灭菌工艺及设备验证.ppt

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灭菌工艺及灭菌设备验证黑龙江省所姜连阁2013年1月p一般指没有活体微生物存在的药品。

在药品制剂类别中，无菌药品也可称为无菌制剂p无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料p-药品生产质量管理规范（2010年修订）附录1.无菌药品无菌药品基本概念106100

（1）10-6（10-3）p无菌保证水平（SterilityAssuranceLevel）-SAL基本概念p采用湿热灭菌法的采用湿热灭菌法的SAL不得大于不得大于10-6，即灭菌即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一后微生物存活的概率不得大于百万分之一p采用无菌生产的采用无菌生产的SAL不得大于不得大于10-3p无菌生产工艺仅限于临床必需注射给药而确实无法耐无菌生产工艺仅限于临床必需注射给药而确实无法耐受终端灭菌的产品受终端灭菌的产品,适用于粉针剂或部分小容量注射剂适用于粉针剂或部分小容量注射剂pSAL定义定义-产品经灭菌产品经灭菌/除菌后微生物残存除菌后微生物残存的概率。

的概率。

p评价灭菌（无菌）工艺的效果，该值越小，评价灭菌（无菌）工艺的效果，该值越小，表明产品中微生物存在的概率越小。

表明产品中微生物存在的概率越小。

p无菌制剂主要有：

1.注射剂2.植入剂、冲洗剂、眼内注射溶液、眼内插入剂3.供手术、伤口、角膜穿通伤用的眼用制剂，4.用于手术、创伤、烧伤或溃痒等的软膏剂、乳膏剂、气雾剂、喷雾剂5.局部用散剂、耳用制剂、鼻用制剂、凝胶剂基本概念p注射剂p药途径p特点基本概念p直接进入组织或血液p吸收快p作用迅速可靠p注射液p注射用无菌粉末p注射用浓溶液p肌肉注射p静脉注射p注射剂与其他剂型相比p无菌制剂,p质量要求高p生产过程控制严格p注射剂p-将药物制成无菌溶液、混悬液或临用前制成液体的无菌粉末供注入人体的制剂.p是临床上使用广泛的制剂。

p无菌p无热原p无不溶性微粒p高纯度无菌药品特点基本概念p微生物微粒p药物降解（氧化、水解）基本概念过滤、消毒、灭菌工艺控制（PH、温度、时间、空气）注射剂生产的基本要求注射剂生产的基本要求p合理的厂房、设备、措施设计合理的厂房、设备、措施设计p合格的人员合格的人员p合理的生产方法、步骤和控制方法合理的生产方法、步骤和控制方法p工艺验证和方法工艺验证和方法p灭菌工艺验证灭菌工艺验证生产场所生产场所设施设施设备设备重要的支持系统重要的支持系统原材料原材料包装材料包装材料产品设计产品设计分析化验规程分析化验规程仪器校准仪器校准操作人员操作人员验证过的工艺验证过的工艺p硬件p软件p人员微生物基础知识微生物基础知识真核微生物真核微生物真核微生物真核微生物原核微生物原核微生物原核微生物原核微生物病毒病毒病毒病毒无细胞结构无细胞结构无细胞结构无细胞结构p微生物-是指一类体积微小、结构简单，大多是单细胞的，必须用光学显微镜观察形态的微小生物的通称。

肉眼看不见、看不清楚的微小生物肉眼看不见、看不清楚的微小生物三型三型八大类八大类特点特点无细胞结构病毒（亚病毒和朊粒）无细胞结构，结构最简单，体积最微小，能通过细菌滤器；由单一核酸（DNA或RNA）和蛋白质外壳组成；必须寄生在活的易感细胞内生长繁殖。

