生产工艺和检验方法.docx
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生产工艺和检验方法
资料4
质量规格要求、生产使用工艺和检验方法,食品中该添加剂的检验方法和相关情况说明
4.1质量标准
4.2质量标准编制说明
4.3含量检测方法学第三方验证报告
4.4生产使用工艺
4.5食品中的检验方法和相关情况说明
资料4.1
质量标准
Q/SJ
广东双骏生物科技有限公司企业标准
Q/SJ0082S-2014
食品添加剂
维生素K2(发酵法)
2014-01-01发布2014-01-01实施
广东双骏生物科技有限公司发布
前言
本标准的编写方法是按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分:
标准的结构和编写》有关规定编写。
本标准由广东双骏生物科技有限公司提出并起草。
本标准的附录A、附录B为资料性附录。
本标准的主要起草人:
陈杰鹏、邱雪莲、纪烨瑜、蔡桂珠、段丽丽、胡留松、李东升、洪泽渠。
本标准于2014年1月1日首次发布。
维生素K2(发酵法)
1范围
本标准适用于以非转基因大豆粉、白砂糖、葡萄糖经枯草芽孢杆菌发酵的发酵物,经提取精制而成的食品添加剂维生素K2(发酵法)的商品化产品。
2分类
维生素K2(发酵法)商品化的产品可根据产品性状分为维生素K2(发酵法)油剂和维生素K2(发酵法)粉剂。
2.1维生素K2(发酵法)油剂
维生素K2(发酵法)油剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌,辅料包括大豆油。
2.2维生素K2(发酵法)粉剂
维生素K2(发酵法)粉剂产品其主要成分为维生素K2族的七烯甲萘醌,辅料包括变性淀粉、酪蛋白酸钠、辛烯基琥珀酸淀粉钠、甘油脂肪酸酯、L-抗坏血酸棕榈酸酯等。
3主要成分的化学名称、分子式、结构式和相对分子质量
3.1化学名称
CAS编号:
2124-57-4
(全-E)—2-(3,7,11,15,19,23,27-七甲基-2,6,10,14,18,22,26-二十八碳七烯基)-3-甲基-1,4-萘二酮。
3.2分子式
C46H64O2
3.3结构式
3.4相对分子质量
649.00(按2007年国际相对原子质量)
4技术要求
4.1感官要求:
应符合表1的规定。
表1感官要求
项目
要求
检验方法
维生素K2(发酵法)油剂
维生素K2(发酵法)粉剂
取样品适量置于50ml烧杯中,于自然光下,用肉眼观察其色泽、形态、组织、杂质;嗅其气味等。
色泽
浅黄色
白色至浅黄色
滋味、气味
本品特有的气味、滋味,无异味
性状
澄清或微混浊油状
粉末状
杂质
无正常视力可见的杂质
4.2理化指标:
应符合表2的规定。
表2理化指标
项目
指标
检验方法
维生素K2(发酵法)油剂
维生素K2(发酵法)粉剂
维生素K2,含量a/(µg/g)≥
1500
1000
附录B
酸价,mgKOH/g≤
1.0
-
GB5009.37
过氧化值,meq/kg≤
5.0
-
GB5009.37
水分,%≤
-
5.0
GB5009.3
灰分,%≤
-
3.0
GB5009.4
总砷(以As计),mg/kg≤
0.1
GB/T5009.11
铅(以Pb计),mg/kg≤
0.1
GB5009.12
汞(Hg),mg/kg≤
0.05
GB5009.17
镉(Cd),mg/kg≤
0.1
GB5009.15
六六六,mg/kg≤
0.05
GB/T5009.19
滴滴涕,mg/kg≤
0.05
黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2),µg/kg≤
5
GB/T5009.23
a注:
维生素K2含量以七烯甲萘醌含量标示,七烯甲萘醌实际含量为标示量的95%~110%。
4.3微生物指标:
应符合表3的规定。
表3微生物指标
项目
指标
检验方法
维生素K2(发酵法)油剂
维生素K2(发酵法)粉剂
菌落总数,CFU/g≤
300
1000
GB4789.2
霉菌及酵母,CFU/g≤
25
100
GB4789.15
大肠菌群,MPN/g≤
3.0
GB4789.3
大肠埃希氏菌,MPN/g≤
3.0
GB4789.38
致病菌(沙门氏菌、金黄色葡萄球菌)
不得检出
GB4789.4、GB4789.10
5.其他要求
产品应装于适宜的避光容器中充氮或真空保存,产品的最佳保存温度为20℃以下。
附录A
产品组成
维生素K2(发酵法)商品化产品的组成:
A.1油剂产品
