S100蛋白S100作业指导书.docx
- 文档编号:3282741
- 上传时间:2022-11-21
- 格式:DOCX
- 页数:12
- 大小:113.11KB
S100蛋白S100作业指导书.docx
《S100蛋白S100作业指导书.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《S100蛋白S100作业指导书.docx(12页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
S100蛋白S100作业指导书
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411(S100)
蛋白S100
文件编号:
LAB-OP-MY0201页,共第页1版本:
A/0生效日期:
2008-02-01
分析原理1.采用双抗体夹心法原理,整个过程18分钟完成。
·第1步:
20μl标本、生物素化的抗S100单克隆抗体和钌(Ru)标记的抗S100单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。
·第2步:
加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步:
反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。
Elecsys自动将标本产生的光电信号与从S100定标液得出的Cutoff值相比较。
2.标本要求
血清必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。
请勿使用血浆。
在15–25°C可保存8小时;在-20°C可保存3个月34。
在使用原始试管处理标本时,应遵循试管生产商所提供的指导。
如标本中有沉淀出现,必须先作离心处理再进行分析。
已经加热失活的标本无法分析。
使用叠氮化物作为稳定剂的标本或质控液无法分析。
检测前,请确保患者标本、定标液及质控液放置在20–25°C的环境中。
由于蒸发因素的影响,标本、定标液及质控液在放入分析仪后请在2小时内完成测定。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂:
M:
链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,6.5ml。
粒子浓度0.72mg/ml,含防腐剂。
R1:
生物素化的抗S100单克隆抗体(灰盖),1瓶,9ml,浓度1.0mg/l,磷酸缓冲液50mmol/l,pH7.2含防腐剂。
R2:
Ru(bpy)32+标记的抗S100单克隆抗体(黑盖),1瓶,9ml。
浓度1.0mg/l,磷酸缓冲液50mmol/l,pH7.2含防腐剂。
校准品:
Cal1阴性定标液(白盖),2*1ml血清,含防腐剂
Cal2阳性定标液(黑盖),2*1ml血清,含防腐剂
质控品:
ElecsysS100质控品1和2(PreciControlS100)货号03330648
其他所需材料:
Elecsys2010/cobase411分析仪所需材料:
货号11662988122,ElecsysProCell,6x380mL,系统缓冲液
货号11662970122,ElecsysCleanCell,6x380mL,检测池洗液
货号11930346122,ElecsysSysWash,1x500mL附加洗液
货号11933159001,SysClean适配器
货号11706829001,Elecsys1010分析杯,12x32反应管,或货号11706802001,Elecsys2010分析杯,60x60反应管
货号11706799001,Elecsys2010分吸吸头,30x120移液管吸头
ModularAnalyticsE170/cobase601免疫分析仪所需材料:
货号04880340,ProCellM,2x2L系统缓冲液
货号04880293,CleanCellM,2x2L检测池洗液
货号03023141001,PC/CC杯,50杯用于在测定前预热ProcellM及CleancellM。
清洗液,用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。
03005712190,ProbeWashM,12x70mL货号.
