜孔径应不大于0、45µm,直径约为50mm,若采用其她直径得滤膜,冲洗量应进行相应得调整。
选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物得充分被截留.滤器及滤膜使用前应采用适宜得方法灭菌。
使用时,应保证滤膜在过滤前后得完整性。
水溶性供试液过滤前先将少量得冲洗液过滤以润湿滤膜。
油类供试品,其滤膜与过滤器在使用前应充分干燥。
为发挥滤膜得最大过滤效率,应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。
供试液经薄膜过滤后,若需要冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100ml。
总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上得微生物受损伤。
6、1、4、4、3、2 取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品得供试液,加至适量得稀释剂中,混匀,过滤。
若供试品所含得菌数较多时,可取适宜稀释级得供试液1ml,过滤。
用pH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其她适宜得冲洗液冲洗滤膜。
冲洗后取出滤膜,菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基与沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。
每种培养基至少制备一张滤膜.滤膜贴于平板上就是不得有空隙或气泡,否则影响微生物得生长。
6、1、4、4、3、3 阴性对照取试验用得稀释液1ml照上述薄膜过滤法操作,作为阴性对照。
阴性对照不得有菌生长。
6、1、4、4、3、4培养与计数 培养条件与计数方法同平皿法,每片滤膜上得菌落数应不超过100cfu。
6、1、4、4、3、5菌数报告规则以相当于1g或1ml供试品得菌落数报告菌数;若滤膜上无菌落生长,以<1报告菌数(每张滤膜过滤1g或1ml供试品),或<1乘以最低稀释倍数得值报告菌数.
6、1、4、4、4 MPN法
MPN法得精密度与准确度不及薄膜过滤法与平皿法,仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法得情况下使用,本法不适用霉菌计数。
取供试液至少3个连续稀级,每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9~10ml胰酪大豆胨液体培养基中。
必要时可在培养基中加入表面活性剂、中与剂或灭活剂。
接种管置30~35℃培养3天,逐日观察各管微生物生长情况.如果由于供试品得原因使得结果难以判断,可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基,在相同条件下培养1~2天,观察就是否有微生物生长.根据微生物生长得管数从表1查被测供试品每1g或1ml中需氧菌总数得最可能数.
表1 微生物最可能数检索表
生长管数
需氧菌总数最可能数
95﹪置信限
每管含样品得g或ml数
MPN/g或ml
下限
上限
0、1
0、01
0、001
0
0
0
〈3
0
9、4
0
0
1
3
0、1
9、5
0
1
0
3
0、1
10
0
1
1
6、1
1、2
17
0
2
0
6、2
1、2
17
0
3
0
9、4
3、5
35
1
0
0
3、6
0、2
17
1
0
1
7、2
1、2
17
1
0
2
11
4
35
1
1
0
7、4
1、3
20
1
1
1
11
4
35
1
2
0
11
4
35
1
2
1
15
5
38
1
3
0
16
5
38
2
0
0
9、2
1、5
35
2
0
1
14
4
35
2
0
2
20
5
38
2
1
0
15
4
38
2
1
1
20
5
38
2
1
2
27
9
94
2
2
0
21
5
40
2
2
1
28
9
94
2
2
2
35
9
94
2
3
0
29
9
94
2
3
1
36
9
94
3
0
0
23
5
94
3
0
1
38
9
104
3
0
2
64
16
181
3
1
0
43
9
181
3
1
1
75
17
199
3
1
2
120
30
360
3
1
3
160
30
380
3
2
0
93
18
360
3
2
1
150
30
380
3
2
2
210
30
400
3
2
3
290
90
990
3
3
0
240
40
990
3
3
1
460
90
1980
3
3
2
1100
200
4000
3
3
3
〉1100
6、1、4、4、5 结果判断
需氧菌总数就是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长得总菌落数(包括真菌菌落数);霉菌与酵母菌总数就是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长得总菌落数(包括细菌菌落数)。
若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长得细菌使霉菌与酵母菌得计数结果不符合微生物限度要求,可使用含抗生素(如氯霉素、庆大霉素)得沙氏葡萄糖琼脂培养基或其她选择性培养基(如玫瑰红钠琼脂培养基)进行霉菌与酵母菌总数测定。
使用选择性培养基时,应进行培养基适用性检查.若采用MPN法,测定结果为需氧菌总数。
若供试品得需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数得检查结果均符合该品种项上得规定,判供试品符合规定;若基中任何一项不符合该品种项下得规定,判供试品不符合规定.
控制菌检查
控制菌检查法系用于在规定得试验条件下,检查供试品中就是否存在物定得物生物。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等就是否符合相应得微生物限度标准时,应按下列规定进行检验、包括样品取样量与结果判断等。
供试品检出控制菌或其她致病菌时,按一次检出结果为准,不再复试.
