维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较.docx
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维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较
维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比拟
目前研究维生素C测定方法的有很多,如荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等,各种方法对实际样品的测定均有满意的效果。
目前国维生素C含量测定仍以光度法为主流,但近年来色谱法,特别是HPLC法上升趋势尤为明显。
一、荧光法
1.原理
样品中复原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺〔OPDA〕反响生成具有荧光的喹喔啉〔quinoxaline〕,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反响,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022g/ml。
2.适用围
本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定
二、2,6-二氯靛酚滴定法〔复原型VC,GB/T6195—1986〕
1、原理:
复原型抗坏血酸复原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被复原后红色消失。
复原型抗坏血酸复原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液复原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
本法用于测定复原型抗坏血酸,总抗坏血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定。
2、优点
简便、快速、比拟准确等,适用于许多不同类型样品的分析。
3、缺点
2,6一二氯靛酚法虽然简便,但是药品价格昂贵。
而且不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量,易受其他复原物质的干扰。
如果样品中含有色素类物质,将给滴定终点的观察造成困难。
三、分光光度法
1、原理:
维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸,pH>5,脱氢抗坏血酸环开裂,形成二酮古洛糖酸。
脱氢抗坏血酸,二酮古洛糖酸均能和2,4-二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎,脎在500nm波长有最大吸收。
根据样品溶液吸光度,由工作曲线查出VC的浓度,即可求出VC的含量。
四、2,4-二硝基苯肼法
1、原理
总抗坏血酸包括复原型、脱氢型和二酮古乐糖酸。
样品中复原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比,进展比色测定。
2、适用围
本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。
3、缺点:
易受色素影响,当待测液本身有颜色时,吸光值会受到影响,从而影响到测定结果的准确性。
且该法操作麻烦,试剂较多,耗时较长。
五、磷钼蓝分光光度法测定维生素C
1、测定原理
染料2,6-二氯靛酚的颜色反响表现两种特性,一是取决于其氧化复原状态,氧化态为深蓝色,复原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介质中呈浅红色。
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进展氧化复原滴定,染料被复原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中那么表现为浅红色,由染料用量计算样品中复原型抗坏血酸的含量。
2、优点
该方法简单、快速、准确,且回收率特别高。
六、紫外快速测定法
原理:
维生素C的2,6—二氯酚靛酚容量法,操作步骤较繁琐,而且受其它复原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。
紫外快速测定法,是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。
七、高效液相色谱法测定维生素C〔HPLC法〕
1、原理:
高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的根底上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速开展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography,HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography,HSLP)。
色谱法的别离原理是:
溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用〔吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和〕的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
高效液相色谱法按别离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法〔正相与反相〕、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。
2、优点:
高效液相色谱法是目前开展较快的一种方法,具有灵敏度高、选择性好、测定迅速、分析时间短、样品处理简单和测定结果重复性好等优点。
是测定维生素C较好的方法。
八、碘量法
1、维生素C的原理
维生素C包括氧化型、复原型和二酮古乐糖酸三种。
当用碘滴定维生素C时,所滴定的碘被维生素C复原为碘离子。
随着滴定过程中维生素C全被氧化,所滴入的碘将以碘分子形式出现。
碘分子可以使含指示剂〔淀粉〕的溶液产生蓝色,即为滴定终点。
九、电位滴定法
1.原理:
根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反响终点.
Pt为指示电极,甘汞作参比电极
E池=E+-E-+E液接电位=EI2/I-+k(常数)
随着滴定剂的参加,由于发生化学反响,待测离子浓度将不断变化;从而指示电极电位发生相应变化;导致电池电动势发生相应变化;计量点附近离子浓度发生突变;引起电位的突变,因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。
计算式:
(与碘量法一样)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%
2、优点:
解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题
用线性电位滴定法分析抗坏血酸,抗坏血酸回收率为99.80%~101.5%,相对标准偏差为0.61%;分析维生素C片中的抗坏血酸,相当标示量为98.90%~100.5%,相对标准偏差不大于0.48%,说明线性电位滴定法分析维生素C片中的抗坏血酸含量是可行的.