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411
文件编号:
LAB-OP-MY0202页,共第页2版本:
A/0生效日期:
2008-02-01
货号12102137001,分析杯/分析吸头组合装M,48分析杯x84反应管或加液器吸头,废物袋
货号03023150001,WasteLiner,废物袋
货号03027651001,SysClean适配器M
三种分析仪均需要的材料:
货号11298500316,ElecsysSysClean,5x100mL系统清洗液
4.仪器和校准
使用仪器:
瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys2010/E170/E411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准:
每批S100试剂盒必须用新鲜试剂和S100Cal1,Cal2定标一次。
另外,以下情况需要再次定标:
Elecsys2010:
·一个月(同一批号试剂)
·7天(放置仪器上的同一试剂盒)
各种分析仪均适用的情况:
根据要求进行标定:
如质控结果超出范围时;根据规定进行多次标定。
5.操作步骤(以E170为例)
5.1校准操作步骤:
在编缉各项目的参数时,已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。
因此在对各项目进行定标时,只需在定标菜单Calibration中进行即可。
3.2进入Calibration—Status菜单,用鼠标选择需定标的项目,再根据需要点单点定标(BLANK键)或两点定标(TWOPOINT键)、跨距定标(SPAN键)、多点定标(FULL键),再选择其它项目进行相应选择,最后点SAVE,将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置,点Start,再点Start,仪器开始定标。
在Calibration—Status菜单中看定标结果,点CalibrationResult键看定标结果,点ReactionMonitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2样本检测程序:
单个样本输入,在主菜单下选择Workplace-Testslection,在SequenceNo栏输入标本号,然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目,点SAVE键,样本号自动累加。
批量常规标本的输入,在主菜单下选择Workplace-Testslection,在SequenceNo栏输入起始标本号,然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目,点REPEAT,输入该批标本的最后一个标本号,点OK即可。
进样分析,将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好,放入进样盘内,按START键,输入该批上机标本的起始标本号,再点START键,仪器自动开始推架检测标本。
6.质量控制
用ElecsysS100质控品1和2(PreciControl)。
质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。
质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。
检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
7.计算方法
仪器会自动根据Cal1和Cal2的测定值计算Cut-off值。
每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式(标)报告。
本信号/Cutoff8.参考范围
健康成人和恶性黑色素瘤患者
检测结果如下:
ElecsysS100来自健康成人和不同期别的恶性黑色素瘤随访患者的标本,用.
医院XXXXXX检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411
MY020LAB文件编号:
-OP-3页页,共第3版本:
A/02008-02-01生效日期:
健康成人范围的样本量b)>95%没有疾病,不患肿瘤c)可能为颅脑损伤的成年患者测定。
外伤后小时内进行ElecsysS100GCS表现为轻微颅脑外伤(格拉斯哥昏迷计分:
13-15分)和至少有一种症状的患者3S100ElecsysCCT作为参照,用(头颅计算机线断层摄影术)检查。
以健康个体的X95%值作为分界点,6小时内必须进行CCT测定可获得如下结果:
PPV8.8-13.3%,NPV99.1-100%,32.9%(95%可信区间:
,99.7%,PPV(阳性预测值)11%灵敏度98.8%,和特异度NPV(阴性预测值)30-35.9%)。
灵敏度96.5-100%,特异度
g/L
μd)0.098每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性,必要时根据具体情况制订自己的参考范围。
9.分析性能
分析仪的代表性试验数据如下。
各实验室由于具体情况不同,所得出的数据可能会稍有差异。
精密度
根据NCCLS(全国临床实验室规范化操作委员会)制订的改良试验计划(EP5-A),应用Elecsys试剂盒、人血液标本和质控液验证ElecsysS100试剂盒检测重复性。
每日测6次共10日(n=60);在E170分析仪上的组间精密度(n=21),得结果如下:
分析灵敏度(低浓度检测限制)
<0.005μg/L.