供试液制备及实验环境要求同需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数计数。
如果供试品具有抗菌活性,应尽可能去除或中种。
供试品检查时,若使用了中与剂或灭活剂,应确认有效性及对微生对无毒性。
供试液制备如果使用了表面活性剂,应确认其对微生物无毒性以及与所使用中与剂或灭活剂得相容性.
阳性对照试验方法同供试品得控制菌检查,对照菌得加量应不大于100cfu。
阳性对照试验应检出相应得控制菌。
阴性对照试验:
以稀释剂代替供试液照相应控制菌检查法检查,阴性对照试验应无菌生长,如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查。
6、2大肠埃希菌
6、2、1 设备、仪器及用具
6、2、1、1设备
微生物限度检测室、阳性菌检测室、生物安全柜、净化工作台、生化培养箱(30~350C、42~440C)、电热恒温水浴锅、烘箱、灭菌柜、紫外灯等。
6、2、1、2仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、薄膜过滤器等。
6、2、1、3 用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6、2、2试液指示液
PH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、PH6、8无菌磷酸盐缓冲溶液、革兰染色液、碘液、95%乙醇。
6、2、3培养基
胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等.
6、2、4 操作方法
6、2、4、1供试液制备与增菌培养 取供试品,照“6、1、4、2”制成1:
10供试液.取相当于1g或1ml供试液,接种至适宜体积(经方法适用性试验确定)得胰酪大豆胨液体培养基中,混匀,在30~35℃培养18~24小时。
6、2、4、2 选择与分离培养取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中,42~44℃培养24~48小时.取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~72小时。
6、2、4、3结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜得鉴定试验,确证就是否为大肠埃希菌;若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,判供试品未检出大肠埃希菌。
6、2、4、4若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜得鉴定试验。
以接种针轻轻接触单个疑似菌落得表面中心,沾取培养物,应挑选2~3个以上疑似菌落,分别接种营养琼脂斜面,培养18~24小时,作以下检查。
6、2、4、4、1革兰染色、镜检 以接种环沾取无菌水于洁净载玻片上,取上述疑似菌落得营养琼脂斜面新鲜培养物少许,制成均匀涂片,自然或微温干燥,再通过火焰2~3次(载玻片不烫手)固定。
滴加结晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以滤纸吸干余水。
滴加95%乙醇,脱色20~30s,水洗。
滴加沙黄染液,复染1min,待干后,镜检。
6、2、4、4、2 染色结果革兰阳性菌呈蓝紫色;革兰阴性菌呈红色,大肠埃希菌为革兰阴性短杆菌,或球杆菌状,亦有杆菌状.
6、2、4、4、3注意事项
6、2、4、4、3、1 玻片必须洁净,涂片菌量宜少,菌不可浓.否则,菌细胞成堆或连成片。
染色反应难于判断,菌细胞形态难于观察。
6、2、4、4、3、2培养物得菌龄以16—24h为宜.培养时间过长得革兰阳性菌易染成红色。
6、2、4、4、3、3脱色就是关键,脱色时间不足,菌细胞易染成阳性,脱色时间过长易染成阴性.
6、3 耐胆盐革兰阴性菌
6、3、1设备、仪器及用具
6、3、1、1设备
微生物限度检测室、阳性菌检测室、生物安全柜、净化工作台、生化培养箱(30—350C)、电热恒温水浴锅、烘箱、灭菌柜、紫外灯等。
6、3、1、2 仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、薄膜过滤器等。
6、3、1、3用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6、3、2试液、指示液
PH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、PH6、8无菌磷酸盐缓冲溶液等。
6、3、3 培养基
胰酪大豆胨液体培养基、肠道菌增菌液体培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基等6、3、4 操作方法
6、3、4、1 供试液制备与预培养取供试品,用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂照“6、1、4、2”制成1:
10供试液,混匀,在20~25℃培养,培养时间应使供试品中得细菌充分恢复但不增殖(约2小时).