表A.1维生素K2(发酵法)油剂产品组成
组分
比例(%)
大豆油
≤99.85%
维生素K2(七烯甲萘醌)
≥0.15%
A.2粉剂产品
表A.2维生素K2(发酵法)粉剂产品组成
组分
比例(%)
变性淀粉
63%
大豆油
≤23.4%
酪蛋白酸钠
10%
辛烯基琥珀酸淀粉钠
2%
甘油脂肪酸酯
1%
L-抗坏血酸棕榈酸酯
0.5%
维生素K2(七烯甲萘醌)
≥0.1%
注:
大豆油与维生素K2含量合计所占比例为23.5%
附录B
检验方法
B.1安全提示
本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性,按相关规定操作,操作时需小心谨慎。
若溅到皮肤上应立即用水冲洗,严重者应立即治疗。
在使用易燃品时,严禁使用明火加热。
B.2一般规定
本标准所用试剂和水,在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T6682-2008中规定的一级水。
试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。
B.3鉴别试验
B.3.1方法提要
试样用正己烷提取,按含量测定项下色谱条件进行高效液相色谱分析,与七烯甲萘醌标准品保留时间进行对照。
试样色谱图的主峰应与标准品主峰保留时间一致。
B.3.2检测试剂
B.3.2.1维生素K2标准品(七烯甲萘醌MK-7,Chromadex)
B.3.2.2正己烷:
分析纯
B.3.3检测步骤
B.3.3.1样品溶液处理
精密称取样品适量(精确至0.001g)于10mL容量瓶中,加入正己烷超声提取30分钟,定容至刻度,摇匀,过0.45μm滤膜,得上样样品。
B.3.3.2样品检测
按照含量测定项下方法,配制标准溶液。
按照含量测定色谱条件将标准溶液和样品溶液10µL注入高效液相色谱仪中测定,以保留时间定性鉴别。
B.4含量测定
B.4.1检测试剂
B.4.1.1维生素K2标准品(七烯甲萘醌MK-7,Chromadex)
B.4.1.2异丙醇:
分析纯
B.4.1.3甲醇:
色谱纯
B.4.2仪器及检测条件
B.4.2.1高效液相色谱仪
B.4.2.2紫光光检测器:
可变波长
B.4.2.3数据处理系统:
色谱工作站或数据处理机
B.4.3参考色谱条件
推荐的色谱柱及典型操作条件如下表,其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。
色谱柱和色谱操作条件
色谱柱
C18ODS柱,柱长150mm,内径4.6mm,内装C18填充物,粒径5μm或是相当者
柱温/℃
50
流动相
甲醇
流速/mL/min
1.0
检测波长/nm
254
进样量/μL
10
B.4.4检测步骤
B.4.4.1样品溶液处理
精密称取样品适量(精确至0.001g)样品于10mL容量瓶中,加入异丙醇超声30分钟,用异丙醇定容至刻度,摇匀,过0.45μm滤膜,得上样样品。
B.4.4.2标准品溶液配制
精密称取七烯甲萘醌标准品适量,用异丙醇溶解并定容,配制成浓度为20μg/mL的标准品溶液。
B.4.4.3样品测定
用标准品和样品溶液10µL注入高效液相色谱仪中测定,以保留时间定性,峰面积外标法定量。
B.4.5结果计算
对维生素K2(七烯甲萘醌)的含量按下式进行计算:
A1×C1×V1
W=——————————————
A2×M1
式中:
W——样品中维生素K2(七烯甲萘醌)的含量(μg/g);
A1——样品中维生素K2(七烯甲萘醌)对应峰面积;
A2——标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)对应峰面积;
C1——进样标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)的浓度(µg/mL);
V1——供试样品定容体积,单位为毫升(mL);
M1——样品质量(g)。
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。
资料4.2
质量标准编制说明
一、标准编制目的
维生素K2(发酵法)是食品添加剂新品种,该产品在国内为首次申报,无国家标准、行业标准及地方标准可参考,为保证产品质量,指导企业生产,根据食品安全法及相关法律法规,制定本标准。
二、与我国相关法律法规及其他标准的关系
本产品为K族维生素,在《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》(GB14880-2012)中规定,维生素K可用于调制乳粉(仅限儿童用乳粉)和调制乳粉(仅限孕产妇用乳粉)。