原核细胞细菌放线菌螺旋体支原体衣原体立克次体仅有原始核，无核膜、无核仁，染色体仅为单个缺乏完整的细胞器。

真核细胞真菌细胞核分化程度较高，有典型的核结构（有核膜、核仁、多个染色体，由DNA和组蛋白组成）；通过有丝分裂进行繁殖；胞浆内有多种完整的细胞器。

微生物基础知识微生物基础知识p个体小，作用大。

个体小，作用大。

p分布广，种类多。

分布广，种类多。

p生长繁殖快，代谢强。

生长繁殖快，代谢强。

p易变异。

易变异。

微生物基础知识微生物基础知识微生物生物学特征微生物生物学特征20min植物叶子表面附生微生物-皮肤上含细菌-洗过后几小时之内-人的肠道内微生物-粪便中细菌-一般人每个喷嚏的飞沫-感冒患者一个喷嚏-微生物基础知识简介微生物基础知识简介约100万个/克。

约10万个/cm2恢复到原来的数量约100万亿大约占粪便干重的1/3含4500-150000个含8500万个（有传染性）微生物无处不在常见微生物微生物基础知识简介种类种类基本特点基本特点生长条件细菌0.55m，生长态时不耐热，部分能形成耐热芽孢.30-35oC,1-2天天真菌5m50m，形成芽孢随空气扩散，不耐热,但难用消毒剂消毒但难用消毒剂消毒20-25oC,3-5天天病毒小于0.1m，一般不耐热，0.22m过滤不了微生物分布特点G+G-p气源性微生物革兰氏阳性菌较多气源性微生物革兰氏阳性菌较多p可形成芽孢，难以杀灭可形成芽孢，难以杀灭p药品生产需要药品生产需要HVACp水源性则革兰氏阳性菌居多p不会生成孢子，会形成细菌内毒素p耐热性差p微生物的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠体。

p生物指示剂均为革兰氏阳性菌，灭菌用BI为非致病菌。

细菌芽胞的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母细胞孢子壁的形成生长态细胞摘自摘自http:

/www.microbe.org/microbes/spores.asp内生孢子内生孢子产生于产生于Gram+细菌细菌:

芽孢杆菌属芽孢杆菌属Bacillus梭菌属梭菌属Clostridium仅含核酸及少量萌发必需物，皮层含仅含核酸及少量萌发必需物，皮层含DPA和和Ca2+复合物，能抵御各种复合物，能抵御各种恶劣环境，可休眠上百万年。

真菌孢子因不具上述特性，而不耐热。

恶劣环境，可休眠上百万年。

真菌孢子因不具上述特性，而不耐热。

（DPA：

吡啶二羧酸：

吡啶二羧酸）p常用的灭菌方法二种：

物理灭菌法和化学灭菌法常用的灭菌方法二种：

物理灭菌法和化学灭菌法p物理灭菌技术物理灭菌技术是利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法，亦称物理灭菌技术。

该技术包括该技术包括干热灭菌、湿热灭菌干热灭菌、湿热灭菌、除菌过滤法和辐射灭菌除菌过滤法和辐射灭菌等。

p化学灭菌法系化学灭菌法系指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方法，可分为气体灭菌剂和液体灭菌剂，如环氧乙烷属于气体灭菌剂的一类。

p一旦温度超过上限，微生物细胞中主要的蛋白质、酶及核一旦温度超过上限，微生物细胞中主要的蛋白质、酶及核酸便会被永久性破坏，细胞膜被融解，从而导致细胞发生酸便会被永久性破坏，细胞膜被融解，从而导致细胞发生不可逆转的死亡。

不可逆转的死亡。

p热力学灭菌是使用最普遍并且研究最为彻底的灭菌方式。

热力学灭菌是使用最普遍并且研究最为彻底的灭菌方式。

灭菌基本原理灭菌基本原理p微生物的耐热性可按下列顺序排列微生物的耐热性可按下列顺序排列（耐热性从高到低耐热性从高到低）:

p绝大多数细菌绝大多数细菌45不能生长，不能生长，80100可被迅速可被迅速杀灭。

杀灭。

p需氧菌中的芽胞杆菌属需氧菌中的芽胞杆菌属厌氧菌中的梭状芽胞杆菌属厌氧菌中的梭状芽胞杆菌属具有较强的耐热性具有较强的耐热性p物理物理/化学条件化学条件p在较高温度下生长在较高温度下生长p有二价阳离子有二价阳离子p温度和相对湿度温度和相对湿度p在在90125之间，相对湿度在之间，相对湿度在20%50%时，时，细菌芽胞表现出最大的耐热性细菌芽胞表现出最大的耐热性p当相对湿度超出这一范围时，芽胞的耐热性将会当相对湿度超出这一范围时，芽胞的耐热性将会迅速下降。

