MALDITOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲.docx
- 文档编号:3655756
- 上传时间:2022-11-24
- 格式:DOCX
- 页数:7
- 大小:183.85KB
MALDITOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲.docx
《MALDITOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《MALDITOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲.docx(7页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
MALDITOFMS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱培训预习提纲
【MALDI-TOFMS】(基质辅助激光解吸
电离飞行时间质谱)培训预习提纲
一仪器概况
仪器名称:
基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪
MatrixAssistedLaserDesorptionIonization-TimeofFlightMassSpectrometer
MALDI-TOF
公 司:
美国应用生物系统
AppliedBiosystem
型 号:
VoyagerDE-STR
特 点:
DE DelayedExtraction延迟引出
PSD:
PostSourceDecay源后裂解
技术指标:
MassAccuracy
∙LinearMode,ExternalCalibration:
≤±0.05%forangiotensin[1,296.6853]andmyoglobin[16,952.5].
∙ReflectorMode,ExternalCalibration:
≤±0.008%forACTH18-39[m/z2,565.1989].
≤±0.005%forE.colithioredoxin[m/z1,1674.4]±0.005%forACTH18-39
MassResolution:
∙ReflectorResolution:
≥20,000forinsulin(m/z5,734).
≥12,000forACTHclips.
∙LinearResolution:
≥3,000angiotensin.
≥3,500forACTH18-39[m/z2,465.1989].
≥1,000formyoglobin(m/z16,952).
≥100forBSA(m/z66,431).
Sensitivity:
∙Routinedetectionof5fmolofneurotensinwithasignaltonoiseration(S/N)>80:
1.
Post-SourceDecayMassAccuracy:
∙≤0.2withdefaultcalibration.
应 用:
MALDI-TOF仪器作为一种可以确定大分子精确分子量的工具,可以对纳米材料、生物材料,高分子聚合物等的分子量及聚合度进行测定及碎片结构定性,有机合成反应的质量评价,蛋白质、多肽、核酸、寡糖等生物分子的分子质量测定,蛋白质、多肽酶解产物肽图谱测定,蛋白质、多肽的氨基酸顺序分析。
二原 理
1.质谱仪分类
2一般质谱仪结构
a.离子源IonSource
电子电离源(ElectronIonization,EI)
化学电离源(ChemicalIonization,CI)
快原子轰击源(FastAtomBombardment,FAB)
电喷雾源(ElectronSprayIonization,ESI)
大气压化学电离源(AtmosphericPressureChemicalIonization,APCI)
激光解析源(LaserDesorption,LD)
b.质量分析器MassAnalyzer
双聚焦分析器(DoubleFocusingAnalyzer)
四极杆分析器(QuadrupleAnalyzer)
飞行时间质量分析器(TimeOfFlightAnalyzer)
离子阱质量分析器(IonTrapAnalyzer)
傅利叶变换离子回旋共振分析器(FourierTransformIonCyclotronResonanceAnalyzer)
c.检测器Detector
d.真空系统VacuumSystem
3MALDI-TOF原理
a.MALDI——MatrixAssistedLaserDesorptionIonization基质辅助激光解析电离
基质对分析物起着溶剂的作用,并且把分析物分子彼此分离开,从而减少了分子间的很强的相互作用力,使分析物簇群形成的可能性减至最小;当激光脉冲照射时,由于基质浓度远高于分析物浓度,确保激光能量大部分被基质吸收而最小限度地照射分析物。
基质分子吸收的能量转变成固体混合物内基质的电子激发能,瞬间使其由固态转变成气态,形成基质离子。
在中性分析物和激发出的基质离子、质子及金属阳离子之间的碰撞过程中,发生了分析物的离子化,便产生了质子化分子或阳离子化分子。
这过程并不导致高分子发生链断裂,通常只生成分子离子及分子离子的多聚体。
离子化后的分子被电场加速进入飞行时间质量分析器而被检测。
b.TOF——TimeOfFlight飞行时间
假设被分析物离子化后带电荷为ze,加速电压V和飞行距离L一定,被电场加速后的分子离子具有相同的动能:
即质荷比与飞行时间t的平方成正比。
只要测得飞行时间,即可换算成质荷比。
在检测时,质荷比小的离子先到达检测器。
注意:
这里是质荷比,而非分子量,与分子离子所带的电荷数有关。
4Maldi-TOF的特点
(1)软电离,不会把分子打碎
(2)检测范围宽(>400KDalton)
(3)可以检测混合物
(4)耐盐
(5)灵敏度高(可达fmol级)
Etc.
突出特点:
DE-DelayedExtraction延迟引出
PSD-PostSourceDecay源后裂解
ABI公司的VoyagerDE-STRMALDI-TOFMS提高仪器分辨率采取了两个行之有效的方法:
Reflector增大了离子飞行路程且不增加飞行管长度,提高了分辨率
DelayedExtraction延迟引出技术
5VoyagerDESTRMS仪器构造
a. 真空系统VacuumSystem
b. 激光源Laser
N2,337nm,LaserIntensity可调
c. 高压HighVoltage
高压范围:
20-25KV
涉及到的参数:
DelayTime,grid%
d. 飞行管FlightTube
无场区,离子匀速飞行
e. 检测器Detector
共有两个检测器:
Reflector/Linear(对应两种模式)
检测器类型:
MCP(MicrochannelPlate微通道片/alsoMultichannelPlate多通道片)
6实验成功的关键因素
a.基质Matrix
基质的作用:
一是从激光脉冲中吸收能量;二是使被测分子分离成单分子状态。
第一个作用要求基质对激光光源有很强的吸收,因此目前文献报道的基质化合物均为含苯环的有机化合物;第二个作用要求基质和被测高分子具有很好的相容性,同时不能有分子间的相互作用。
b.离子化试剂IonizationAgent
合成高分子化合物一般难以通过加质子使其离子化,往往需要添加碱金属盐类或银、铜等过渡金属盐类形成离子络合物,达到离子化的目的。
对于极性高分子化合物(含有杂原子,如PMMA)来说,碱金属盐类是比较有效的离子化试剂。
(NaTFA)
没有杂原子的非极性合成高分子(如PS),加入银或铜盐后可以成功的离子化。
(AgTFA)
含胺官能团的化合物(如蛋白质、多肽),可有基质帮助(提供氢离子)直接质子化,不需外加金属离子。
c.溶剂Solvent
溶剂对分子量和分子量分布均有一定的影响。
理想的情况是基质、样品和盐都使用同一种溶剂,以免结晶时分层。
选择溶剂的先后:
水、水+乙腈+TFA、THF或甲醇、其他
d.样品制备技术
如合适的浓度、配比、点样方法等。
7综述文献
a.MassSpectrometryofPolymersandPolymerSurfaces,S.D.Hanton,Chem.Rev.2001,101,527-569
b.MALDI-TOFMS分析研究合成高分子的综述,何美玉,何江涛,质谱学报,2002,23
(1),43-55
c.Characterizationof(co)polymersbyMALDI-TOF-MS/doorBastiaanBramPieterStaal.:
TechnischeUniversiteitEindhoven,2005.
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- MALDITOFMS 基质 辅助 激光 解吸 电离 飞行 时间 培训 预习 提纲
![提示](https://static.bdocx.com/images/bang_tan.gif)