安捷伦1200培训.docx
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安捷伦1200培训
Agilent1200LC培训
一、培训目的:
●基本了解1200LC硬件操作。
●掌握化学工作站的开机,关机,参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
基本操作步骤:
(一)、开机:
1、打开计算机,进入Windows2000(或WindowsXP)画面。
2、打开1200LC各模块电源。
3、待各模块自检完成后,双击“Instrument1Online”图标,化学工作站自动与1200LC通讯,进入的工作站画面如下所示。
4、从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,点击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”,“Showstatustoolbar”,“Systemdiagram”,”Sampling
diagram”,使其命令前有“√”标志,来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开“Purge”阀。
7、点击“Pump”图标,点击“Setuppump”选项,进入泵编辑画面。
8、设Flow:
3-5ml/min,点击“OK”。
9、点击“Pump”图标,点击“Pumpcontrol”选项,选中“On”,点击“OK”,则系
统开始Purge,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续Purge,直到所有要用通道无气泡为止。
10、点击“Pump”图标,点击“PumpControl”选项,选中“Off”,点击“Ok”关泵,关闭Purgevalve。
11、点击“Pump”图标,点击“Setuppump”选项,设Flow:
1.0ml/min。
12、点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以四元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积。
点击“Ok”。
(二)数据采集方法编辑:
1、开始编辑完整方法:
analysis”外的三项,点击“Ok”,进入下一画面。
2、方法信息:
●在“MethodComments”中写入方法的信息(如:
Thisisfortest!
)。
●点击“Ok”进入下一画面。
3、泵参数设定:
(以四元泵为例)
●在“Flow”处输入流量,如1.0ml/min,在“SolventB”处输入
70,(A=100-B-C-D),也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。
在“PressureLimits
Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
4、自动进样器参数设定:
(以标准型G1329A为例)
●选择合适的进样方式,如图所示,进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。
“StandardInjection”----只能输入进样体积,此方式无洗针功能。
“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。
“Useinjectorprogram”---可以点击“Edit”键进行进样程序编辑。
●点击“Ok”进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:
G1316B:
在”Temperature”下面的空白方框内输入所需温度或与检测池一致,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致或与检测池一致。
●点击“ok”进入下一画面。
6、DAD检测器参数设定:
G1315B:
检测波长:
254nm,BW=4nm,参比波长=360nm,BW=100nm;
●检测波长:
选择设置需要的检测波长,一般选择最大吸收处的波长。
样品带宽BW:
一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。
参比波长:
一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。
参比带宽BW:
至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。
Peakwidth(Responsetime):
其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。
Slit-狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。
同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。
选中所用的灯。
Store选项选择“All”。
7、点击“Method”菜单,选中“SaveMethodas”,输入方法名。
点击“Ok”。
8、从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,然后点击“Change”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“Ok”.(如同时检测二个信号,则重复8)。
9、从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项,如下图所示,输入操作者名称,如zzz;在“Datafile”中选择“Manual”或
区别:
Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
Prefix-在Prefix框中输入前缀,在Counter框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd0001,vwd0002……。
10、点击“ok”,从“Instrument”菜单选择“Systemon”,或依次点击图标开启各模块。
11、等仪器Ready,基线平稳,从“RunControl”菜单中选择“Runmethod”,进样。
(DAD,VWD色谱图如下所示:
)
12、自动收集器设置:
点击收集器——SetupFractionCollector进入如下界面:
先选中“UseTimetable”进入可编辑状态——点击“FractionPreview”进入下图所示界面:
点击“LoadSignal”:
调出用制备方法跑的数据,调整TimeTable里面的收集时间,点击“Refresh”即可看到可视化的接收情况,直至设置完所有需要接收的peak;点击“OK”,然后保存方法即可。
(三)、数据分析方法编辑:
1、桌面点击““Instrument1Offline””进入数据分析画面。
2、从“File”菜单选择“Loadsignal”,选中您的数据文件名,如下图所示。
点击“Ok“,则数据被调出。
3、做谱图优化:
从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项,如下图所示。
从“Ranges”中选择“Full”或“Autoscale”及合适的显示时间或选择”UseRanges”调整。
反复进行,直到图的比例合适为止。
点击“ok”。
4、积分:
●从“Integration”菜单中选择“IntegrationEvents”选项,如下图所示。
选
择合适的“Slopesensitivity”,“Peakwidth”,“Areareject”,“Heightreject”。
●从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项,则数据被积分。
●点击左边“√”图标,将积分参数存入方法。
5、打印报告:
●从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项,进入如下图所示画面。
●点击“QuantitativeResults”框中“Calculate”右侧的黑三角,选中
“Percent”(面积百分比),其它选项不变。
点击“Ok”。
想输出到打印机上,则点击“Report”底部的“Print”钮。
(四)、关机:
●关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统。
●退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机(用shutdown关)。
●关闭Agilent1200各模块电源开关。
(五)、Agilent1200LC维护保养:
●色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(乙睛/甲醇适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相)。
*●手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口。
●流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。
*●带seal-wash的1200,要配制90%水+10%异丙醇,开启seal-wash清洗泵,溶剂不能干涸。
维护知识问答
1为什么溶剂和样品要过滤?
溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。
色谱柱:
由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器:
溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
2为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项?
HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。
缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制:
90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力,不能干涸。
3为什么Agilent1200LC的流动相管路非常细?
在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。
因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。
为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,Agilent1200LC使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。
毛细管线分类:
0.17mm内径------绿色;0.12mm内径-------红色。
PEEK管线:
内径-----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛细管线优点:
柔韧性好.
***Agilent公司同时备有1/16in的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户,优点是刚性好,但柔韧性差一些。
4流动相使用前为什么要脱气?
流动相使用前必须进行脱气处理,以除去其中溶解的气体(如O2),以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时,因压力降低而产生气泡。
气泡会增加基线的噪音,造成灵敏度下降,甚至无法分析。
溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化,柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。
若用FLD,可能会造成荧光猝灭。
常用的脱气方法比较:
氦气脱气法:
利用液体中氦气的溶解度比空气低,连续吹氦脱气,效果较好,但成本高。
加热回流法:
效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染。
抽真空脱气法:
易抽走有机相。
超声脱气法:
流动相放在超声波容器中,用超声波振荡10-
15min,此法效果最差。
在线真空脱气法:
Agilent1200LC真空脱机利用膜渗透技术,在线脱气,智能控制,无需额外操作,成本低,脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于多元溶剂体系。
5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞,以及堵塞后的处理?
溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行,尤其水溶液或磷酸盐缓冲液(PH=4-7)。
以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。
A:
请严格执行溶剂过滤。
B:
请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液
C:
如果应用许可,可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠.
D:
在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气,以隔绝空气。
E:
避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下,尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。
6Agilent1200LC泵如何维护?
Agilent1200LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相,及时合理的维护非常重要。
A:
流动相使用前请必须脱气、过滤。
B:
使用缓冲盐时,要加在线Seal-wash选项。
C:
关机前,用相应的溶剂充分冲洗系统。
D:
及时更换PurgeValve内的过滤芯。
(当打开PurgeValve时,压力高于10bar,表明过滤芯已堵)。
E:
使用合适的密封圈。
7如何选择合适的泵头活塞密封圈?
泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用,但使用正相溶剂(如正己烷),不适合使用标准活塞密封圈,特别是长时间使用时,需更换另一种不同的密封圈,我
们建议使用聚四氟乙烯密封圈。
(p/n0905-14202/pk)
***注意:
聚四氟乙烯密封圈的压力范围为:
0-200bar;建议在泵的压力限制中,将最大压力设为200bar。
8使用梯度比例发时要注意那些事项?
当盐溶液与有机溶剂溶液混合时,盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶,而不会出现沉淀。
但是在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,阀A接水相/盐溶液,D接有机溶剂,此法连接可有效使盐回落到盐溶液中,并被溶解。
若颠倒过来,盐可能落在有机溶剂中,出现问题。
强烈建议:
当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时,推荐将缓冲盐通道接在A通道上,有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上;定期用水冲洗所有的通道,以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
9更换色谱柱时要注意什么事项?
在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响,由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。
因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器)中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。
为使柱外效应减之最小,获得理想的分析结果,仪器的流动相管路连接非常重要,一般Agilent1200LC在第一次安装时,均有受过专业培训的安装工程师负责安装,各种接头会处理的非常完美。
客户只需在更换色谱柱时注意接头处理就可以了,一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头,柱子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧街头,当完成第一次安张后,不锈钢卡套已固定死,当接不同的柱子时,要注意柱子接头处的形状和长度,否则会产生一个非常大的死体积。
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