(全国职业技能比赛:高职)GZ041检验检疫技术赛项技能赛题(模块1微生物检验试卷).docx
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全国职业院校检验检疫技术技能竞赛
微生物学检验-革兰染色及细菌分区(四区)划线试卷(高职组、本科组)
一、竞赛说明
1.主要考核医学检验技术专业、卫生检验与检疫技术专业学生对革兰染色、分区划线的熟练程度,在规定时间内完成革兰染色和细菌分区(四区)划线的操作。
2.本题满分100分,完成时间22分钟,其中细菌分区划线6分钟,革兰染色16分钟。
3.独立完成,不得相互询问或讨论。
4.考核成绩为操作过程评分、操作结果和考核时间评分、职业素养之和。
5.全部操作过程时间和操作后处理时间计入时间限额,超过规定时间将终止操作。
二、实验原理
1.细菌分区(四区)划线
是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
2.革兰染色
G+菌:
细胞壁结构较致密,肽聚糖层厚,脂质少,乙醇脱色时不易渗入菌体,并能使细胞壁脱水,间隙缩小,通透性下降,阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗出,保留紫色。
G-菌:
细胞壁结构较疏松,肽聚糖层薄,脂质多,易被乙醇溶解,使细胞壁通透性增高,菌体内的结晶紫-碘复合物易被乙醇溶解逸出而脱掉紫色,经沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。
三、实验器材和试剂
1.分区(四区)划线法
标本(7cm血平板培养物)、9cm血平板、记号笔、不干胶标签(约2×3厘米方形)、生物安全柜、接种环、试管架、计时器、恒温培养箱等。
2.革兰染色
载玻片、试管架、红蓝铅笔、接种环、记号笔、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶、计时器、纱布(可用于拭擦玻片)、显微镜、香柏油、擦镜纸、擦镜液、染色盘、染色架、消毒洗手液、洗面盆、抹布、锐器盒、普通污物缸、废液缸、标本盒等。
3.实验试剂
革兰氏染液(杭州滨和微生物试剂有限公司):
结晶紫染液、碘液、脱色液(95%乙醇)、复染液。
(连包装盒一起存放在上述托盘里,由选手取出使用,操作完毕后放回原位。
)
四、实验标本
7cm血平板细菌培养物
五、操作步骤
1.细菌分区(四区)划线法
(1)标记在9cm平板底部粘贴上不干胶标签,并用签字笔在标签上正确标记。
(2)取菌右手持接种环(执笔式)伸入红外线灭菌器腔内6~8秒,外移接种环,离开红外线灭菌器内腔,待冷却后挑取少许标本。
(3)划线左手持琼脂平板适当倾斜,用拇指打开皿盖,使其与皿底间分开2~3cm宽的缝隙,右手持取标本的接种环深入皿内,先将细菌标本在培养基一角涂成直径约一厘米薄膜,并以此为起点,使接种环与接种平板面呈30°~40°角,以腕力在平板表面进行,连续不重叠划线,作为第一区,其范围不能超过平板的1/4;灭菌接种环,待冷却后,转动平皿至适合操作的位置(各区的交角应为120°左右,即平板转动一定角度约60°,以便充分利用整个平板的面积),将接种环通过第一区3~4次,连续不重叠划线,作为第二区。
同法依次划完第三、四区,第四区切勿重新接触第一、二区。
注意每区的划线须有数条线与上区交叉接触,每区线间需保持一定距离,线条要密而不重复;划第三至第四区间可不灭菌接种环。
(4)培养划线完毕,盖好皿盖,倒置放入37℃恒温培养箱中培养18~24h。
(5)观察结果培养18~24h后,从恒温培养箱中取出,观察菌落生长情况并计数单个菌落数量。
2.革兰染色
(1)标记选择玻片并正确编号。
(2)涂片用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成1cm2或蚕豆大小的均匀半透明菌膜。
(3)干燥涂片制成后,在空气中使其迅速干燥,以免菌体皱缩变形(若需加快干燥速度,将涂布面朝上,置于火焰上方,不烫手的位置,慢慢烘干,切勿紧贴火焰)。
(4)固定玻片干燥后用火焰加热法固定,即玻片(菌膜面向上)以中速(钟摆速度)来回通过火焰外焰3次进行固定,以玻片反面接触手背皮肤,热而不烫为宜。
(5)初染加结晶紫染液,染60秒,细流水冲洗,并倒去玻片上积水。
(6)媒染加碘液,染60秒,细流水冲洗,倒去玻片上积水。
(7)脱色加脱色液,脱色10~30秒,不时摇动至无紫色逸出为止,细流水冲洗,倒去玻片上积水。
(8)复染加复染液,染30~60秒,细流水冲洗,倒去玻片上积水。
(9)镜检待已染色的细菌标本片自然干燥或用吸水纸吸干后,再用显微镜进行观察。
全国职业院校检验检疫技术技能竞赛
微生物学检验-革兰染色和细菌(四区)分区划线答题卷(高职组、本科组)
一、革兰染色结果
1.绘出镜下形态
2.镜下结果描述
参赛选手填写
复核裁判填写
菌体颜色
菌体形态
染色性
染色色彩是否清晰
选手不填
3.初步报告
(如:
找到革兰阳性球(杆)菌或找到革兰阴性杆菌)
得分
裁判签名
二、分区(四区)划线结果
得分
裁判签名
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