迅速下降。

n湿度对芽胞破坏性过程起促进作用，所以湿湿度对芽胞破坏性过程起促进作用，所以湿热灭菌较干热灭菌较低温度热灭菌较干热灭菌较低温度。

影响热力灭菌的因素影响热力灭菌的因素p湿热灭菌法湿热灭菌法系指物质在灭菌器内利用高压蒸汽或其他热力学灭菌手段系指物质在灭菌器内利用高压蒸汽或其他热力学灭菌手段杀灭细菌杀灭细菌。

（一定压力下的蒸气进行灭菌，也采用过热水喷淋或浸没）。

（一定压力下的蒸气进行灭菌，也采用过热水喷淋或浸没）。

p湿热灭菌法系湿热灭菌法系导致细胞内的关键性蛋白质和酶发生热变性或凝固。

导致细胞内的关键性蛋白质和酶发生热变性或凝固。

p具有穿透力强，传导快，灭菌能力甚强具有穿透力强，传导快，灭菌能力甚强。

【水由液态变成气态时，会水由液态变成气态时，会吸收大量的热能吸收大量的热能（540cal/g），气态冷凝成液态时，会释放相等的能量，气态冷凝成液态时，会释放相等的能量（即汽化热即汽化热）】。

因此因此应尽可能使用饱和蒸汽进行灭菌应尽可能使用饱和蒸汽进行灭菌。

p湿热灭菌是一种十分经济有效的方法。

湿热灭菌是一种十分经济有效的方法。

用于用于药品、药品的溶液、玻璃药品、药品的溶液、玻璃器械、培养基、无菌衣、敷料以及其他遇高温与湿热不发生变化或损器械、培养基、无菌衣、敷料以及其他遇高温与湿热不发生变化或损坏的物质，均可选用。

坏的物质，均可选用。

p常见湿热灭菌器包括脉动真空灭菌器（或称预真空灭菌器）、蒸汽常见湿热灭菌器包括脉动真空灭菌器（或称预真空灭菌器）、蒸汽-空气混合物灭菌器和过热湿热灭菌水灭菌器等。

空气混合物灭菌器和过热湿热灭菌水灭菌器等。

湿热灭菌p干热灭菌干热灭菌是指在非饱和湿度下进行的热力学灭菌。

是指在非饱和湿度下进行的热力学灭菌。

灭菌介质通常为被灭菌品所处湿度下的热空气干热灭菌是使微生物氧化而不是蛋白质变干热灭菌是使微生物氧化而不是蛋白质变性，这就是干热灭菌之所以要求相对较高温度的原因。

性，这就是干热灭菌之所以要求相对较高温度的原因。

p利用干热灭菌工艺灭菌温度高、时间长的这一特点如如170-250，甚，甚至更高，至更高，可使干热灭菌同时具备除热原的功用。

干热是去热原最为有干热是去热原最为有效的方法之一。

干热去热原工艺进行验证，应证明该工艺能使标准内效的方法之一。

干热去热原工艺进行验证，应证明该工艺能使标准内毒素至少毒素至少下降下降3个对数单位个对数单位。

p在制药工业中，干热灭菌被广泛用于在制药工业中，干热灭菌被广泛用于不耐受高压蒸气的热稳定性物品不耐受高压蒸气的热稳定性物品的灭菌。

的灭菌。

如玻璃、金属设备、器具，不需湿气穿透的油脂类（甘油、甘油、油类、凡士林、石蜡）油类、凡士林、石蜡），耐高温的粉末化学药品（滑石粉、磺胺类药滑石粉、磺胺类药物）物）等，但不适用于橡胶、塑料及大部分药品。

