黄鳝性逆转调控和苗种人工生态繁育与养殖技术研究.docx

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黄鳝性逆转调控和苗种人工生态繁育与养殖技术研究

“黄鳝性逆转调控和苗种人工生态繁育与养殖技术研究”

总结报告

华中农业大学《黄鳝性逆转调控》课题组

摘要：

使用较低蛋白质含量为10%—35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%—36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%—31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。

使用较高蛋白质含量为45%—50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%—95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%—17.90%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了68%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了高怀卵量的雌鳝。

饲料中使用60mg—80mg/kg戊酸雌二醇喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到78.62%—80.24%,比对照组雌性保持率提高了23.79%—26.34%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了71%，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了高怀卵量的雌鳝。

饲料中使用80mg—100mg/kg丙酸睾酮喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到61.34%—69.38%,比对照组雄性转化率提高了782.59%—898.27%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。

网箱养殖条件下，雌性黄鳝初次性成熟年龄为1年左右。

通过性逆转调控技术，可获得大批量繁殖雌雄鳝亲本。

采用全网箱繁殖、孵化和育苗。

网箱面积1—2m2，雌雄性比3:

2/m2。

经近千个网箱试验，平均每尾雌鳝获苗种125尾，最高达到200尾。

苗种体重约25—35g，体长约22.11—30.12cm。

采用人工苗种养殖商品鳝，成活率提高80—100%（野生鳝最低为0%，一般为60%）。

每平方米可获投入产出重量比1:

6（kg），产值420元，利润168元。

关键词：

性逆转调控；苗种人工生态繁育；人工生态养殖技术；黄鳝

Abstract：

Thepresentstudiesshowedthatlowdietaryproteinlevel10%-35%couldpromotesexreversalinricefieldeelatage1,theconversionrateofmalewas21.06%-36.51%,andimproved15.72%-31.17%comparedwiththeconversionrateofmaleoffemaleeelfedappropriateproteincontent40%,promotetheroleofeelsexreversal,andthesamebatchoffishandeelsspawnnaturallyfertilizedfemales,obtainedwithfunctionalmaleeel.Thehighdietaryproteinlevel45%-50%coulddelaysexreversalinricefieldeelatage1,theretentionrateoffemalewas87.18%-95.21%,andimproved9.87%-17.90%comparedwiththeretentionrateofmaleoffemaleeelfedappropriateproteincontent40%,delaytheroleofeelsexreversal,thebroodamountincreased68%,andobtainedthehighbroodamountfemaleeelbynaturallyfertilizedinthesamebatchoffishandfemalesspawn.Theretentionrationoffemalecouldupto78.62%-80.24%whenthefemaleeelfedthedietarywithadded60-80mgkg-1estradiolatage1,improved23.79%-26.34%comparedwiththeretentionrationoffemaleoftheeelfedthecontroldietary,delaytheroleofeelsexreversal,thebroodamountincreased71%,andobtainedthehighbroodamountfemaleeelbynaturallyfertilizedinthesamebatchoffishandfemalesspawn.Theconversionrationofmalecouldupto61.34%-69.38%whenthefemaleeelfedthedietarywithadded80mg-100mgkg-1sterandrylatage1,improved782.59%-898.27%comparedwiththeconversionrationofmaleoftheeelfedthecontroldietary,promotetheroleofeelsexreversal,andthesamebatchoffishandeelsspawnnaturallyfertilizedfemales,obtainedwithfunctionalmaleeel.Theageofsexmaturityoftheeelwasabout1underthecageculturecondition.Alargequantityofeelbreedingmaleandfemaleparentshadobtainedbysexreversalregulationtechnology,andthebreeding,hatchingandcultivatinginall-cage.Cageareawas​​1-2m2,sexratiowas3:

2perm2.Weobtainedthe125femaleeelaverageaftertestinthousandcages,upto200.Averageweightabout25gto35g,bodylength22.11cmto30.12cm.Thesurvivalrateofeelincreased80-100%byartificialbreedingtechnique（wildeel0%-60%）.Theinput-outputratioofweightcouldupto1:

6（kg）persquaremeter,theoutputvalue420yuan,profit168yuan.