本产品申请作为维生素K的新化合物来源,目前国内无标准可参考,根据国内产品质量和检验实际情况进行,符合《食品安全法》、《食品安全国家标准食品营养强化剂使用标准》(GB14880-2012)等我国有关法律法规的规定要求。
标准文本中引用的相关标准如下:
GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定
GB5009.4食品安全国家标准食品中灰分的测定
GB/T5009.11食品安全国家标准食品中总砷和无机砷的测定
GB5009.12食品安全国家标准食品中铅的测定
GB/T5009.15食品安全国家标准食品中镉的测定
GB/T5009.17食品安全国家标准食品中总汞及有机汞的测定
GB/T5009.19食品安全国家标准食品中有机氯农药多组分残留的测定
GB/T5009.23食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
GB/T5009.37食品安全国家标准食用植物油卫生标准的分析方法
GB4789.2食品安全国家标准食品微生物检验菌落总数测定
GB4789.3食品安全国家标准食品微生物检验大肠菌群计数
GB4789.4食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验
GB4789.10食品安全国家标准食品微生物检验金黄色葡萄球菌检验
GB4789.15食品安全国家标准食品微生物检验霉菌和酵母计数
GB4789.38食品安全国家标准食品微生物检验大肠埃希氏菌计数
三、国外相关法律、法规和标准情况的说明
维生素K2(发酵法)2008年在国外以GRAS(公认安全使用物质)来批准的,批准公告为GRNNO.245;2009年在欧盟获得批准,欧委会决议为2009/345/EC。
本标准参考以上两个批准公告的技术指标,并结合国内产品实际生产情况进行制定。
本标准维生素K2(发酵法)油剂共制定指标17项,维生素K2(发酵法)粉剂共制定指标17项,表1、2为国内外维生素K2(发酵法)各指标的对比情况,表3是国内外维生素K2(发酵法)检测方法的对比。
表1.国内外维生素K2(发酵法)油剂各指标的对比情况
产品
项目
指标
本标准
GRASGRNNO.245
2009/345/EC
维生素K2(发酵法)油剂
七烯甲萘醌(MK-7),µg/g≥
1500
1500
1500
六烯甲萘醌(MK-6),µg/g≥
-
100
少量
感官
本品特有的气味、滋味,无异味,澄清或微混浊油状
无味的,澄清或微混浊油状
油混悬液
酸价,mgKOH/g≤
1.0
10
10
过氧化值,meq/kg≤
5.0
3.0(分装时)
3.0(分装时)
总砷,mg/kg≤
0.1(以AS计)
0.5(以As2O3计)
-
铅(以Pb计),mg/kg≤
0.1
0.5
-
汞(Hg),mg/kg≤
0.05
0.1
-
镉(Cd),mg/kg≤
0.1
0.5
-
铬(Cr),mg/kg≤
-
未检出
-
农残,mg/kg≤
六六六,0.05
滴滴涕,0.05
0.01(检测350种农残)
-
黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2),
µg/kg≤
5
10
-
二噁英,pgWHO-PCDD/F≤
-
0.75
-
菌落总数,CFU/g≤
300
300
-
霉菌及酵母,CFU/g≤
25
30
-
大肠菌群,MPN/g≤
3.0
-
-
大肠埃希氏杆菌,≤
3.0MPN/g
10CFU/2.2g
-
沙门氏菌
不得检出
不得检出/10g
-
金黄色葡萄球菌
不得检出
不得检出/0.01g
-
表2.国内外维生素K2(发酵法)粉剂各指标的对比情况
产品
项目
指标
本标准
GRASGRNNO.245
维生素K2(发酵法)粉剂
七烯甲萘醌(MK-7),µg/g≥
1000
1000
六烯甲萘醌(MK-6),µg/g≥
-
50
感官
白色至浅黄色粉末,具本品特有的气味、滋味,无异味
白色至浅黄色,无味粉末
水分,%≤
5.0
8.0
灰分,%≤
3.0
-
总砷,mg/kg≤
0.1(以As计)
0.5(以As2O3计)
铅(以Pb计),mg/kg≤
0.1
0.5
汞(Hg),mg/kg≤
0.05
0.1
镉(Cd),mg/kg≤
0.1
0.5
铬(Cr),mg/kg≤
-
未检出
农残,mg/kg≤
六六六,0.05
滴滴涕,0.05
