基因工程.docx
- 文档编号:3200058
- 上传时间:2022-11-20
- 格式:DOCX
- 页数:11
- 大小:22.01KB
基因工程.docx
《基因工程.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《基因工程.docx(11页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
基因工程
课程重点与难点
第一章基因工程概述
重点知识:
基因工程的概念;基因工程的诞生;基因工程研究的意义。
难点知识:
基因工程的概念;基因克隆的策略
第二章分子克隆工具酶
重点知识:
限制-修饰系统;限制性内切酶类型、作用特点和影响酶活性因素;星星活性;甲基化酶类型;DNA聚合酶类型和特点;连接酶的类型和特点。
分子克隆工具酶的功能和应用。
难点知识:
限制修饰系统的发现和意义;限制性内切酶产生的末端;星星活性;酶切反应条件及其控制;甲基化酶类型;各种DNA聚合酶的作用特点;连接酶的类型和应用。
第三章分子克隆载体
重点知识:
质粒基本特性;标记基因;质粒载体的基本要素和类型;l噬菌体的分子生物学;l噬菌体载体的克隆原理及步骤;M13噬菌体的生物学;M13噬菌体载体组成;噬菌粒的组成和特征。
难点知识:
标记基因;质粒载体的基本要素;a-互补作用;l噬菌体的分子生物学;l噬菌体载体的克隆原理及步骤;M13噬菌体在感染细胞中的复制;噬菌粒组成特点。
第四章人工染色体载体
重点知识:
黏粒载体的结构特征和工作原理;YAC载体的复制元件和标记基因及工作原理;细菌人工染色体载体的结构和工作原理;P1噬菌体载体和P1人工染色体载体的组成。
难点知识:
黏粒载体、YAC载体、细菌人工染色体载体的工作原理;P1噬菌体的分子遗传特征。
第五章表达载体
重点知识:
大肠杆菌表达载体的结构;利用T7噬菌体启动子的表达载体;表达融合蛋白的表达载体;表达产物的纯化;大肠杆菌/革兰氏阳性细菌穿梭载体;大肠杆菌/酵母菌穿梭载体;基因插入、基因敲除概念;随机插入突变载体。
难点知识:
大肠杆菌中T7启动子表达调控;穿梭载体概念;基因插入、基因敲除概念。
第六章基因操作中大分子的分离和分析
重点知识:
碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA;电泳原理;DNA片段的纯化方法;RNA提取和纯化;分子杂交类型和原理;RNA作图和端点分析原理;重组DNA分子导入大肠杆菌的方法。
难点知识:
碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理;分子杂交类型和原理;RNA作图和端点分析原理;重组DNA分子导入大肠杆菌的方法。
第七章基因芯片技术
重点知识:
生物芯片的定义;生物芯片分析流程;生物芯片分类;基因芯片的制作。
难点知识:
生物芯片分析流程;基因芯片的制作。
第八章PCR技术及其应用
重点知识:
PCR技术原理;PCR产物的克隆;PCR扩增未知DNA片段;与反转录相关的PCR;PCR产生DNA指纹;实时定量PCR。
难点知识:
PCR技术原理;A/T克隆法;反向PCR;热不对称交错PCR;5’-RACE和3’-RACE;实时定量PCR原理。
第九章DNA序列分析
重点知识:
Maxam-Gilbert化学降解法;Sanger双脱氧链终止法;DNA片段序列测定的策略。
难点知识:
Sanger双脱氧链终止法原理和步骤
第十章DNA诱变
重点知识:
随机诱变;DNA体外重组;寡核苷酸介导的定点诱变;嵌套缺失。
难点知识:
错误掺入诱变、盒式诱变;DNA洗牌法和交错延伸重组;寡核苷酸介导的定点诱变。
第十一章DNA文库的构建和目的基因的筛选
重点知识:
基因组DNA文库的构建;cDNA文库的构建;基因克隆的筛选策略。
难点知识:
文库的代表性和随机性;基因组DNA文库的构建流程;cDNA文库的构建。
第十二章基因组研究技术
重点知识:
基因组遗传图谱的构建;基因组物理图谱的构建;基因组测序;基因组功能分析;基因组工程。
难点知识:
基因组图谱的类型和构建
第十三章植物基因工程
重点知识:
植物基因工程方法;转化子细胞的筛选;转化体的鉴定与证实。
难点知识:
原生质体介导法和根癌农杆菌介导法;根癌农杆菌Ti质粒介导的基因转化的分子机理;选择基因和报告基因。
第十四章动物基因工程
重点知识:
动物转基因技术;转基因动物制备。
难点知识:
动物基因工程载体;基因敲除和基因敲入;基因转移技术;转基因动物的制备和鉴定。
第十五章酵母基因工程
重点知识:
常用的酵母表达系统。
难点知识:
不同类型的酵母表达系统。
第十六章细菌基因工程
重点知识:
细菌基因工程的表达系统。
难点知识:
表达系统构建原则;外源基因表达方式;枯草芽孢杆菌的表达载体。
第十七章病毒基因工程※
重点知识:
病毒载体;病毒与基因工程。
难点知识:
动物病毒载体类型;基因工程病毒疫苗。
第十八章医药基因工程※
重点知识:
基因工程蛋白和多肽药物;基因工程抗体;核酸类药物。
难点知识:
抗体的结构特点;反义RNA;RNA干扰;基因治疗
综合测试题一
一、写出下列英文或英文缩写符号的中文名称(每个2分,共20分):
1.RNase 2.restrictionendonuclease3.Plasmid
4.SDsequence5.MCS6.IPTG7.YAC
8.ori 9.promotor10.Klenowfragment
二、比较下列各组概念(每题5分,共20分):
1.宿主细胞的限制和修饰作用 2. pBR322和pUC载体
3. 核酸水解酶和限制性内切酶 4.DNA文库和cDNA文库
三、判断题(每题2分,共20分):
1.Ⅱ型限制性核酸内切酶识别与切割的序列有严格特异性。
2.大肠杆菌DNA连接酶既可以连接黏性末端DNA,也可以连接平齐末端DNA。
3.Klenow片段来自于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的N末端,具有聚合酶活性和3→5外切酶活性。
4.逆转录酶是依赖于DNA的DNA聚合酶。
5.-互补筛选法中,含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成蓝色菌落。
6.当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。
7.Southernblotting是DNA与DNA杂交的技术。
8.将外源基因导入培养的哺动物细胞的常用方法中不包括氯化钙法。
9.Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要ddNTP。
10.禽流感(avianinfluenza)是由A型流感病毒引起的一种烈性传染病。
该病毒的核酸类型为负链单股RNA病毒。
四、问答题:
(每题8分,共40分):
1.分离纯化核酸总的原则是什么?