Keywords:

sexreversalregulation;artificial-ecologicalbreedingtechniques;artificial-ecologicalculturetechnology;Monopterusalbus

黄鳝（MonopterusalbusZuiew）俗称鳝鱼、田鳗，隶属于硬骨鱼纲、合鳃目、合鳃科、黄鳝属，在我国仅产一种。

黄鳝是一种淡水穴居性鱼类，广泛分布于我国的江河、湖泊、平原性水库、沼泽、沟渠以及稻田中，生活在水体的底层。

黄鳝补血、补气、除风湿等，具有一定药用价值。

黄鳝体表光滑无鳞、无鳍，无鳔、无肌间刺，肉质鲜美，营养丰富，食用价值高。

黄鳝具有特殊的呼吸功能，很能耐饥饿，有利于长途高密度活体运输，食用、加工很方便，是我国重要的养殖鱼类之一，目前，已出口到美国、韩国和日本等，经济价值高。

近些年来，黄鳝栖息的自然生态环境随着工业废水、生活污水和人工使用农药、化肥、饲料等的污染，其野生资源逐渐减少。

在资源不足的严峻情况下，黄鳝的市场价格上扬又刺激了人们滥捕加剧。

加上人工养殖的鳝种95%以上来源于天然捕捞，故目前黄鳝的野生资源濒临枯竭。

黄鳝肉嫩昧鲜，营养价值高，尤其是肉中含丰富的DHA和卵磷脂，经常食用具有补脑健身的功效。

其价格近几年来一直在5O元/kg左右的高位徘徊，高峰时达80—100元/kg，具有很高的经济价值。

目前，限制黄鳝产业发展的瓶颈问题主要是苗种供应短缺的问题。

据调查和有关资料报道，国内外对商品黄鳝的需求量为300万吨以上，全国黄鳝苗种缺口在200亿尾以上。

有些地区因苗种短缺，黄鳝养殖面积逐步萎缩。

野生鳝苗经捕捞、储存、运输，其养殖成活率最低为0%，最高为60%，极不稳定。

而解决苗种问题必须首先攻克其性逆转问题。

黄鳝是典型的由雌经1年以上变为间性再转雄的性逆转鱼类，所以，雌性小，怀卵量少，雄性大，繁殖成本高，因此，黄鳝的苗种繁育一直没有过关。

如果解决了黄鳝的性逆转问题，雌性个体变大，怀卵量大大提高，雄性个体变小，繁殖成本大大降低，200亿尾苗种短缺的问题和300万吨成鳝的市场供应问题就会迎刃而解了。

本项目对黄鳝性逆转调控技术、苗种人工生态繁育技术和商品鳝人工生态养殖技术进行了较为详细的研究，旨在为解决黄鳝产业发展瓶颈问题和黄鳝产业进一步向纵深发展提供科学参考资料。

1.材料与方法

1.1试验地点与池塘

1.1.1试验地点

试验在湖北省汉川市汈汊湖渔场、沙洋县沙洋新世纪水产科技有限公司、仙桃市强龙水产专业合作社、监利县两湖渔业专业合作社和仙桃市大善水产有限公司的池塘中进行。

1.1.2试验池塘

池塘大小为4—15亩。

要求水源充足，水质清新，符合国家渔业养殖水质标准，通信与交通方便，周边环境安静。

使用前，首先对池塘进行清整和清淤，清淤后的池塘，淤泥深度平均在10—30cm左右。

池塘通过整理、清淤后，将池底曝晒2—3周，于4月上、中旬注水15cm左右，用生石灰85—125kg／亩进行清塘，清塘后1周左右，开始在池塘中设置网箱并将水花生放入网箱中，同时向池塘中放养适量的滤食性鱼类和银鲫、彭泽鲫等底层鱼类，不放养鲤、青鱼等易将底泥搅拌混浊的底层鱼类。

1.2网箱设置

1.2.1网箱设计

选用聚乙烯无结节网片，网目大小2a为4目/cm左右，网箱上、下纲采用直径为8—10mm的聚乙烯绳索，性逆转调控网箱规格长×宽×高为2.0m×1.0m×1.5m，苗种人工生态繁育网箱规格长×宽×高为2.0m×1.0m×1.5m或1.0m×1.0m×1.5m或1.0m×0.5m×1.5m或0.5m×0.5m×1.5m，孵化网箱规格长×宽×高为14×14×2cm，养殖网箱规格长×宽×高为2.0m×3.0m×1.2m，无盖敞开式。

