高效液相色谱法在手性药物拆分中应用.docx

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高效液相色谱法在手性药物拆分中应用

高效液相色谱法在手性药物拆分中的应用

纲要：

外消旋化合物的手性分别是获取单调对映体的方法之一。

跟着人们对纯光

学药物的需求日趋增添，各样手性分别技术得以快速发展。

近几十年来，在这些

手性分别技术中，高效液相色谱法（HPLC）被公以为是一种强盛、快速、高效

的分别技术，它已成功应用于对映体药物的分别剖析和制备中。

HPLC用于敌手

性药物分别的研究已获得很大进展，而且研发了大批可应用于手性小分子和聚合

物分别的手性固定相，大大提升HPLC的手性辨别能力。

本文以HPLC的手性

药物分别为焦点，介绍了近几年高效液相色谱法手性固定相的新发展和应用。

重点词：

高效液相色谱法手性药物手性拆分

ApplicationofHighPerformanceLiquidChromatography

inChiralSeparationofPharmaceuticals

Abstract：

Resolutionofracemiccompoundsisoneofthepotentialwaysofobtainingbothenantiomers.Theincreasingdemandforenantiopuredrugshasledtothedevelopmentofavarietyofstereoselectiveseparationtechnologies.Amongseveralresolutiontechniquesinthepastfewdecades,highperformanceliquidchromatography（HPLC）iswellrecognizedasapowerful,fastandefficienttechnique,whichhasbeensuccessfullyemployedforanalysisandpreparationofenantiomersofdrugs.EnantioseparationbyHPLChassignificantlyadvanced,andalargenumberofchiralstationaryphases（CSPs）forHPLChavebeendevelopedusingbothchiralsmallmoleculesandpolymerswithchiralrecognitionabilities.ThisreviewfocusesonvariousHPLCmethodsforchiralseparationofpharmaceuticals,manynewdevelopmentsandapplicationsareintroducedinchiralstationaryphaseofHPLCinrecentyears.

Keywords：

HPLC;Chiraldrug;Chiralseparation;

-1-

引言

手性药物是指药物分子构造中引下手性中心后，获取的一对互为实物与镜像的对映异构体，是当前药物研究领域的热门之一。

这些对映异构体的理化性质基真相像，只是是旋光性有所差异。

而手性在自然界中是广泛存在的，而且人体自己就是一个手性环境，比方蛋白质、多糖、核酸和酶等多半是手性的。

绝大多半的药物由手性分子构成。

固然它们的理化性质相像，但在生物体内的药理活性、代谢过程及毒性存在明显的差异。

因为酶、受体、载体平分子都是拥有手性特色的物质,手性药物的不一样对映体在生物体内的汲取、转运、散布、代谢、排泄等

存在明显的差异，甚至能够产买卖想不到的毒性作用[1,2]。

所以，常常两种异构体中仅有一种是有效的，另一种无效甚至有害。

比方，（S）-构型多巴为治疗帕金森综合症的首选药物，而（R）-构型能造成粒状白细胞减少症，使用极度危险；有名的“反响停事件”，R-反响停拥有冷静作用，而S-反响停则对胎儿有致畸作用。

手性制药是医药行业的前沿领域，2001年诺贝尔化学奖就授与分子手性催化的主要贡献者。

不一样手性药物在体内发挥的作应不一样，一种可能是高效低度的，而另一种可能有迫害作用。

手性制药就是利用化合物的这种原理，开发出药效高、副作用小、药物的专一性高的药物。

据检查，1985-2004年上市的550个新化学合成药物中，有313个药物拥有手性中心，此中以单调异构体上市的手性药物为167个，手性药物数目呈逐年上涨趋向；2005年世界药物的销售总数

为6020亿美元，而手性药物的销售总数为2250亿美元，占全世界制药市场销售总数的37%，2010年可望超出5000亿美元[3,4]。

一般状况下获到手性化合物有以下几种方法：

天然物的提取、生物合成、外消旋体拆分、不对称合成等方法[5]。

外消旋体拆分主要有：

经典结晶法拆分、动

态动力学拆分、色谱法拆分、膜拆分法、萃取拆分法等技术[6,7]。

本文重点介绍

色谱法中HPLC在手性药物拆分中的应用。

1高效液相色谱法简介

高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）又称“高

压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分别度液相色谱”等。

HPLC是色谱法的一个

重要分支，以液体为流动相，采纳高压输液系统，将拥有不一样极性的单调溶剂或

不一样比率的混淆溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分

-2-

被分别后，进入检测器进行检测，进而实现对试样的剖析。

高效液相色谱仪可

分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分采集器”以及“数据获取与办理系统”等部分

高效液相色谱的发展始于20世纪60年月中后期。

60年月末期把高压泵和

化学键合固定相用于液相色谱就出现了

HPLC。

1970年中期此后，微办理机技术

用于液相色谱，进一步提升了仪器的自动化水平易剖析精度。

1990年此后，生

物工程和生命科学在国际和国内的快速发展，

为高效液相色谱技术提出了更多、

更新的分别、纯化、制备的课题，如人类基因组计划、蛋白质组学用

HPLC做

预分别等。

此刻该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域

中重要的分别剖析技术。

高效液相色谱法有以下特色：

（1）

高压：

流动相为液体，流经色谱柱时，受

到的阻力较大，为了能快速经过色谱柱，一定对载液加高压。

（2）

高效：

分别效

能高，可选择固定相和流动相以达到最正确分别成效。

（3）高敏捷度：

紫外检测器可达，进样量在uL数目级。

（4）应用范围广：

百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱剖析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳固性差化