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411
OP-MY020LAB文件编号:
-4第页页,共4版本:
A/02008-02-01生效日期:
(标准差)(系统定标,定标2SD检测限制定义为可以区别零浓度定标液的最低可测浓度值,计算公式为定标液最小浓度+)。
2SD,组间精密度范围之内,标本数21液最小浓度+方法比较
将ElecsysS100现在的试剂盒ElecsysS100(产品目录号03051986(y))与LiamatSangtec100(x1)和LiaisonSangtec100
(x2)
进行比较,得到以下线性关系(pmol/L)。
标本数:
934
标本的浓度范围为0.00and9.87μg/L。
标本数:
379
标本的浓度范围为0.01and2.08μg/L。
分析特异性
所使用的单克隆抗体没有交叉反应<1%。
功能灵敏度
<0.02ug/l
功能灵敏度是指可以重复检测到的最低分析浓度,并且批内变异系数为20%。
10.干扰因素
测定结果不受黄疸(胆红素<428μmol/L,或<25mg/dl)、溶血(血红蛋白<0.621mmol/L,或<1.0g/dl)、高脂血〔症〕(脂肪乳剂<1500mg/dl)和生物素(<205nmol/ml,或<50ng/mL)的影响。
标准:
回收率90-110%。
对于因某些疾病需要而接受高剂量生物素治疗的患者(>5mg/天),必须在末次生物素治疗8小时后采集标本。
浓度达1000IU/mL的类风湿因子对检测没有干扰。
当S100浓度达10ug/ml时,未出现高剂量钩镰效应。
体外对18种常用药物进行试验未发现药物对本测定结果有影响。
由于本试剂盒使用单克隆鼠抗体,所以因治疗或者诊断需要而接受单克隆鼠抗体的患者,其标本检测结果可能有误。
极少数标本中可出现大量链亲和素和抗钌抗体而影响测定结果。
ElecsysS100附带有试剂添加剂以减少以上不良影响。
所以,在诊断中必须结合患者病史、各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。
11.临床意义
S100是一种小分子蛋白质二聚体,分子量为10.5kD,是钙离子结合蛋白多基因家族中的一员1,2。
S100A1(α)和S100B(β)是首先发现的成员,最初由Moore作为一种不能分离的混合物从
牛脑中分离出来3,后来因其能溶于100%饱和硫酸铵溶液中,所以命名为S100。
同时,至少还发现了21种不同成员4。
S100A1和S100B主要在中枢神经系统细胞表达,特别是星型胶质细胞,但是在黑色素细胞和其他组织也有一定程度的表达。
。
1,5,6的异型或同型二聚体组成的蛋白质,具有多种调节细胞内和细胞外活动的功能B1和A1这种由.
医院XXXXXX检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411
文件编号:
LAB-OP-MY0205页,共第页5版本:
A/0生效日期:
2008-02-01
恶性黑色素瘤患者,特别是II、III和IV期患者,血清S100浓度升高情况可能预示其疾病进展情况。
一系列的浓度测定对成功跟踪和监测患者治疗非常有用7,8,9,10,11,12,13。
另外,大脑损伤后,CSF(脑脊液)中S100浓度升高,并且释放到周围血液中。
血清S100浓度增加提示血脑屏障被破坏,并且这种升高可能出现在神经损害之前14。
多种不同原因,如脑外伤15,16,17,18,19,10和中风21,22,23引起的大脑损伤患者均可检测到S100。
12.参考文献
1.DonatoR.S100:
amultigenicfamilyofcalcium-modulatedproteinsoftheEF-handtypewithintacellularand
extracellularfunctionalroles.IntJBiochemCellBiol2001;33:
637-668.
2.ZimmerDB,CornwallEH,LandarA,SongW.TheS100proteinfamily:
history,function,andexpression.BrainRes
Bull1995;4:
417-429.
3.MooreBW.Asolubleproteincharacteristicofthenervoussystem.BiochemBiophysResComm1965;19:
739-744.
4.DonatoR.IntracellularandExtracellularRolesofS100Proteins.MicroscopyResearchandTechnique
2003;60:
540-551.
5.HeizmannCW,FritzG,Sch?
ferBW.S100Proteins:
Structure,FunctionandPathology.FrontiersinBioscience
2002;7:
1356-1368.
6.ZimmerDB,SadoskyPW,WeberDJ.MolecularMechanismsofS100-TargetProteinInteractions.
MicroscopyResearchandTechnique2003;60:
552-559.
7.GuoHB,Stofffel-WagnerB,BierwirthT,MezgerJ,KlingmüllerD.ClinicalsignificanceofserumS100inmetastatic
malignantmelanoma.EurJCancer1995;31A:
924-928.
8.MohammedMQ,AbrahaHD,SherwoodRA,MacRaeK,RetsasS.SerumS100βproteinasamarkerofdiseaseactivity
inpatientswithmalignantmelanoma.MedOncol2001;18:
109-120.
