实验室常用的细菌作用及其选择.doc
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第一篇:
JM109,DH5a,BL21这些感受态有何区别
1:
DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:
F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:
BL21(DE3)菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:
F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
3:
BL21(DE3)pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:
F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr
4:
JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:
recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]
5:
TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:
F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr)endA1,nupG
6:
HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:
supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
第二篇:
JM110或SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.
部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI,BclI等。
而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coliJM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。
E.coliJM110
要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110
如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.
第三篇:
各种感受态细胞的区别用途特征
Xl1-Blue菌株
基因型:
endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。
特点:
具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:
分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3)菌株
基因型:
F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。
特点:
该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。
T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:
蛋白质表达。
BL21(DE3)ply菌株
基因型:
F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。
特点:
该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。
此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基
因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。
适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:
蛋白质表达
DH5α菌株
基因型:
F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–
特点:
一种常用于质粒克隆的菌株。
其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。
recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
用途:
分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
JM109菌株
基因型:
endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAe14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。
特点:
部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
用途:
分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
第四篇:
E.coliElectro-Cells
E.coliElectro-CellJM109
制品名TaKaRaCode包装量价格(人民币元)
E.coliElectro-CellJM109D90221Set(50μl×10支)300
■Genotype
E.coliJM109
recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,
Δ(lac-proA/F'[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]
■细胞浓度
1~2×1010Bacteria/ml
■保存
-80℃
■制品说明
用高电压脉冲电流瞬间击穿大肠杆菌,从而导致DNA转入大肠杆菌内的转化方法称为电穿孔法。
电穿孔法是各种转化方法中效率最佳的方法之一,比Ca2+处理的感受态细胞的转化效率高,在转化少量DNA时,特别能发挥其特有的威力。
TaKaRa使用独自开发的菌体培养法,制作出了效果极佳的E.coliElectro-CellJM109。
■细胞种类
α-互补性选择宿主E.coliJM109
E.coliJM109在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZα多肽和JM109F'编码的lacZΔM15的结合,显示β-半乳糖苷酶活性(α-互补性)。
利用这一特性,可以很容易鉴别重组体菌株。
因为具有F'质粒,除可用于制作基因库、进行亚克隆等之外,也可作为M13载体DNA的宿主,调制单链DNA。
■质量标准
使用10pg的质粒DNA进行转化时:
50μlE.coliJM109Electro-Cell/10pgpUC19plasmid转化时产生的菌落数
>1×109transformants/1μgpUC19plasmid
F'质粒的稳定性检测
对E.coliJM109使用pUC19DNA进行电穿孔法转化后,在含有100μg/ml的Ampicillin、0.2mM的IPTG,40μg/ml的X-Gal的L-琼脂平板培养基上,产生的白色菌落在1%以下。
50μl的E.coliJM109Electro-Cell在含有100μg/ml的AmpicillinL-琼脂平板培养基上不产生菌落。
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BL21(DE3)pLysS细菌菌株
BL21(DE3)pLysS细菌菌株可以表达T7控制并核糖体结合位点的高效蛋白表达。
BL21(DE3)pLysS对λDE3
(1)是溶源性的。
λDE3含有T7噬菌体基因I,编码的T7RNA聚合酶受lacUV5启动子的控制。
BL21(DE3)pLysS含有pLysS质粒,他携带编码T7溶菌酶基因。
在T7启动子控制下,T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由IPTG诱导的表达水平。
包装:
P9811500μl
第五篇:
JM109,DH5a,BL21感受态有何区别
1:
DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:
F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:
BL21(DE3)菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:
F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
3:
BL21(DE3)pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:
F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr
4:
JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:
recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]
5:
TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:
F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rp
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