孢子萌发法.ppt
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- 上传时间:2024-01-29
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孢子萌发法.ppt
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实验十二杀菌剂的生物测定孢子萌发法,一、试验目的,学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一-孢子萌发法。
将孢子培育在含有一定药剂的介质中,在保温、保湿条件下培养一定时间后镜检,根据杀菌剂对病原真菌孢子萌发抑制作用来测定药剂的生物活性。
二、试验原理,含药介质,孢子,其他药剂选用合适的溶剂(如丙酮、二甲基亚砜、乙醇等)溶解,用0.1%的吐温80无菌水溶液稀释。
根据预备试验,设置5-7个系列质量浓度,有机溶剂最终含量不超过2%。
三、实验步骤,
(1)药剂配制,水溶性药剂直接用无菌水溶解稀释,(每毫升1105-1107个孢子,并加入0.5%葡萄糖溶液),
(2)孢子悬浮液配制,培养基上的病原真菌孢子,洗脱,过滤,离心,(1000r/min)5min,倒去上清液,加入去离子水,离心,去离子水将孢子重悬浮,然后架放于带有浅层水的培养皿中,加盖保湿培养于适宜温度的培养箱中。
(3)药剂处理,低浓度,高浓度,孢子悬浮液,0.5mL,药液,0.5mL,混合均匀,微量加样器,凹玻片,四、结果调查与统计分析,当空白对照孢子萌发率达到90%以上时,检查各处理孢子萌发情况。
每处理各重复随机观察3个以上视野,调查孢子总数不少于200个,分别记录萌发数和孢子总数。
孢子芽管长度大于孢子的短半径视为萌发。
同时还应观察记录芽管生长异常情况、附着胞形成数等。
实验结果统计,计算各处理的孢子萌发相对抑制率,采用浓度对数-几率值法计算各药剂的EC50、EC90,标准误及其95%置信限,评价供试药剂对靶标菌孢子萌发的抑制活性。
但在观察试验结果时,除要观察孢子萌发与不萌发这两种截然不同的形态外,更要注意萌发芽管的形态变化,即芽管是否有膨大现象,是否有附着器形成,附着器颜色的深浅,发芽管长度、以及侵入菌体形成情况等,即从微细观察中来了解药物的作用方式。
孢子萌发法的突出优点是快速,试验当天即可获得结果,尤其适合于保护剂的筛选。
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- 孢子 萌发