9.Kr?
hnG,KaskelP,SanderS,Waizenh?
ferPJ,WortmannS,LeiterU,PeterRU.S100βisamorereliabletumor
markerinperipheralbloodforpatientswithnewlyoccurredmelanomametastasescomparedwithMIA,albuminand
lactate-dehydrogenase.CancerResearch2001;21:
1311-1316.
10.vonSchoultzE,HanssonLO,DjureenE,HanssonJ,K?
rnellR,NilssonB,StigbrandT,RingborgU.Prognostic
valueofserumanalysisS-100βproteininmalignantmelanoma.MelanomaResearch1996;6:
133-137.
11.AbrahaHD,FullerLC,VivierAW,HigginsEM,SherwoodRA.SerumS-100protein:
apotentiallyusefulprognostic
markerincutaneousmelanoma.BrJDermatol1997;137:
381-385.
12.GarbeC,LeiterU,EllwangerU,BlahetaHJ,MeierF,RassnerG,SchittekB.DiagnosticValueandPrognostic
SignificanceofProteinS-100β,Melanoma-InhibitoryActivity,andTyrosinase/MART-1Reverse
Transcription-PolymeraseChainReactionintheFollow-UpofHigh-RiskMelanomaPatients.Cancer
2003;97(7);1737-1745.
13.HauschildA,EngelG,BrennerW,Gl?
serR,M?
nigR,HenzeE,ChristophersE.PredictivevalueofserumS100B
formonitoringpatientswithmetastaticmelanomaduringchemotherapyand/orimmunotherapy.BritishJournalof
Dermatology1999;140:
1065-1071.
14.deKruijkJR,LeffersP,MenheerePPCA,MeerhoffS,TwijnstraA.S-100Bandneuron-specificenolaseinserum
ofmildtraumaticbraininjurypatients–acomparisonwithhealthycontrols.ActaNeurolScand2001;103:
175-179.
15.HerrmannM,CurioN,JostS,GrubichC,EbertAD,ForkML,SynowitzH.Releaseofbiochemicalmarkersofdamage
toneuronalandglialbraintissueisassociatedwithshortandlongtermneuropsychologicaloutcomeaftertraumatic
braininjury.JNeurolNeurosurgPsychiatry2001;70:
95-100.
XXXXXX医院检验科免疫室分析项目作业指导书
ElecsysE170/E411
文件编号:
LAB-OP-MY0206页,共第页6版本:
A/0生效日期:
2008-02-01
16.IngebrigtsenT,RomnerB,Marup-JensenS,DonsM,LundqvistC,BellnerJ,AllingC,B?
rgesenSE.Theclinical
valueofserumS-100proteinmeasurementsinminorheadinjury:
aScandinavianmulticentrestudy.BrainInjury
2000;14:
1047-1055.
17.BiberthalerP,MussackT,WiedemannE,KanzKG,KoelschM,Gippner-SteppertC,JochumM.EvaluationofS-100b
asaspecificmarkerforneuronaldamageduetominorheadtrauma.WorldJSurg2001;25:
93-97.
18.HerrmannM,JostS,KutzS,EbertAD,KratzT,WunderlichMT,SynowitzH.Temporalprofileofreleaseof
neurobiochemicalmarkersofbraindamageaftertraumaticbraininjuryisassociatedwithintracranialpathology
asdemonstratedincranialcomputerizedtomography.JNeurotrauma2000;17:
113-121.
19.TownendWJ,GuyMJ,MartinB,YatesDW.Headinjuryoutcomepredictionintheemergencydepartment:
arolefor
S-100B?
JNeurolNeurosurgPsychiatry2002;73:
542-546.
20.AbrahaHD,ButterworthRJ,BathPMW,WassifWS,GarthwaiteJ,SherwoodRA.SerumS-100protein,relationship
toclinicaloutcomeinacutestroke.AnnClinBiochem1997;34:
366-370.
21.FassbenderK,SchmidtR,SchreinerA,FatarM,MühlhauserF,DaffertshoferM,HennericiM.Leakageof
brain-originatedproteinsinperipheralblood:
temporalprofileanddiagnosticvalueinearlyischemicstroke.J
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- S100 蛋白 作业 指导书