1.2.2网箱设置

网箱成“一”字形平行排列，行距2m，箱距0.5m左右。

行距上端用钢丝固定，沿钢丝再用木桩或竹桩固定。

箱体高出水面40cm，入水80cm，箱底距池底40cm。

网箱至少要在鳝苗入箱前20—30d设置好，一方面便于网衣在水中附着藻类，使网衣呈现柔软性，避免鳝苗擦伤；另一方面要待水草生长茂盛后鳝苗才有栖身之处，提高鳝苗的成活率。

1.3水草选择

用于黄鳝遮光、栖息的水草最好是水花生，一般不用水葫芦。

水花生用二氧化氯等进行消毒后再移栽到网箱中，要及时施肥，如施叶面肥等。

水花生生长后的覆盖面积占网箱面积的90％左右，方能将鳝种放入网箱内。

1.4性逆转调控

1.4.1饲料中较低蛋白质含量对促进黄鳝性逆转的影响

试验共设5个组，每组饲料的蛋白质含量分别为10%、15%、20%、25%和40%（对照组），试验黄鳝均为1龄雌鳝（下同）。

试验周期为1年。

主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。

1.4.2饲料中较高蛋白质含量对延缓黄鳝性逆转的影响

试验共设3个组，每组饲料的蛋白质含量分别为35%、45%、55%，试验周期为1年。

主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。

1.4.3饲料中雌二醇含量对黄鳝性逆转的影响

试验共设6个剂量组，每组设3个平行，每组饲料中雌二醇（法国先灵ScheringSA公司产品）含量分别为0，20，40，60，80和100mg/kg，其中0组为对照组。

主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。

1.4.4饲料中丙酸睾酮含量对黄鳝性逆转的影响

试验设置5个不同梯度的丙酸睾酮添加到黄鳝饲料中，然后进行投喂。

对照组为不含丙酸睾酮，试验组的添加量分别为0mg/kg（T0）、20mg/kg（T20）、40mg/kg（T40）、60mg/kg（T60）、80mg/kg（T80）和100mg/kg（T100）。

主要测定性腺指数、测定血清性类固醇激素雌二醇和睾酮含量、性腺组织切片观察和计算性逆转比例。

1.5全网箱人工苗种繁育

雌雄性比3:

2/m2，苗种培育使用轮虫、桡足类和枝角类无节幼体、水蚯蚓、丰年虫等。

1.6商品鳝网箱养殖

1.6.1人工繁育鳝种密度比较试验

4月下旬，放养3种密度的人工繁育鳝种，即1kg/m2（29尾/m2）、1.3kg/m2（37尾/m2）、1.6kg/m2（46尾/m2）。

每尾平均体长30.12cm，每尾平均体重35g。

每种密度分别为20个网箱，共60个网箱。

1.6.2人工繁育鳝种规格比较试验

4月下旬，放养3种规格的人工繁育鳝种，即每尾平均体长32.45cm，每尾平均体重45g；每尾平均体长30.12cm，每尾平均体重35g；每尾平均体长22.11cm，每尾平均体重25g；密度均为1kg/m2，每种规格分别为20个网箱，共60个网箱。

1.6.3人工繁育鳝种放养时间比较试验

将同一密度、同一规格的人工繁育鳝种进行3种放养时间试验，即4月下旬、6月下旬和8月下旬。

放养密度均为1kg/m2，放养规格为每尾平均体长30.12cm，每尾平均体重35g。

1.6.4人工繁育鳝种生产性试验

经过人工繁育鳝种密度、规格和放养时间的对比试验，筛选出密度为1kg/m2、规格为35g/尾和放养时间为4月下旬作为生产性试验的指标比较合适。

1.6.5野生鳝种与人工鳝种比较试验

1.6.5.1野生鳝种

要求鳝种体质健康、无病无伤、活动敏捷。

鳝种由于长途运输，可能造成体质下降，在运输过程中，可用电解多维、金维他、生姜片等增强体质，以防应激反应和感冒。

1.6.5.2人工鳝种

要求装箱后迅速起运，如果路程较远，在运输过程中，可用电解多维、金维他、生姜片等增强体质，以防应激反应和感冒。

1.7训食

1.7.1人工鳝种

人工鳝种除了运输工具等消毒外，在入箱前一般不需要消毒，可直接投入到网箱中。

人工鳝种也不需要训食，可直接按重量比投喂商品饲料。

1.7.2野生鳝种

鳝种入箱前用百万分之十五的聚维酮碘溶液浸泡10—15min左右，入网箱后第3天开始选用新鲜蚯蚓或新鲜野杂鱼按体重的3%进行投喂，以后每天加入适量的配合饲料，l5d后，直至配合饲料与蚯蚓或新鲜野杂鱼的比例为70%：

