RT-PCR操作步骤.pdf

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RT-PCR步骤步骤一、总一、总RNA提取提取1.取200mg组织，放到1.5mlEP管中，加入1mlTrizol剪碎。

2.震荡30s。

3.加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。

4.12000g，4离心，15min。

5.吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。

6.加等体积异丙醇，-20，30min。

7.12000g，4离心，10min。

在管底部可见微量RNA沉淀8.弃上清，加75%乙醇1ml，振荡。

9.7500g，4离心，10min。

10.弃上清，用滤纸小心吸取残留液体，室温干燥5-10min。

11.沉淀溶于20lDEPC水，取1l加入79lDEPC水测OD260/OD28012.计算浓度与纯度，-70保存。

二、逆转录合成二、逆转录合成cDNA第一链第一链反应体系如下混匀快速离心一次反应条件如下-20冰箱冻存三、三、PCR反应反应混匀快速离心一次反应条件如下PCR产物-20冰箱保存取PCR产物8l加5LoadingBuffer2l2%琼脂糖凝胶电泳120V。

100mA30min溴化乙锭染色，凝胶成象仪成象并保存结果。