0.01(每种,检测350种农残)
黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2),
µg/kg≤
5
10
二噁英,pgWHO-PCDD/F≤
-
0.75
菌落总数,CFU/g≤
1000
3000
霉菌及酵母,CFU/g≤
100
300
大肠菌群,MPN/g≤
3.0
-
大肠埃希氏杆菌,≤
3.0MPN/g
10CFU/2.2g
沙门氏菌
不得检出
不得检出/10g
金黄色葡萄球菌
不得检出
不得检出/0.01g
肠杆菌属,≤
-
10CFU/g
表3.国内外维生素K2(发酵法)产品检测方法对比
项目
本标准
GRASGRNNO.245
七烯甲萘醌(MK-7)
高效液相色谱法
高效液相色谱法
六烯甲萘醌(MK-6)
-
高效液相色谱法
酸价
GB/T5009.37
AOCSTe1a-64
过氧化值
GB/T5009.37
AOCSCd8b-90
水分
GB5009.3
105℃,4小时
灰分
GB5009.4
-
总砷(以As计)
GB/T5009.11
AOAC952.13二乙基二硫代氨基甲酸银法
铅(以Pb计)
GB5009.12
AOAC973.35原子吸收法
汞(Hg)
GB/T5009.17
AOAC971.21原子吸收法
镉(Cd)
GB/T5009.15
AOAC952.13原子吸收法
铬(Cr)
-
APHA二苯卡巴肼比色法
六六六
GB/T5009.19
气相色谱-质谱法
滴滴涕
GB/T5009.19
气相色谱-质谱法
黄曲霉素(B1+B2+G1+G2)
GB/T5009.23
AOAC990.33高效液相色谱法
二噁英
-
气相色谱-质谱法
菌落总数
GB4789.2
AOAC966.23
霉菌及酵母
GB4789.15
AOAC997.07
大肠菌群
GB4789.3
-
大肠埃希氏杆菌
GB4789.38
AOAC991.14
沙门氏菌
GB4789.4
AOAC967.25
金黄色葡萄球菌
GB4789.10
日本食品卫生协会方法
肠杆菌属
-
AOAC2003.01
四、标准各指标制定依据
本标准各指标的制定,是综合考虑国家有关食品添加剂的卫生标准、行业标准,本企业采用的国内生产原料、生产工艺等实际情况,以及各项指标实际检验情况进行制定的。
相关的制定依据如下:
1.感官要求
检查方法:
取样品适量置于50ml烧杯中,于自然光下,用肉眼观察其色泽、形态、组织、杂质;嗅其气味等。
维生素K2(发酵法)油剂为具有产品特有的气味、滋味,无异味;澄清或略有浑浊的的油状物;与国外标准一致。
维生素K2粉(发酵法)粉剂为具有产品特有的气味、滋味,无异味;白色至浅黄色粉末,与国外标准一致。
2.鉴别试验
检验方法:
高效液相色谱法对产品进行定性判断。
国外标准中未涉及鉴别试验。
由于维生素K2(发酵法)商品化形式为油剂及粉剂,分别为以维生素K2——七烯甲萘醌为活性成分的混合物,因此本标准以七烯甲萘醌为对照品,采用高效液相色谱法进行定性。
3.含量
检验方法:
高效液相色谱法。
本标准采用检测方法为高效液相色谱法进行维生素K2——七烯甲萘醌定量,与国外标准方法一致。
由于商品化产品中的含量较低,油剂产品为0.1%,粉剂产品为0.15%,考虑检测过程的误差,七烯甲萘醌的检测结果以标示含量的95%~110%视为合格。
此外,考虑菌种的差异,产品中七烯甲萘醌同系物六烯甲萘醌的含量与国外产品比例不同,且目前六烯甲萘醌的对照品较难获得,仅国外TRC有售,价格昂贵(5mg/US$8900),订货周期长(14~20周),因此在本标准中并未对六烯甲萘醌含量进行限制。
4.酸价
检验方法:
按照GB/T5009.37方法检测。
国外标准为≤10mgKOH/g,所用检验方法为AOCSTe1a-6。
本标准维生素K2(发酵法)油剂酸价根据实际工艺情况,定为≤1.0mgKOH/g,比起国外标准要严格。
5.过氧化值
检验方法:
按照GB/T5009.37方法检测。
国外标准中将维生素K2油过氧化值定为在分装填充时≤3.0meq/kg,检验方法采用AOCSCd8b-90。
为更客观的体现产品的真实质量,本标准将维生素K2(发酵法)油剂过氧化值定为成品≤5.0meq/kg。
6.水分
检验方法:
按照GB5009.3方法检测。
国外标准规定维生素K2粉,成品水分为≤8%,检验方法为105℃,4小时干烤,方法与GB5009.3第一法基本一致。
本标准将维生素K2(发酵法)粉剂水分定为≤5.0%。
7.灰分
检验方法:
按照GB5009.4方法检测。