30%为止。

经过半个月的驯食，野生鳝种基本上可养成良好的摄食习性。

1.7.3投饵“四定”

黄鳝养殖一定要遵守投饵“四定”原则。

每天17：

30左右投喂1次，投饵率为3％一5％左右，以1—2h吃完为宜。

第二天清晨清除残饲，依据残饲多少适当调整投饵率。

1.7.4巡塘检查

坚持早晚巡塘，以夜间巡塘为主，检查黄鳝的吃食、活动与疾病情况。

1.8疾病防治

鳝种入箱前用百万分之十五的聚维酮碘溶液浸泡10—15min左右，并在网箱水体中加入3—5mg/l抗应激灵，防治鳝苗因长途运输及机械损伤而引发的细菌性病、发狂病、应激等。

鳝苗人箱后15d以及之后每15d用生石灰150—225kg／hm2或二氧化氯、聚维酮碘等消毒药物对养殖水体进行泼洒消毒1次；每月交替内服抗肠炎药、鳝肠清和万士菌毒克1个疗程（2—3d）。

在黄鳝饵料中不定期添加复合维生素、鱼肝油、板蓝根等物质，增强黄鳝的抗病力；同时每月内服1次无残留的纯中草药成分的保肝药鳝舒灵，以促生长。

2．结果

2.1使用较低蛋白质含量为10%—35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%—36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%—31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。

2.2使用较高蛋白质含量为45%—50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%—95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%—17.90%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了68%，获得了较高怀卵量的雌鳝，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精。

2.3饲料中使用60mg—80mg/kg戊酸雌二醇喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到78.62%—80.24%,比对照组雌性保持率提高了23.79%—26.34%，具有延缓黄鳝性逆转的作用，其怀卵量提高了71%，获得了较高怀卵量的雌鳝，并和同批鱼中雄鳝自然产卵受精。

2.4饲料中使用80mg—100mg/kg丙酸睾酮喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到61.34%—69.38%,比对照组雄性转化率提高了782.59%—898.27%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了具有功能性的雄鳝。

2.5网箱养殖条件下，人工繁育的雌性黄鳝初次性成熟年龄为1年左右。

通过性逆转调控技术，可获得大批量人工繁殖雌雄鳝亲本。

2.6采用全网箱繁殖、孵化和育苗。

网箱面积1—2m2，雌雄性比3:

2/m2。

经近千个网箱试验，平均每尾雌鳝获苗种125尾，最高达到200尾。

体长达到22.11—30.12cm，体重25—35g。

2.7设置1980m2网箱采用人工苗种养殖商品鳝，成活率提高80—100%（野生鳝最低为0%，一般为60%）。

每平方米可获投入产出重量比1:

6（kg），产值420元，利润168元。

3.讨论

3.1关于黄鳝性逆转调控问题

中国科学院院士刘健康（1944）首次发现黄鳝存在着性逆转现象。

他指出，黄鳝的性别与体长和年龄明显有关，中小个体主要为雌性，较大和大个体主要为雄性；之后，刘健康等（1951）又研究了黄鳝性逆转时生殖腺组织由雌性逐步向雄性的改变；1951年以后，国内外一些学者Chan和Phillips（1967）、刘修业等（1990）等诸多学者相继从性腺发育组织学进一步证实了黄鳝由雌性向雄性转变并不再逆转的事实。

关于营养与黄鳝性逆转的关系，Liem（1963）提出黄鳝的性逆转可能与食物的丰欠有关，他认为周期性干旱、食物缺乏或长期饥饿黄鳝就会提前性逆转，但未进行实验来加以证实；石琼等（1998）研究了饥饿对黄鳝性逆转有促进作用，他指出：

Ⅳ期雌鳝经6周饥饿后，雄性转化率达到57.14%，较对照组提高37.14%，Ⅴ期雌鳝经6周饥饿后，雄性转化率达到61.11%，较对照组提高37.58%，但未能进一步证实所获雄鳝是否具有繁殖性能。