6、3、4、2定性试验 除另有规定外,取相当于1g或1ml供试品得上述预培养物接种至适宜体积(经方法适用性试验确定)肠道菌增菌液体培养基中,30℃~35℃培养24~48小时后,划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上,30℃~35℃培养18~24小时。
如果平板上无菌落生长,判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
6、3、4、3定量试验
6、3、4、3、1选择与分离培养取相当于0、1g、0、01g与0、001g(或0、1ml、0、01ml、0、001ml)供试品得预培养物或其稀释液分别接种至适宜体积(经方法适用性试验确定)肠道菌增菌液体培养基中,30℃~35℃培养24~48小时.与述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养平板上,30℃~35℃培养18~24小时。
6、3、4、3、2 结果判断若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长,则对应培养管为阳性,否则为阴性。
根据各培养管检查结果,从表2查1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌得可能菌数。
表2 耐胆盐革兰阴性菌得可能菌数(N)
各供试品量得检出结果
每1g(或1ml)供试品中可能得菌数cfu
0、1g或0、1ml
0、01g或0、01ml
0、001g或0、001ml
+
+
+
-
+
+
-
-
+
—
-
-
N>103
102〈N〈103
10<N<102
N<10
注:
(1)+代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长;-代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上无菌落生长。
(2)若供试品量减少10倍(0、01g或0、01ml,0、001g或0、001ml,0、0001g或0、0001ml),则每1g(或1ml)供试品中可能得菌数(N)应相应增加10倍。
6、4沙门菌
6、4、1设备、仪器及用具
6、4、1、1设备
微生物限度检测室、阳性菌检测室、生物安全柜、净化工作台、生化培养箱(30—350C)、电热恒温水浴锅、烘箱、灭菌柜、紫外灯等。
6、4、1、2仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、薄膜过滤器等。
6、4、1、3用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6、4、2试液、指示液
PH7、0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、PH6、8无菌磷酸盐缓冲溶液等。
6、4、3培养基
胰酪大豆胨液体培养基、RV沙门菌增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧酸盐琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基等。
6、4、4 操作方法
6、4、4、1 供试液制备与增菌培养 取10g或10ml供试品直接或处理后接种至适宜体积(经方法适用性试验确定)得胰酪大豆胨液体培养基中,混匀,30~35℃培养18~24小时.
6、4、4、2 选择与分离培养取上述培养物0、1ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基中,30~35℃培养24~48小时.取少量RV沙门增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~48小时。
沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上生长良好,菌落为淡红色或无色、透明或半透明、中心有或无黑色.用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面与高层穿刺接种,培养18~48小时,或采用基她适宜方法进一步鉴定.
6、4、4、3 结果判断若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上有疑似菌落生长,且三糖铁琼脂培养基得斜面为红色、底层为黄色,或斜面黄色、底层黄色或黑色,应进一步进行适宜得鉴定试验,确证就是否为沙门菌。
如果平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,或三糖铁琼脂培养基得斜面未见红色、底层未见黄色;或斜面黄色、底层未见黄色或黑色,判供试品未检出沙门菌。
6、5铜绿假单胞菌
6、5、1 设备、仪器及用具
6、5、1、1 设备
微生物限度检测室、阳性菌检测室、生物安全柜、净化工作台、生化培养箱(30-350C)、电热恒温水浴锅、烘箱、灭菌柜、紫外灯等。
6、5、1、2 仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、薄膜过滤器等.
6、5、1、3用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6、5、2试液、指示液
PH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、PH6、8无菌磷酸盐缓冲溶液等。
6、5、3 培养基
胰酪大豆胨液体培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基等。
6、5、4操作方法
6、5、4、1 供试液制备与增菌培养 取供试品,照“6、1、4、2”制成1:
10供试液。
取相当于1g或1ml供试液,接种至适宜体积(经方法适用性试验确定)得胰酪大豆胨液体培养基中,混匀,在30~35℃培养18~24小时。
6、5、4、2选择与分离培养 取上述培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上,30~35℃培养18~72小时。
取上述平板上生长得菌落进行氧化酶试验,或采用其她适宜方法进一步鉴定。
6、5、4、3氧化酶试验 取洁净滤纸片置于平皿内,用无菌玻棒取上述平板上生长得菌落涂于滤纸片上,滴加新配制得 1%二盐酸N,N二—甲基对苯二胺试液,在30秒内若培养物呈粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳性,否则为阴性。
6、5、4、4结果判断若溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上有菌落生长,且氧化酶试验阳性,应进一步进行适宜得鉴定试验,确证就是否为铜绿假单胞菌.如果平板上没有菌落生长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,或氧化酶试验阴性,判供试品未检出铜绿假单胞菌。
6、6金黄色葡萄球菌
6、6、1 设备、仪器及用具
6、6、1、1设备
微生物限度检测室、阳性菌检测室、生物安全柜、净化工作台、生化培养箱(30-350C)、电热恒温水浴锅、烘箱、灭菌柜、紫外灯等。
6、6、1、2 仪器及器皿
显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、吸管、注射器、注射针头、载玻片、盖玻片、薄膜过滤器等。
6、6、1、3 用具
大、小橡皮乳头,洁净工作服、口罩
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 微生物 限度 检验 操作规程