p革兰阴性细菌细胞壁中的脂多糖革兰阴性细菌细胞壁中的脂多糖-内毒素。

低剂量内毒素会导致人体内毒素。

低剂量内毒素会导致人体发热反应，故而也称之为热原。

发热反应，故而也称之为热原。

干热灭菌p使用范围可分为试验室器具用，生产制剂用，生产器具用干热灭菌设备。

p按使用方式分为连续式和批量式，p批量式干热灭菌设备如干热烘箱，可用于内毒素检验用玻璃、金属器具的灭菌和除热原，以及生产设备部件、生产器具的灭菌除热原；p连续干热灭菌设备，如隧道烘箱，可用于小容量注射剂的生产。

p按加热方式可分为：

以辐射加热为主的热辐射式干热灭菌机和以对流加热为主的热层流加热式干热灭菌机等。

干热灭菌p在特定温度下，任一时间点的芽胞死亡特性仅与这个时间在特定温度下，任一时间点的芽胞死亡特性仅与这个时间点的芽胞浓度相关。

点的芽胞浓度相关。

微生物的热致死特性微生物的热致死特性Y轴及轴及X轴均为普通座标（示意）轴均为普通座标（示意）tN102030101001000半对数座标半对数座标Y轴：

微生物取对数轴：

微生物取对数X轴：

时间为轴：

时间为10进制普通座标进制普通座标tlgN102030123p无菌的影响因素可用下式表示无菌的影响因素可用下式表示:

PNSU=N0-DRPNSU指非无菌品概率指非无菌品概率N0指灭菌前产品的污染水平指灭菌前产品的污染水平DR指灭菌时的杀灭水平。

指灭菌时的杀灭水平。

p最终产品的无菌质量取决于两个因素最终产品的无菌质量取决于两个因素灭菌前的含菌量控制灭菌前的含菌量控制灭菌工艺的杀灭效果。

灭菌工艺的杀灭效果。

p微生物的热致死特性：

微生物的热致死特性：

受热死亡速度符合一级动力学方程受热死亡速度符合一级动力学方程dN/dtK（N0Nt）N0为为t0时，存活的微生物数；时，存活的微生物数；Nt为为t时被杀灭的微生物数；时被杀灭的微生物数；N为为t时存活的微生物数时存活的微生物数K为常数。

为常数。

将上式积分得到：

将上式积分得到：

lgNtlgN0（K2.303）t专专业业名名词词D值在一定温度下将微生物数量杀灭90%或下降一个对数单位所需要的时间z值灭菌温度系数即指使微生物D值改变（增加或减少）一个对数单位时，温度应变化（降低或升高）的度数。

是耐热曲线或热致死时间曲线斜率的负倒数FTT灭菌时间指灭菌程序赋予被灭菌品在T下的等效灭菌时间F0标准灭菌时间将121作为标准灭菌温度，当z设定为10时，灭菌程序赋予被灭菌品121下的等效灭菌时间p它是分析灭菌工艺效果的重它是分析灭菌工艺效果的重要生物学参数。

并且其数值要生物学参数。

并且其数值可通过残存曲线法或阴性分可通过残存曲线法或阴性分数法加以确定。

数法加以确定。

plgN0lgNtlg（N0Nt）pt（K2.303）lgl01,p所以所以D=t=2.303K.p即：

即：

D是直线斜率的负倒数是直线斜率的负倒数pD值越大，该温度下微生物值越大，该温度下微生物的耐热性就越强，在灭菌中的耐热性就越强，在灭菌中就越难杀灭。

就越难杀灭。

lgNlgNtt11223344tt11tt22DDp对某一种微生物而言，对某一种微生物而言，在其他条件保持不变在其他条件保持不变的情况下，的情况下，D值随灭值随灭菌温度的变化而变化。