关于外源激素与黄鳝性逆转的关系，Tang等（1974a；1974b）发现注射羊黄体生成素可以促进黄鳝的性逆转，但未能获得功能性雄鳝；Tao等（1993）注射鲑鱼促性腺激素释放激素类似物SGnRH-A成功地诱导黄鳝提前性逆转，也未能获得功能性雄鳝；Yueng等（1993）注射哺乳动物LH能诱导排卵后的黄鳝性逆转，但还是未能获得功能性雄鳝；陶亚雄等（1993，1994）研究表明，鲤鱼垂体匀浆、人绒毛膜促性腺激素、鲑鱼促性腺激素释放激素类似物均能增加雌雄黄鳝血清类固醇激素水平（人绒毛膜促性腺激素对雄鳝雌二醇无影响）；石琼等（1998）通过给Ⅳ期雌鳝注射外源性褪黑激素具有低剂量促进与高剂量抑制黄鳝性逆转的双重调节作用,但均未能进一步证实所获黄鳝鳝是否具有繁殖性能。

关于基因与黄鳝性逆转的关系，张勇等（2001）以人和鼠的SRY片断为探针与黄鳝基因组DNA进行杂交，认为黄鳝性别决定与SRY基因不相关；刘利等（2001）克隆了黄鳝Sox9基因，有利于对其基因组DNA和cDNA序列结构与转基因黄鳝的深入研究；Zhou等（2002）从黄鳝中分离出SRY相关基因,并且通过Southern杂交，证明了SRY相关基因Sox9和Sox17在进化上是保守的基因。

戢福云等（2004）以大熊猫锌指蛋白基因Zfx为探针,在黄鳝基因组DNA中检测到一条长约9.5kb的杂交带，克隆得到黄鳝锌指蛋白基因Zfa,并运用FISH将其定位于黄鳝1号染色体，其上存在有真兽类哺乳动物X染色质同源的保守片段。

认为应用哺乳动物X染色体连锁的其他基因在鱼类开展染色体比较定位研究,将有望促进脊椎动物性染色体进化的深入研究。

吕道远等（2005）采用RNA反义探针原位杂交技术,对vasa基因在黄鳝自然性逆转过程中的表达情况进行了分析，认为黄鳝的雄性生殖细胞可能起源于雌性阶段卵巢被膜中的原始生殖细胞；彭茂宇（2005）通过PCR克隆的方法,克隆了黄鳝DEAD-box家族PL10基因。

商璇（2005，2006）采用高密点阵技术从黄鳝雄性性腺中克隆了核糖体蛋白基因，认为该基因可能参与包括性腺分化等过程的发育调控；后又研究了Nup93基因在性腺和肾中的表达远高于其他组织，并存在性别差异，可能与性腺发育有关；俞菊华等（2005）首次分离和克隆了雌雄同体鱼黄鳝卵巢中P450芳香化酶基因，认为该基因与卵巢的关系最近。

李伟等（2009）克隆了黄鳝脑P450芳香化酶基因，认为该基因在黄鳝脑和精巢中有较高的表达。

Jang等（2006）为了研究黄鳝性别决定的分子机制，以pIndigoBAC-5为载体，首次构建了黄鳝BAC文库，建立了有效和可靠的BAC文库构建方法。

方平等（2007）首次运用RACE和RT-PCR方法,从黄鳝脑组织中克隆得到cGnRH-ⅡcDNA全序列,cGnRH-ⅡcDNA的蛋白编码区高度保守,而非编码区的保守性程度很低。

认为cGnRH-Ⅱ在黄鳝的性腺发育和性逆转方面只起协调作用。

综上所述，迄今为止关于营养、激素等各种因子对黄鳝性逆转的研究中，虽能获得由雌鳝转变的雄鳝，但未见有转变后的雄鳝与雌鳝自然产卵受精再获得黄鳝子代的报道；同样，虽能获得延缓性逆转后的雌鳝，但也未见有延缓性逆转后的雌鳝与雄鳝自然产卵受精再获得黄鳝子代的报道。

也就是说，对促进和延缓黄鳝性逆转的问题还没有取得实质性进展。

近7年来研究了营养与激素水平对黄鳝性逆转的影响，研究结果表明，使用较低蛋白质含量为10%—35%的饲料喂养1龄雌鳝，其雄性转化率达到21.06%—36.51%,比适宜蛋白质含量为40%的雄性转化率提高了15.72%—31.17%，具有促进黄鳝性逆转的作用，并和同批鱼中雌鳝自然产卵受精，获得了小批量苗种；而使用较高蛋白质含量为45%—50%的饲料喂养1龄雌鳝，其雌性保持率达到87.18%—95.21%,比适宜蛋白质含量为40%的雌性保持率提高了9.87%—17.90%，具有延缓黄