国外标准未规定维生素K2粉的灰分,考虑灰分对成品质量的影响,特制定该项,规定维生素K2(发酵法)粉剂灰分≤3.0%。
8.总砷
检验方法:
按照GB/T5009.11方法检测。
国外标准规定总砷以As2O3计,≤0.5mg/kg(换算成As,则≤0.19mg/kg),检验方法为AOAC952.13二乙基二硫代氨基甲酸银法。
本标准中将产品总砷定为以As计算,≤0.1mg/kg。
9.铅
检验方法:
按照GB5009.12方法检测。
国外标准规定铅以Pb计,≤0.5mg/kg,检验方法为AOAC973.35原子吸收法。
本标准中将产品铅定为≤0.1mg/kg。
10.汞
检验方法:
按照GB5009.17方法检测。
国外标准规定汞以Hg计,≤0.1mg/kg,检验方法为AOAC971.21原子吸收法。
本标准中将产品汞定为≤0.05mg/kg。
11.镉
检验方法:
按照GB5009.15方法检测。
国外标准规定镉以Cd计,≤0.5mg/kg,检验方法为AOAC952.13原子吸收法。
本标准中将产品镉定为≤0.1mg/kg。
12.铬
检验方法:
按照GB/T5009.123方法检测。
国外标准中铬定为未检出,检测方法为APHA二苯卡巴肼比色法。
本标准产品维生素K2(发酵法)油剂主要辅料为大豆油;维生素K2(发酵法)粉剂制作过程中,需要添加多个食品添加剂辅料进行制粒。
基于国内食品添加剂标准中对铬指标未限定,再者考虑本产品作为添加剂添加量约400~800μg/kg,在食品中所占比例极少,不致于影响最终产品铬含量,因此维生素K2(发酵法)产品标准不限定此项。
13.农残
检验方法:
按照GB/T5009.19方法检测。
国外标准中规定每年检测产品一次,采用气相色谱-质谱方法(GC-MS)扫描350种农残多组分的残留。
本标准生产使用的大豆粉为国内生产的非转基因大豆粉,由于国外在使用农药与国内情况不同,根据国内实际情况及标准的可执行性,将农残确定为有机氯中的六六六和滴滴涕,并将指标定为≤0.05mg/kg。
14.黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)
检验方法:
按照GB/T5009.23方法检测。
国外标准中规定黄曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)≤10µg/kg,检测方法为AOAC990.33高效液相色谱法。
本标准将此项定为≤5µg/kg。
15.二噁英
国外标准中二噁英项目定为≤0.75pgWHO-PCDD/F-TEQ/g2,检测方法采用气相色谱-质谱法进行检测。
由于该项目的检测对样品处理、仪器等条件要求较高,国内目前能进行检测的机构较少,该项目检测的可操作性较差,因此不对该项目制定指标。
16.菌落总数
检验方法:
按照GB4789.2方法检验。
国外标准对维生素K2油和维生素K2粉分别制定指标为≤300CFU/g和≤3000CFU/g,检测方法为AOAC966.23。
本标准规定维生素K2(发酵法)油剂菌落总数≤300CFU/g,维生素K2(发酵法)粉剂菌落总数≤1000CFU/g。
17.霉菌及酵母
检验方法:
按照GB4789.15方法检验。
国外标准对维生素K2油和维生素K2粉分别制定霉菌及酵母指标为≤30CFU/g和≤300CFU/g,检测方法为AOAC966.23。
本标准规定维生素K2(发酵法)油剂霉菌及酵母≤25CFU/g,维生素K2(发酵法)粉剂霉菌及酵母≤100CFU/g。
18.大肠菌群及肠杆菌属
检验方法:
按照GB4789.3方法进行检测。
在肠道菌群的指标控制上,国外标准采用的是欧洲惯用的食品卫生指标菌——肠杆菌属,对维生素K2粉规定了肠杆菌属≤10CFU/g,对于维生素K2油并未制定此指标;检测方法采用AOAC2003.01。
本标准中针对维生素K2(发酵法)油剂和维生素K2(发酵法)粉剂均采用目前国际上常用的大肠菌群指标来表示食品卫生指标,规定≤3.0MPN/g。
19.致病菌:
大肠埃希氏杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌
检验方法:
三类致病菌分别按照GB4789.38、GB4789.4和GB4789.10方法检测。
国外标准对大肠埃希氏杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌三类致病菌,分别规定大肠
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