合物的分别剖析，显示出优势。

（5）剖析速度快、载液流速快：

往常剖析一个样品在15-30分钟。

别的，高效液相色谱还有色谱柱可频频使用、样品不被损坏、易回收等长处，但也有弊端，与气相色谱对比各有千秋，互相增补。

在从进样到

检测器之间，除了柱子之外的任何死空间（进样器、柱接头、连结收和检测池等）中，假如流动相的流型有变化，被分别物质的任何扩散和滞留都会明显地致使色谱峰的加宽，柱效率降低。

高效液相色谱检测器的敏捷度不及气相色谱。

2高效液相色谱的手性拆分方法

高效液相色谱技术在手性药物拆分中应用最宽泛的方法之一，在手性药物质

量控制、立体选择性的药理学和毒理学研究等方面起着极其重要的作用。

HPLC

对药物对映体的分别方法主要分间接法和直接法。

2.1间接拆分法

间接法又称衍生化法，是手性化合物对映体在分别以前把手性药物对映体混

合物在预办理液中进行柱前衍生化，形成一对非对映异构体，溶质分子与固定相

和流动相之间作使劲不一样，发生差速迁徙，对映体分子实现分别。

常用的手性衍

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生化试剂主要有：

酰化试剂、胺类试剂、氯甲酸酯类和邻苯二醛等。

如BhushanR等[8]合成琥珀-（S）-萘普生酯，并用它做衍生化试剂办理DL-青霉胺对映体，采纳反相高效液相色谱法进行分别，分别成效很好。

PeccininiRG

等[9]使用C18柱，（-）-氯甲酸薄荷酯作为衍生试剂办理血浆和尿液中的卡维地洛，用氯仿提取，用荧光检测器检测，对映体分别较好。

该方法可应用于对映选择性

的药代动力学研究。

BhushanR等[10]观察了二氯-S-三嗪和一氯-S-三嗪作为氨基酸的衍生化试剂，产生的对非对映体用反相C18柱分别，流动相为乙腈和三氟乙酸水溶液的混淆物，实验结果说明，这两种试剂能够安全地用于氨基酸的手性剖析药物分别。

手性试剂衍生化法多用非手性柱即可分别，可是需要较高纯度的衍生试剂，衍生化反响要严格控制，对不一样的药物要找寻相应的衍生化试剂，且操作比较麻烦，只可在小范围内应用。

在HPLC中，直接法应用许多，手性增添剂和手性固定相种类多样。

2.2直接法

2.2.1手性流动相增添剂法

手性流动相增添剂法是在流动相中加下手性增添剂，而后利用非手性固定相

进行拆分。

常用的手性流动相增添剂有：

手性离子对、CD、冠醚、手性金属配

合物、动向手性固定相等。

最常用的增添剂为环糊精。

如郭娜等[11]采纳C18固

定相，以羟丙基-β-环糊精为手性流动相增添剂，成立了奥昔布宁对映体的高效

液相色谱拆分方法。

该法拆分奥昔布宁对映体，方法简单，敏捷度高，分别度好。

刘学斌等[12]成立拆分新药尤利沙星对映异构体的HPLC手性流动相增添剂法。

本文利用尤利沙星对映体与手性增添剂L-异亮氨酸和Cu2+间形成三元非对映

体配位化合物，在较短时间内能达到理想的分别成效。

2.2.2手性固定相法

当前以为手性固定相法是特别简单而有效的方法，应用也最为宽泛，可分别的手性药物多。

手性固定相法是将手性试剂化学键合到固定相上制成手性柱，外消旋体中的一个手性物质与手性固定相发生作用，生成不稳固的短暂复合物，而二者在固定相中的保存时间不一样，进而达到分别的目的。

CSP法发展异样快速，手性固定相的种类大概有以下几类：

手性聚合物类、刷型手性固定相、蛋白质类、

大环抗生素类、分子印迹聚合物、冠醚类、多糖类和环糊精类等[13]。

本文对几

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种常用的手性固定相做一简单介绍。

3高效液相色谱常用的手性固定相

3.1蛋白质类手性固定相

蛋白质是一类复杂的高分子聚合物，所含手性亚单位L-氨基酸拥有手性特

异性,能特异性地联合小分子，所以敌手性分子拥有很强的辨别能力。

HPLC蛋

白质手性固定相主要有:

人α1-酸性糖蛋白、牛血清白蛋白、卵黏蛋白和纤维素二

糖水解酶等[14]。

MallikR等[15]制备了鉴于硅固定化α1-酸性糖蛋白的手性固定

[16]

相，用它分别华法律和普萘洛尔对的映体异构体，分别结果优秀。

尹燕杰等

研究盐酸昂丹司琼对映体在纤维素衍生物及蛋白质固定相上的保存行为，以

ChiralCELOJ和UltronES-OVM为固定相，优化色谱条件，并测定盐酸左昂

丹司琼（R）中右