检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx
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检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论.docx
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检验医学SOP文件4免疫室作业指导书概论
免疫室作业指导书
文件编号:
ABCD-3-MY-01~52
第A版
编制:
审核:
批准:
生效日期:
2015年4月8日
ABCD人民医院检验科
序号
主题内容
代号
页号
1
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测
ABCD-3-MY-01
6
2
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测
ABCD-3-MY-02
9
3
血清乙型肝炎病毒e抗原检测
ABCD-3-MY-03
12
4
血清乙型肝炎病毒e抗体检测
ABCD-3-MY-04
15
5
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测
ABCD-3-MY-05
18
6
甲型肝炎病毒--IgM检测
ABCD-3-MY-06
21
7
血清丙型肝炎病毒抗体检测
ABCD-3-MY-07
24
8
血清麻疹IgM抗体试验
ABCD-3-MY-08
28
9
人类免疫缺陷病毒抗体检测
ABCD-3-MY-09
31
10
梅毒甲苯胺红不加热血清试验
ABCD-3-MY-10
34
11
梅毒螺旋体特异性抗体检测
ABCD-3-MY-11
36
12
免疫球蛋白A(IgA)测定
ABCD-3-MY-12
39
13
免疫球蛋白M(IgM)测定
ABCD-3-MY-13
42
14
免疫球蛋白G(IgG)测定
ABCD-3-MY-14
45
15
补体C3测定(免疫比浊法)
ABCD-3-MY-15
48
16
补体C4测定(免疫比浊法)
ABCD-3-MY-16
51
17
类风湿因子(RF)测定
ABCD-3-MY-17
54
18
抗链球菌溶血素O(ASO)测定
ABCD-3-MY-18
56
19
C反应蛋白(CRP)测定
ABCD-3-MY-19
58
20
C反应蛋白(CRP)定量测定
ABCD-3-MY-20
60
21
支原体肺炎血清学试验
ABCD-3-MY-21
63
22
D二聚体检测(胶乳凝集法)
ABCD-3-MY-22
65
23
甲胎蛋白(AFP)定量测定
ABCD-3-MY-23
68
24
癌胚抗原(CEA)定量测定
ABCD-3-MY-24
72
25
糖链抗原125(CA125)定量测定
ABCD-3-MY-25
76
26
CA153定量测定
ABCD-3-MY-26
80
27
糖链抗原199(CA199)定量测定
ABCD-3-MY-27
84
28
F-PSA定量测定
ABCD-3-MY-28
88
29
T-PSA定量测定
ABCD-3-MY-29
92
30
B12定量测定
ABCD-3-MY-30
96
31
铁蛋白定量测定
ABCD-3-MY-31
100
32
叶酸(Folate)定量测定
ABCD-3-MY-32
104
33
人绒毛膜促性腺激素定量测定
ABCD-3-MY-33
108
34
血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定
ABCD-3-MY-34
112
35
肌红蛋白定量测定
ABCD-3-MY-35
116
36
肌钙蛋白-I定量测定
ABCD-3-MY-36
120
37
CK-MB定量测定
ABCD-3-MY-37
124
38
HBsAg半定量测定
ABCD-3-MY-38
128
39
HBsAb定量测定
ABCD-3-MY-39
131
40
HBeAg半定量测定
ABCD-3-MY-40
135
41
HBeAb半定量测定
ABCD-3-MY-41
138
42
HBcAb半定量测定
ABCD-3-MY-42
141
43
HBcAb-IgM半定量测定
ABCD-3-MY-43
144
44
CMV-IGM半定量测定
ABCD-3-MY-44
147
45
RUBELLA-IGM半定量测定
ABCD-3-MY-45
150
46
微量加样器的质控
ABCD-3-MY-46
154
47
酶标分析仪操作维护规程
ABCD-3-MY-47
157
48
全自动酶标洗板机操作维护规程
ABCD-3-MY-48
159
49
特种蛋白测定仪操作维护规程
ABCD-3-MY-49
160
50
AxSYM免疫分析仪操作维护规程
ABCD-3-MY-50
165
51
免疫学室内质量控制操作程序
ABCD-3-MY-51
169
52
免疫学检验室间质量评价(EQA)
ABCD-3-MY-52
174
修订页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测(ELISA)
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体,配以酶标记抗体(HBsAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗(HBsAg)。
2.标本采集
2.1采集前病人准备:
受检者应空腹
2.2标本种类:
血清或血浆
2.3标本要求:
采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。
3.标本储存:
2-8℃保存不应超过1周,-20℃不应超过3个月,-70℃长期保存,应避免反复冻融。
4.标本运输:
密封,室温运输。
5.标本拒收标准:
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称:
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家:
英科新创(厦门)科技有限公司。
6.3包装规格:
96Test/Kit
6.4试剂盒组成:
HBsAg微孔板,HBsAg酶标记抗体,HBsAg阳性对照血清,HBsAg阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期:
2-8℃避光保存,有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称:
自动酶标仪
7.2仪器厂家:
Rayto
7.3仪器型号:
RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡:
将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25℃),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。
8.2配液:
浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
8.3编号:
将微孔条固定于支架,按序编号。
8.4加样:
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶:
分别在每孔中加入酶标记抗体50l,轻拍混匀。
8.6温育:
置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。
8.7洗涤:
用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
8.8显色:
每孔加入底物A、B各50l,轻拍混匀,置37℃暗处15分钟。
8.9终止:
每孔加终止液50l,混匀。
8.10测定:
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。
9.结果判断与分析
9.1临界值(C.O.)的计算:
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1,阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定:
样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性
10.质量控制
每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测,以S/CO值绘制质控图,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。
11.参考范围:
阴性
12.临床意义:
在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
13.操作性能:
灵敏度为ng/ml,特异性高。
14.方法局限性
14.1.对于病毒复制较强的病人,病毒量较大,出现HOOK现象,造成假阴性,须将病人血清进行稀释后再重新试验。
14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。
14.3.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1.每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。
15.2.洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3.加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。
如果滴加,滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4.所有样品都应按传染源处理。
15.5.封口膜使用说明
15.5.1.微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。
15.5.2.微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6.不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果。
16.当检测系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:
应保证所有操作步骤正确无误;可以比对阴阳对照,肉眼判读;无法准确判读者,应留样待系统正常后复查。
17.参考文献:
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程(第二版)410-412页。
18.其它:
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测(ELISA)
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原,配以酶标记抗原(HBsAg-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝表面抗体(HBsAb)。
2.标本采集
2.1采集前病人准备:
受检者应空腹
2.2标本种类:
血清或血浆
2.3标本要求:
采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。
3.标本储存:
2-8℃保存不应超过1周,-20℃不应超过3个月,-70℃长期保存,应避免反复冻融。
4.标本运输:
密封,室温运输。
5.标本拒收标准:
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称:
乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家:
英科新创(厦门)科技有限公司。
6.3包装规格:
96Test/Kit
6.4试剂盒组成:
HBsAb微孔板,HBsAb酶标记抗原,HBsAb阳性对照血清,HBsAb阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期:
2-8℃避光保存,有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称:
自动酶标仪
7.2仪器厂家:
Rayto
7.3仪器型号:
RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡:
将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25℃),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。
8.2配液:
浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
8.3编号:
将微孔条固定于支架,按序编号。
8.4加样:
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶:
分别在每孔中加入酶标记抗体50l,轻拍混匀。
8.6温育:
置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。
8.7洗涤:
用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
8.8显色:
每孔加入底物A、B各50l,轻拍混匀,置37℃暗处15分钟。
8.9终止:
每孔加终止液50l,混匀。
8.10测定:
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。
9.结果判断与分析
9.1临界值(C.O.)的计算:
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1,阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定:
样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性
样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性
10.质量控制
每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。
11.参考范围
阴性或阳性
12.临床意义
HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。
13.操作性能:
灵敏度高,特异性好。
14.方法局限性:
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。
如果滴加,滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果。
16.当检测系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:
应保证所有操作步骤正确无误;可以比对阴阳对照,肉眼判读;无法准确判读者,应留样待系统正常后复查。
17.参考文献:
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程(第二版)412页。
18.其它:
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗原检测(ELISA)
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体(HBeAb),配以酶标记抗原(HBeAb-HRP)及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清(或血浆)中乙肝e抗原(HBeAg)。
2.标本采集
2.1采集前病人准备:
受检者应空腹
2.2标本种类:
血清或血浆
2.3标本要求:
采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。
3.标本储存:
2-8℃保存不应超过1周,-20℃不应超过3个月,-70℃长期保存,应避免反复冻融。
4.标本运输:
密封,室温运输。
5.标本拒收标准:
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称:
乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家:
英科新创(厦门)科技有限公司。
6.3包装规格:
96Test/Kit
6.4试剂盒组成:
HBeAg微孔板,HBeAg酶标记抗原,HBeAg阳性对照血清,HBeAg阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期:
2-8℃避光保存,有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称:
自动酶标仪
7.2仪器厂家:
Rayto
7.3仪器型号:
RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡:
将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25℃),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。
8.2配液:
浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
8.3编号:
将微孔条固定于支架,按序编号。
8.4加样:
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶:
分别在每孔中加入酶标记抗体50l,轻拍混匀。
8.6温育:
置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。
8.7洗涤:
用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
8.8显色:
每孔加入底物A、B各50l,轻拍混匀,置37℃暗处15分钟。
8.9终止:
每孔加终止液50l,混匀。
8.10测定:
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记
录结果)。
9.结果判断与分析
9.1临界值(C.O.)的计算:
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1,阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定:
样品OD值S/C.O>=1者为HBeAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBeAg阴性
10.质量控制:
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。
11.参考范围:
阴性或阳性
12.临床意义:
HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志;持续阳性则揭示转为慢性。
13.操作性能:
灵敏度高,特异性好。
14.方法局限性:
样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。
如果滴加,滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存
以避免受潮。
在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果。
16.当检测系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:
应保证所有操作步骤正确无误;可以比对阴阳对照,肉眼判读;无法准确判读者,应留样待系统正常后复查。
17.参考文献:
中华人民共和国卫生部医政司编。
全国临床检验操作规程(第二版)412-413页。
18.其它:
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗体检测(ELISA)
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体(HBeAb),配以酶标记抗原(HBeAb-HRP)、中和抗原(HBeAg)及TMB等其它试剂,采用竞争法原理检测人血清(或血浆)中乙肝e抗体(HBeAb)。
2.标本采集
2.1采集前病人准备:
受检者应空腹。
2.2标本种类:
血清或血浆。
2.3标本要求:
采集病人静脉血3ml(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。
3.标本储存:
2-8℃保存不应超过24小时,-20℃不应超过3个月,
-70℃长期保存,应避免反复冻融。
4.标本运输:
密封,室温运输。
5.标本拒收标准:
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称:
乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家:
英科新创(厦门)科技有限公司。
6.3包装规格:
96Test/Kit
6.4试剂盒组成:
HBeAb微孔板,HBeAb酶标记抗原,中和抗原,HBeAb阳性对照血清,HBeAb阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期:
2-8℃避光保存,有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称:
自动酶标仪
7.2仪器厂家:
Rayto
7.3仪器型号:
RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡:
将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25℃),微孔板开封后,余者及时以自封袋封存。
8.2配液:
浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:
19稀释后使用。
8.3编号:
将微孔条固定于支架,按序编号。
8.4加样:
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶:
分别在每孔中加入酶标记抗体50l,轻拍混匀。
8.6中和:
分别在每孔中加入中和抗原(HBeAg)50l,轻拍混匀。
8.7温育:
置37℃温育60分钟,室温平衡5分钟。
8.8洗涤:
用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。
8.9显色:
每孔加入底物A、B各50l,轻拍混匀,置37℃暗处15分钟。
8.10终止:
每孔加终止液50l,混匀。
8.11测定:
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。
9.结果判断与分析
9.1临界值(C.O.)的计算:
待测样品为原倍血清时,临界值=阴性对照孔OD值N×0.2,待测样品为非原倍血清时,临界值=阴性对照孔OD值N×0.5,(非原倍血清是指稀释血清、质控血清等)。
9.2结果判定:
样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性
10.质量控制:
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。
11.参考范围:
阴性
12.临床意义:
HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。
阳性表示机体已产生免疫力,病毒活力降低,传染性减弱,预后好。
13.操作性能:
灵敏度高,特异性好。
14.方法局限性:
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。
如果滴加,滴加前应弃去1-2滴。
滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封
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