2.基因工程载体应具备哪些特点?
3.简述分子克隆的基本流程?
4.什么是重组子筛选?
主要有哪些方法?
5.利用原核细胞表达真核基因是比较困难的,主要表现在哪些方面?
综合测试题二
一、写出下列英文或英文缩写符号的中文名称(每个2分,共20分):
1.Reversetranscriptase
2.transferredDNA(T-DNA)
3.TiPlasmid
4.restrictionendonuclease
5.MultiplecloningSite
6.IPTG
7.Plasmid
8.HAT
9.SDsequence
10.YAC
二、解释概念(每题4分,共20分):
1.双元载体系统
2. pUC载体
3. 噬菌体的溶菌途径
4.cDNA文库
5.SouthernBlotting
三、判断题(每题1分,共10分):
1.I型限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。
2.大肠杆菌DNA连接酶既可以连接黏性末端DNA,也可以连接平齐末端DNA。
3.在土壤农杆菌中仅存在Ti质粒。
4.逆转录酶是依赖于DNA的DNA聚合酶。
5.-互补筛选法中,含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成蓝色菌落。
6.在T链复合物中,T链含有核定位信号。
7.细菌质粒DNA提取后,电泳检测只可能出现一条DNA条带。
8.在正常的非转基因植物中报告基因如gus等编码的酶及其所催化的反应是存在的。
9.Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要ddNTP。
10.当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。
四、简答题(每题6分,共30分):
1.分离纯化核酸总的原则是什么?
2.基因工程载体应具备哪些特点?
3.简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。
4.画出生产转基因动物的步骤示意图。
5.利用原核细胞表达真核基因是比较困难的,主要表现在哪些方面?
五、论述题(每题10分,共20分):
1.论述分子克隆技术流程?
在课程实验中,采用什么克隆载体?
其特点是什么?
2.什么是PCR?
该技术的基本原理是什么?
举出2种PCR技术?
综合测试题三
一、写出下列英文中文名称并解释(每个2分,共20分):
1.bluntend
2.Deoxyribonuclease
3.Plasmid
4.SDsequence
5.MCS
6.Vactor
7.RFLP
8.AFLP
9.DDRT-PCR
10.Klenowfragment
二、比较下列各组概念(每题4分,共20分):
1.宿主细胞的限制和修饰作用
2. pBR322和pUC载体
3. 核酸水解酶和限制性内切酶
4.DNA文库和cDNA文库
5.SOUTHERNBIOTTING和WESTERNBIOTTING
三、判断并改错(每题1分,共10分):
1.所有限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。
2.大肠杆菌DNA连接酶既可以连接黏性末端DNA,也可以连接平齐末端DNA。
3.Klenow片段来自于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的N末端,具有聚合酶活性和3→5外切酶活性。
4.逆转录酶是依赖于DNA的DNA聚合酶。
5.-互补筛选法中,含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成蓝色菌落。
6.当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。
7.Southernblotting是DNA与DNA杂交的技术。
8.将外源基因导入培养的哺动物细胞的常用方法中不包括氯化钙法。
9.Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要ddNTP。
10.禽流感(avianinfluenza)是由A型流感病毒引起的一种烈性传染病。
该病毒的核酸类型为负链单股RNA病毒。
四、问答题:
(每题5分,共30分):
1.分离纯化核糖核酸(RNA)应注意什么?
2.简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。
3.简述表达载体构建的一般原则。
4.简述建立植物转化受体系统的主要考虑因素。
5.利用原核细胞表达真核基因是比较困难的,主要表现在哪些方面?
6.简述基因导入动物细胞的方法。
五、论述题(每题10分,共20分)
1.画出生产转基因动物的步骤示意图。
2.什么是PCR?
该技术的基本原理是什么?
举出2种PCR技术?
一、比较下列各组概念(每小题5分,共20分。
)
1.PCR和RT-PCR
2.噬菌粒载体和黏粒载体
3.琼脂糖电泳和聚丙烯凝胶电泳
4.基因打靶和同源重组
二、判断题(每小题1分,共10分。
)
1.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变,是导致一些酶的星活性的主要原因之一,防止的办法是在酶切反应体系中,将甘油的浓度控制在5%以下。
【 】
2.T4DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都需要ATP和NAD+作为辅助因子。
【 】
3.用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用CIP将它们都脱磷酸。
【 】
4.有a、b、c三个质粒,因为a和b能够共存于一个细胞,a和c也可共存于同一个细胞,所以
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基因工程