菌温度的变化而变化。

p灭菌温度升高时，直灭菌温度升高时，直线方程的斜率变大，线方程的斜率变大，即使微生物杀灭即使微生物杀灭90所需的时间就短所需的时间就短p灭菌温度低时，达到灭菌温度低时，达到同一灭菌效果的时间同一灭菌效果的时间就长就长115121125lgNtlgN=1D125D121D115微生物名称微生物名称温度温度介介质质D值值min嗜热嗜热脂肪脂肪杆菌杆菌105葡萄糖葡萄糖87.811032.011511.71212.4微生物名称微生物名称温度温度介介质质D值值min梭状芽梭状芽孢杆菌孢杆菌105葡萄糖葡萄糖1.3注射用水注射用水2.1微生物名称微生物名称温度温度介介质质D值值min嗜热嗜热脂肪脂肪杆菌杆菌121葡萄糖乳酸林格液葡萄糖乳酸林格液2.1葡萄糖葡萄糖2.4注射用水注射用水3.0微生物名称微生物名称温度温度介介质质D值值min梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌105葡萄糖葡萄糖1.3嗜热脂肪杆菌嗜热脂肪杆菌注射用水注射用水2.1p在湿热灭菌条件下，实验测得在湿热灭菌条件下，实验测得细菌芽胞的细菌芽胞的z值在值在8-12之间之间p湿热灭菌计算时湿热灭菌计算时z通常取通常取10；干热灭菌计算时；干热灭菌计算时Z通常取通常取20，去热原时，去热原时Z通常取通常取54。

pZ=直线斜率的负倒数直线斜率的负倒数,其中其中:

D1指温度为指温度为T1时的时的D值，值，D2指温度为指温度为T2时的时的D值。

值。

tT（）D1D2121117TDZ=-T/D=（Tl-T2）/log10（D2/D1），nF0Dl21LgNnFTDTLgNn达到同样灭菌效果时，达到同样灭菌效果时，LgN等值等值lgNtLgNoLgNt121117LgNFTFo指在某一温度指在某一温度T（）下灭菌下灭菌1min所获得的标准灭菌时间所获得的标准灭菌时间所以所以F0FTD121DTpL=D121/Di=10（Ti-121）/ZpTi指各个灭菌时段的温度指各个灭菌时段的温度p标准参照温度（标准参照温度（121）pZ10。

n100灭菌时灭菌时1分钟，相当分钟，相当于于121灭菌灭菌0.008分钟，分钟，即即Fo值为值为0.008分钟。

分钟。

n105灭菌灭菌40分钟时，分钟时，Fo约为约为1分钟，能使分钟，能使D值为值为1分钟的芽孢数量下降分钟的芽孢数量下降1个个对数单位对数单位n116下灭菌下灭菌lmin对芽孢对芽孢杀灭效果只有标准灭菌状杀灭效果只有标准灭菌状态下的态下的32n121下灭菌下灭菌lmin相当于相当于116下灭菌下灭菌3.16min灭菌温度灭菌温度灭菌率灭菌率L1000.0081050.0251120.1261150.2511160.3161180.5011200.7941211.0001221.251231.59n可用灭菌率计算可用灭菌率计算FT值值=F0L=8/0.316=25.3nF0=10（Ti-T121）/Zdt=10（116-121）/10*25.3=8n根据梯形规则，将整个灭菌过程根据梯形规则，将整个灭菌过程（包括升温、保温和冷却包括升温、保温和冷却阶段阶段）的灭菌率累加，从而估算出某灭菌程序在标准温度的灭菌率累加，从而估算出某灭菌程序在标准温度下的等效灭菌时间：

下的等效灭菌时间：

nF0=t（L1/2+L2+L3+Ln-1+Ln/2）,t指测量温度的时指测量温度的时间间隔。

每两次测量温度的时间间隔必须相同。

在初始及间间隔。

每两次测量温度的时间间隔必须相同。

在初始及结束时间段的灭菌率非常小结束时间段的灭菌率非常小,可将公式简化为可将公式简化为:

FT=tL。

L1L2L3LN-1LN100n由由FT（LgN0LgNT）DT，FTDTLgN0LgNT，则则lgNTlgN0FTDT。

根据灭菌设备内温度监控系统。

根据灭菌设备内温度监控系统所测得的物理参数，估测某灭菌程序对微生物的杀灭效所测得的物理参数，估测某灭菌程序对微生物的杀灭效果。

果。

nDT表示某实际微生物（待灭菌物品中的污染菌表示某实际微生物（待灭菌物品中的污染菌）或假设或假设的微生物的微生物（生物指示剂生物指示剂）在在T下的下的D值。

值。

n例如，假设例如，假设F0为为8分钟，分钟，DT=0.5分钟，数量为分钟，数量为106，由，由公式可以得出在灭菌结束时，芽胞的残存数量为公式可以得出在灭菌结束时，芽胞的残存数量为10-10，SAL=lgNT=6-8/0.5=-10。

n在整个灭菌过程中，芽胞数量的对数下降值在整个灭菌过程中，芽胞数量的对数下降值:

SLR=LgN0-LgNT=FTDT=6-（-10）=8/0.5=16。

n生物指示剂，简称为生物指示剂，简称为BI，是对特定灭菌者，是对特定灭菌者工艺具有一定耐受性并且能够定量测定灭工艺具有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，菌效力的微生物制剂，n生物指示剂多为芽胞类细菌，具有更强的耐受性。

生物指示剂多为芽胞类细菌，具有更强的耐受性。

n生物指示剂既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件生物指示剂既可用来测定一个给定的灭菌工艺条件的灭菌效果，也可判别它是否符合无菌保证要求。

的灭菌效果，也可判别它是否符合无菌保证要求。

n采用生物指示剂做对照试验，是评判一个灭菌程序采用生物指示剂做对照试验，是评判一个灭菌程序有效性的直接方法而且也是最佳方法。

有效性的直接方法而且也是最佳方法。

n常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主要有三种形式常用于灭菌工艺验证的生物指示剂主要有三种形式芽胞条芽胞条芽胞悬浮液芽胞悬浮液自含型生物指示剂自含型生物指示剂p芽胞条芽胞条p将芽胞接种于滤纸片、玻璃、塑料等薄片或条状物，并用将芽胞接种于滤纸片、玻璃、塑料等薄片或条状物，并用特定的材料包起来以保持其完整性和生物活性。

直接接种特定的材料包起来以保持其完整性和生物活性。

直接接种到产品中到产品中.p适用于验证和监控非溶液类物品的灭菌工艺适用于验证和监控非溶液类物品的灭菌工艺.p芽胞悬浮液芽胞悬浮液p芽胞悬浮液可被接种待灭菌产品溶液或模拟产品溶液中。

芽胞悬浮液可被接种待灭菌产品溶液或模拟产品溶液中。

直接接种于产品内或产品外表面，这样能更加直观地考察直接接种于产品内或产品外表面，这样能更加直观地考察产品的实际灭菌效果。

产品的实际灭菌效果。

p芽胞接种到液体产品时，其耐热性会增强或降低。

如果不芽胞接种到液体产品时，其耐热性会增强或降低。

如果不宜被直接接种于产品或耐热芽胞与产品不相适应，则可用宜被直接接种于产品或耐热芽胞与产品不相适应，则可用模拟产品（生理盐水或其他溶液）替代。

模拟产品（生理盐水或其他溶液）替代。

p但必须保证所用的替代品与产品具有相似的物理和化学性但必须保证所用的替代品与产品具有相似的物理和化学性质质（如粘度和如粘度和pH），并且耐热芽胞在替代品中的，并且耐热芽胞在替代品中的D值（耐热性）值（耐热性）不得小于在产品中的不得小于在产品中的D值。

