实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量.pdf
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实验十实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类(如已糖基,戊醛糖及已糖醛酸)脱水生成糠醛,生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质,反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应,因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度,糖含量在30ug左右时就能进行测定,所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。
三、仪器,试剂和材料三、仪器,试剂和材料1仪器
(1)分光光度计;(6)漏斗,漏斗架个6个
(2)电子天平;(7)容量瓶:
50ml2个;(3)三角瓶:
50ml2个(8)移液管;(4)刻度具塞试管;10ml13支;(9)水浴锅。
(5)试管架,试管夹各2个;2试剂
(1)葡萄糖标准液:
100ug/ml;
(2)浓硫酸;(3)蒽酮试剂:
0.2g蒽酮,溶于100ml浓流酸中,现当日配制使用。
3材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织(大白菜心)。
四、操作步骤四、操作步骤1葡萄糖标准曲线的制作葡萄糖标准曲线的制作取7支试管,按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液;管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中,加入蒽酮试剂4.0ml,迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。
自水浴重新煮沸起,准确煮沸10min取出,用流水冷却,室温放置10min,在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量(ug)做横坐标,以吸光值作纵坐标,做出标准曲线。
2植物样品中可溶性糖的提取植物样品中可溶性糖的提取将植物材料剪碎至2mm以下,准确称取1g,放入50ml三角瓶中,加沸水25ml,在水浴中加盖煮沸10min,冷却过滤,过滤收集在50ml容量瓶中,定容至刻度。
吸取提取液5ml,置于另一50ml容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀、测定。
3样品中总糖的提取、水解和测定样品中总糖的提取、水解和测定准确称取植物鲜样12g(或干样0.5g),加水3ml在研钵中磨成匀浆,转入三角瓶。
用12ml水冲洗研钵23次,洗出液转入三角瓶中。
再在三角瓶中加入6mol/LHCL10ml,摇匀后在沸水浴中水解0.5h,冷却后用10%NaOH中和至pH中性。
再用蒸馏水定容至100ml,过滤,取滤液,用蒸馏水稀释1000倍的总糖水解液。
44测定测定吸取已释释的可溶性糖和总糖提取液各1ml(做平行样2份)于试管中,加入4.0ml蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作。
比色波长为620nm,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(ug)。
五、结果处理与分析五、结果处理与分析查表所得含糖质量(%)稀释倍数植物样品含糖量(%)=100样品质量(g)106【注意事项】【注意事项】1该显色反应非常灵敏,溶液切勿混入纸屑及尘埃。
2硫酸要用高纯度的。
3不同糖类与蒽酮的显色有异,稳定性也不同。
加热比色时间应严格掌握。
4实验使用的强酸注意不要洒在仪器及皮肤上。
【思考题】【思考题】1用水提取糖类有哪些?
2应用蒽酮法测得的糖包括哪些类型?
3你知道还有什么方法可以测定糖类?
4此法是否可用于测定淀粉含量,若能,请设计试验。
【参考资料】【参考资料】郭蔼光,郭泽坤生物化学实验技术北京:
高等教育出版社,2007:
109-111
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