超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究_精品文档.pdf
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超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究_精品文档.pdf
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1360中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月柱即可重复使用。
25结果及得率:
银杏叶提取物525g,银杏萜内酯615Vo(白果内酯344,银杏内酯C209,银杏内酯A05,银杏内酯B012),采用乙醇水梯度洗脱,大孔吸附树脂柱连续分离银杏叶提取物中萜内酯组份,真空浓缩后结晶,粗晶用乙醇水溶液重结晶,其4种萜内酯单体纯度和得率见表1。
表1产品纯度和得率TableIPurityandyieldofproducts采用本工艺将总萜内酯质量分数615的525g原料经纯化可得纯度为95的白果内酯1265g,银杏内酯C818g,银杏内酯A163g,银杏内酯B043g,总萜内酯为2289g。
总得率为426,平均提取率为6927。
晶体及原料采用HPLC法测定,与对照品的HPLC图谱相同,没有干扰峰。
3讨论本法只采用一次柱分离结晶纯化即可连续制得纯度达95以上的白果内酯,银杏内酯A、B、C单体。
本工艺操作中只采用无毒试剂水和乙醇,对产品药用提供了安全保障。
由于采用的是可重复使用的大孔树脂,使生产成本降低至约5万元kg。
本工艺简便,采用有机试剂少。
因此适用于中试及工业生产,为大规模开发银杏萜内酯药品奠定了良好基础。
References:
1LiZLExploitationandExertionofGinkgoLeaves(银杏开发与利用)MShangshi:
ShanghaiScientificandTechnicalPublishers,19962ZhangDQ,HeZFResearchintheChemalIngredientsinLeavesofGinkgobiloba(银杏叶资源化学研究)MBeijing:
ChinaLightIndustryPress1999超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究张虹。
,柳正良,王洪泉。
,杨莺。
(1同济大学附属同济医院,上海200065;2第二军医大学药学院,上海200433;3利群医院,上海200333)丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge的干燥根及根茎,味苦,性微寒,祛瘀止痛、活血通经、清心除烦。
丹参主要含有结晶性菲醌类化合物,如丹参酮I(tanshinoneI)、丹参酮A、B(tanshinoneA、B)、隐丹参酮(cryptotanshinone)、二氢丹参酮(dihydrotanshinone);水溶性有效成分为丹参素(danshensu)及酚酸类成分原儿茶醛(protocatechualdehyde)、咖啡酸(caffeicacid)、迷迭酸甲酯(methylrosmarinate)等,以及棕罗汉松酚(Ierrugino1)等其他成分。
脂溶性有效成分丹参酮经研究表明具有抑制血栓形成等药理作用;水溶性有效成分丹参素能抗心肌缺血并对冠状动脉有较好作用,原儿茶醛能显著增加冠状动脉流量,对抗ADP诱导的血小板积聚,并有广谱抗菌作用。
本实验对脂溶性有效成分以丹参酮为指标,水溶性有效成分以丹参素、原儿茶醛为指标对丹参进行提取研究,并作为制剂的一组质控指标。
1仪器与材料高效液相色谱仪:
日本岛津LC一9A,配有SPD6A紫外可变波长检测器;CR一4A数据处理器;超临界萃取设备:
SFX。
一10型超临界流体萃取器(美国Isco公司);Branson1200型超声波清洗器。
丹参酮A(批号:
0766200011)、原儿茶醛(批号:
08109402)购自中国药品生物制品检定所;丹参素(纯度大于99)购自复旦大学药学院天然药物化学教研室。
丹参药材购于上海市药材公司,经第二军医大学宓鹤鸣教授鉴定。
本品经自然晾干后,60C干燥12h,粉碎,过三号筛。
甲醇为HPLC或AR纯,蒸馏水为双蒸水(自制)。
2有效成分的测定21脂溶性成分丹参酮的测定211色谱条件:
色谱柱:
DiamonsilTMCl8柱(250mm46mm,5m)(迪马公司);流动相:
甲醇一水收稿日期:
20040312作者简介:
张虹(1967一),女,浙江海宁人,副主任药师,1990年毕业于上海医科大学药学系,获理学学士学位,2001年毕业于第二军医大学药物分析专业,获医学硕士学位,主要从事药物分析及临床药学研究,发表论文1O余篇。