十、二甲苯-二氯靛酚比色法
1、适用围
测定深色样品中复原型抗坏血酸。
2、测定原理
用定量的2,6-二氯靛酚染料与试样中的维生素C进展氧化复原反响,多余的染料在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定围,吸光度与染料浓度呈线性相关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。
十一、荧光分析法
原理:
用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物。
样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中参加硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺生成荧光化合物。
这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正。
十二、库仑滴定法
1、原理
库仑滴定法属于恒电流库仑分析。
是在特定的电解液中,以电极反响产物为滴定剂〔电生滴定剂,相当于化学滴定中的标准浓液〕与待测物质定量作用,借助指示剂或电位法确定滴定终点。
根本依据--法拉第电解定律:
电解时,电极上发身化学反响的物质质量与通过电解池的电量Q成正比
即:
m=MQ/zF=MIt/zF
计算式:
Wvc=MvcQ/zFm
样式中:
F---法拉第常数〔96487C〕
Z---电极反响中转移的电子数注意:
使电解效率100%
2、优点:
1〕无需标准化的试剂溶液,免去了大量的标准物质的准备工作〔配制,标定〕;
2〕只需要一个高质量的供电器,计时器,小铂丝电极,且易于实现自动化控制;
3〕假设电流维持一个定值,可大大缩短了电解时间;
4〕电量容易控制及准确测量;方法灵敏度,准确度较高;
5〕滴定剂来自电解时的电极产物,可实现容量分析中不易实现的滴定过程,如Cu+,Br2,Cl2产生后立即与待测物反响。
3、缺点
要求电解过程没有副反响和漏电现象,即使电解电极上只进展生成滴定剂的反响,且电流的效率是100%
十三、L-抗坏血酸(维生素C)测定试剂盒〔酶学方法〕
1.适用围:
应用于食品、饮料及生物制品检测
2.比色方法
此方法用于检测水果和蔬菜〔如马铃薯〕,水果和蔬菜产品〔如西红柿酱、泡菜、果酱、果汁〕,婴儿食品,啤酒,饮料,流食,粉状和烘烤剂,肉产品,奶制品,葡萄酒,还有动物饲料,医药品〔如维生素配制、阵痛药、退烧药〕和生物样品中的L-抗坏血酸(维生素C),
3、原理
L-抗坏血酸(x-H2)+MTT+PMS—>dehydroascorbate(x)+MTT-formazan+H+X
L-抗坏血酸+½O2AAO——>dehydroascorbate+H2OX
十四、光电比浊法
原理:
在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进展氧化复原反响。
1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸复原成硒。
在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液。
当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的围,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比。
将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸。
十五、近红外漫反射光谱分析法(NIRDRSA)
1、原理:
自1965年首次应用于复杂农业样品分析后,因其具有样品处理简单、分析速度快等优点,逐渐受到分析界的重视。
此法已广泛应用于石油、纺织、农业、食品、药物分析等领域。
在药物分析中,NIRDRSA可以进展定性鉴别、定量分析等工作。
近红外谱区光的频率与有机分子中C-H,O-H,N-H等振动的合频与各级倍频的频率一致,因此通过有机物的近红外光谱可以取得分子中C-H,O-H,N-H的特征振动信息。
由于近红外光谱的谱带较宽,谱图重叠严重,不能用特征峰等简单方法分析,需要运用计算机技术与化学计量学方法。
本实验应用的是偏最小二乘法(PLS),首先利用定标集建立预测模型,然后将预测集作为未知样本,根据预测模型进展预测。
对所选择的谱区围,采用对反射吸光度的MSC(散射校正)预处理,对25个样品进展穿插验证,即选择一个样品,从校正集中除去该样品对应的光谱和浓度数据,并设光谱主成分数为1,循环迭代样品数和主成分数,计算预测残差平方和,确定所需主成分数。
假设主成分选择过小,会丧失样品信息,过大会造成过度拟合。
当主因子为2时,预测残差平方和值最小,为2.029,应选择主因子数为2,建立最正确PLS校正数学模型。
2、优点:
维生素C是一种不稳定的二烯醇化合物,其药典含量测定方法为碘量法。
我们采用近红外漫反射光谱技术直接测定维生素C含量,样品无需预处理,方法简便,结果可靠。
十六、原子吸收间接测定法
1、原理:
这是最近报导的一种Vc测定法,其原理是在酸性介质中复原型Vc可将Cu2+定量地复原为Cu+并与S—反响生成CuS沉淀,在高速离心机下有效地别离出沉淀,小心洗涤后再经浓硝酸溶解,用原子吸收法测定铜含量,即可推知样品中维生素C的含量。
2、优点:
能不受果蔬自身颜色的干扰,有一定的开展前景。
根据试验,发现此法结果偏低,还有待于进一步优化改善。
3、缺点:
该法实验仪器较昂贵,主要问题是操作过程中反响完全与否,沉淀物洗涤、离心反复屡次,极容易带来误差
十七、金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法
1、原理:
本创造公开了一种用金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法。
于5mL比色管中,依次参加0.1-2.0mL浓度为95.64μg/mL的HAuCl↓[4]溶液,0.02-0.50mL浓度为1%的柠檬酸三钠溶液,再参加0.001-2.0mL浓度为0.38mg/mL的维生素C溶液,混匀,加二次蒸
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