否则将影响到灭菌工艺验证或日值。

否则将影响到灭菌工艺验证或日常监控的可靠性。

常监控的可靠性。

p自含型生物指示剂自含型生物指示剂p是将芽胞条是将芽胞条（或片或片）加入到含有指示剂的培养基包装内加入到含有指示剂的培养基包装内（如小瓶内如小瓶内），培养基单独包装并与芽胞载体分离，经灭菌处理后，挤碎培，培养基单独包装并与芽胞载体分离，经灭菌处理后，挤碎培养基小瓶使芽胞条养基小瓶使芽胞条（或片或片浸没在培养基内，在适当温度和时间浸没在培养基内，在适当温度和时间内培养，通过观察培养基内的酸碱指示剂的颜色变化判断其生内培养，通过观察培养基内的酸碱指示剂的颜色变化判断其生长状况长状况;或将芽胞直接接种在含有指示剂的培养基内。

或将芽胞直接接种在含有指示剂的培养基内。

p自含型生物指示剂的耐热性与其载体、包装的材质、结构有很自含型生物指示剂的耐热性与其载体、包装的材质、结构有很大的相关性；生物指示剂的包装要易于杀菌剂透过。

大的相关性；生物指示剂的包装要易于杀菌剂透过。

p测定测定D值时务必要考虑包装可能会引起杀菌效来的滞后，不能值时务必要考虑包装可能会引起杀菌效来的滞后，不能仅测定芽胞条仅测定芽胞条（或片或片）的的D值。

值。

n灭菌溶液时，多选用自含型安瓶瓶生物指示剂灭菌溶液时，多选用自含型安瓶瓶生物指示剂n灭菌织物时，多选用芽胞条灭菌织物时，多选用芽胞条n灭菌管路时，选用特殊生物指剂灭菌管路时，选用特殊生物指剂（如用接有芽胞的如用接有芽胞的钢丝、线等钢丝、线等）以测试死角处以测试死角处（最冷点最冷点）的灭菌状况的灭菌状况灭菌方式灭菌方式微生物（孢子）微生物（孢子）D值范围（分）值范围（分）湿湿热热121嗜热脂肪芽孢杆菌嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillusstearothermophilus1.5-3.0枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis0.3-0.7凝结芽孢杆菌凝结芽孢杆菌Bacilluscoagulans0.4-0.8梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌Clostridiumsporogenes0.4-0.8干热干热150枯草芽孢杆菌黑色变种枯草芽孢杆菌黑色变种Bacillussubtilisvar.niger1.0注射剂注射剂无菌生产无菌生产过滤除菌过滤除菌无菌分装无菌分装（冻干）粉针剂（冻干）粉针剂溶液状态下稳定等注射液注射液否否是是最终灭菌最终灭菌无菌生产无菌生产否否是是热压灭热压灭菌菌残存概率法残存概率法不能耐受过度杀菌法不能耐受过度杀菌法过度杀菌法过度杀菌法注射剂注射剂灭菌工艺灭菌工艺的选择的选择EMEA灭菌工艺决策树风险增加一般是湿热灭菌方式F08，首选过度杀灭法F012，如不能耐受过度杀灭，选用残存概率法8F012。

最终灭菌非最终灭菌生产工艺是在控制微生物污染量的基础上，在完成内包装工艺生产过程最终采取一个可靠的灭菌措施。

是在无菌系统环境下，通过除菌过滤法或无菌操作法，在完成内包装工艺生产全过程始终未采取单独的灭菌措施。

基本概念无菌性的过程或内容不同无菌保证值与Fo、D值及带菌量的关系lgN2345-2-3-41-5-6-101234576891012分分11过度杀灭示意过度杀灭示意生产中生产中Fo=8示意示意SALF0/DlgN0假定D121为1方法F0N0SAL过度杀灭法121066残存概率法81026p确立灭菌终点确立灭菌终点-使微生物的残存概率下降到使微生物的残存概率下降到100，在此基础上再下降，在此基础上再下降6个对数单位个对数单位（即微生物的残存即微生物的残存概率不超过概率不超过1/百万，或百万，或PNSU10-6）p灭菌过程中所产生的各项物理和生物学参数应能保灭菌