Tel:
(021)560510803203Email:
zkzhuyahoocomcn维普资讯http:
/中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月1361(85:
15);体积流量:
10mLmin;灵敏度:
008AUFS;检测波长:
270am;柱温:
35;进样量:
1OttL。
丹参酮1I保留时间约为125min,其他成分不影响。
212线性关系考察:
精密称取丹参酮1I对照品10mg,置50mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
用流动相稀释成1248gmL的系列溶液,进样1OL,以峰面积与质量浓度进行线性回归,得标准曲线方程:
y一433657X+0690,r一099998。
丹参酮1I在1248gmL时峰面积与其质量浓度具有良好的线性关系。
213供试品溶液的制备:
精密称取经真空干燥后的萃取物01g,加适量甲醇,超声使溶解,用甲醇配制成适当质量浓度,取少量溶液用微孔滤膜(045m)滤过,弃去初滤液,取续滤液01mL于50mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
22水溶性成分丹参素、原儿茶醛的含量测定221色谱条件:
色谱柱:
DiamonsilTMC18(250mm46mm,5m)(迪马公司);流动相:
甲醇一05醋酸水溶液(25:
75);体积流量:
10mErain;灵敏度:
008AUFS;检测波长:
280am;柱温:
35;进样量:
1OL。
丹参素和原儿茶醛的保留时间分别约为65、102min。
222线性关系的考察:
精密称取丹参素、原儿茶醛对照品各5mg,分别置50mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用流动相稀释成一定质量浓度的系列溶液,进样1OL,以峰面积与质量浓度进行线性回归,得标准曲线方程及线性范围,丹参素:
Y一86746X一33,r一09999,线性范围:
5O250gmL;原儿茶醛:
Y一623400X+9259,r一09999,线性范围:
25200gmL。
223供试品溶液的制备:
取丹参SFE提取后的残渣水煎液、SFE提取物水煎液或丹参药材的水煎液,浓缩,甲醇定容于100mL量瓶中。
精密吸取20mL样品液,再加甲醇20mL,摇匀,超声1Omin,冷却,用045m过滤膜滤过,取滤液,即得。
3提取工艺的考察31脂溶性成分的提取:
精密称取样品粉末(过60目筛)300g,放入萃取罐中,按表1设计因素水平,选L。
(3)正交设计表对丹参中脂溶性成分(以丹参酮I为测定指标)进行超临界萃取,收集萃取液,滤过,浓缩,浓缩后所得物再经真空干燥,即得萃取物,测定结果见表2。
经统计学分析,结果表明:
对丹参酮I影响为表1因素水平表Table1Factorsandlevels表2L,(3)正交试验结果Table2ResultsofL9(3)orthogonaltest试验号ABCD丹参酮IA(g100g)BCAD。
提取丹参酮1I的最佳条件是:
A。
BCD。
,即:
夹带剂为100g药材用35mL的乙醇,于55温度、30MPa压力下萃取25h。
32水溶性成分的提取:
称取经上述超临界萃取后的丹参残渣粉末5g,按表3,选用L。
(3)正交试验表对丹参素SFE残渣中的水溶性成分(以丹参素、原儿茶醛为测定指标)进行水煎煮提取。
提取液按上述丹参素、原儿茶醛的测定方法进行测定,测定结果见表4。
表3因素水平表Table3Factorsandlevels由统计学分析结果表明,对丹参素、原儿茶醛的影响均为因素ACB。
提取丹参素和原儿茶醛的最佳条件是A。
BC。
,即:
以丹参残渣8倍量的水煎煮3次,每次15h。
33最佳工艺的验证试验:
本实验通过对丹参中有效成分提取方法的摸索,发现SFE1特别适合脂溶性有效成分,如丹参酮II的提取,丹参酮的得率高,杂质少;但SFE不适合水溶性有效成分如丹参素、原儿茶醛的提取,经检测,丹参经SFE所得提加O“盯u3鸲uH4弘聃M2123456789KKKR维普资讯http:
/1362中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第35卷第12期2004年12月取物中未检测出水溶性成分丹参素、原儿茶醛,两者存在于丹参的SFE残渣中,结果见表5。
可见丹参SFE残渣中的丹参素、原儿茶醛较丹参药材中的浓度高,其原因有待于进一步研究。
表4L,(3)正交试验结果Table4ResultsofL9(3)ohogonaltest表5丹参的有效成分的测定(,l一3)Table5Effectivecompone
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