环境生物技术实验讲义.docx

环境生物技术实验讲义.docx

《环境生物技术实验讲义.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《环境生物技术实验讲义.docx（20页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

环境生物技术实验讲义

实验一细菌淀粉酶和过氧化氢酶定性测定

一、实验目的

①了解过氧化氢酶试验的反应原理和用途。

②了解淀粉酶试验的反应原理和用途。

③通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定，加深对酶和酶促反应的感性认识。

二、实验原理

酶是微生物机体内生物合成的一种生物催化剂，它是高分子蛋白质，具有催化生物化学反应加速进行，并具有传递电子、原子和化学基团的作用。

微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶及表面酶。

本实验对胞外酶中的两种即淀粉酶和过氧化氢酶（亦叫接触酶）进行定性测定。

细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化为糖，淀粉被酶催化分解后用碘检测不到其变色现象；过氧化氢酶能将过氧化氢快速分解为水和氧气，能用肉眼很容易的观测到产生的气泡。

三、实验仪器和试剂

①试管（15mm-150mm）5支、试管架1个、培养皿（90mm）3套、接种环。

②肉膏胨淀粉琼脂培养基（1L）:

蛋白胨10g、Nacl5g、牛肉膏5g、可溶性淀粉2g、琼脂15g、蒸馏水定容到1000ml121℃灭菌20min。

③4％淀粉溶液1滴瓶:

4g可溶性淀粉加水至100ml

④革氏碘液1滴瓶:

碘1g、KI2g、蒸馏水300ml（将I与KI先行混合，加入蒸馏水少许充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。

⑤9％过氧化氢1滴瓶：

30％过氧化氢30ml蒸馏水70ml

⑥枯草杆菌和大肠杆菌斜面各一支。

⑦活性污泥

四、实验方法

（一）生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的测定

①取3支干净的试管，按1、2、3对照编号。

放在试管架上备用。

②在1号、2号试管内分别加入5ml、10ml的活性污泥混合液，再在1号和2号试管中分别加10ml和5ml蒸馏水。

在对照管内加15ml蒸馏水。

③在1号、2号、3号及对照管中分别加入4％的淀粉液4滴（淀粉液的用量，在做预备实验时根据样品中淀粉酶含量多少而定），迅速摇匀并记下反应的初始时间。

④在上述3个管内分别加4滴碘液（碘液用量在预备实验时酌定），迅速摇匀，这时各管均呈蓝色。

⑤观察结果。

注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失时的时间（即淀粉酶和淀粉反应完全的时间），并对结果进行分析。

（二）细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验

①将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无菌培养皿内（每皿约10ml），共倒3个，静置待冷凝即成平板。

②在无菌操作条件下，用接种环分别挑取枯草杆菌、大肠杆菌和活性污泥各一环分别在3个平板上点种5个点。

倒置于37℃恒温箱内过夜培养。

③观察结果，取出碘液，分别在3个平板内菌落周围滴加20ul碘液，观察菌落周围颜色的变化。

若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。

若菌落周围仍为蓝色，说明该细菌不产生淀粉酶。

（三）过氧化氢酶的定性测定

①将配备的斜面培养基接种枯草杆菌、大肠杆菌37℃恒温箱内过夜培养。

②用滴管吸取过氧化氢滴加入到菌落上，观察菌落是否有气泡。

五、实验报告

把所观察到的现象记录下来，进行分析。

六、思考题

①淀粉酶定性测定中对照应呈什么颜色?

为什么?

各菌落呈什么颜色?

为什么?

②各菌落滴加过氧化氢后呈什么现象?

说明什么问题?

实验二处理生活污水的活性污泥微生物总DNA的提取

一、实验目的：

①掌握环境样品DNA提取技术。

②掌握琼脂糖电泳的检测原理和方法。

二、实验原理：

活性污泥是一种以好氧性细菌为主体的微生物和水中的悬浮物质、胶体物质混杂在一起形成的肉眼可见的絮状颗粒，它是废水生物处理过程的主体。

环境样品的微生物总DNA的提取和纯化方法主要由两部分组成：

1.温和裂解细胞及溶解DNA的技术，包括物理、化学或酶解作用裂解细胞，是DNA释放出来。

2.在环境样品DNA得到充分释放后，通常采用几种化学和酶学方法中的任一种来去除杂蛋白、RNA及其他的大分子。

琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。

不同DNA的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。

琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应使不同大小的DNA分子分离，把分子量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。

溴化乙锭（EB）在紫外光照射下发射荧光，EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物。

三、实验仪器和试剂：

仪器：

核酸电泳系统，凝胶成像分析系统，离心机，移液器，水浴锅，涡旋振荡器，EP管。

试剂：

1、0.1%磷酸钠缓冲液（PH8.0）100ml：

1MNa2HPO493.2ml、1MNaH2PO46.8ml，加热配制。

2、溶菌酶。

3、20%SDS100ml：

20gSDS加灭菌水定容至100ml，加热。

4、70%乙醇：

70ml无水乙醇，加灭菌水30ml。

5、TE缓冲液（PH8.0）：

1MTris-cl500ul，0.2MEDTA250ul，灭菌水49250ul

6、异丙醇，

7、8mol/LKAc溶液：

392.56gKAC加灭菌水500ml，121℃灭菌20min。

8、1kbDNA分子量标准。

9、1%琼脂糖：

0.5g琼脂糖加5ml10×TBE，45ml水。

10、10×TBE：

Tris-base54g、BoricAcid27.5g、Na2EDTA4.65g加蒸馏水定容至500ml，用HCL调PH8.3

11、核酸上样缓冲液：

10×ladder

四、实验方法：

1、取1g活性污泥，离心12000rpm3min去上清，灭菌水洗涤2次，10000rpm3min,去上清。

加1ml0.1mol/LPH8磷酸钠缓冲液,漩涡震荡器震荡20min。

2、加溶菌酶5mg，使终浓度为2.5mg/ml，振荡5min,37℃水浴30min。

3、加120ul20%SDS轻柔振荡15min，6000rpm离心10min。

4、取上清液加0.2倍体积冰冷的8MKAc，颠倒混匀1min，12000rpm离心10min。

5、吸取上清液移到新的EP管中，加0.6倍体积冰冷的异丙醇，颠倒混匀1min，室温下放置10min，12000rpm离心10min。

6、去上清，加1ml70%乙醇洗涤DNA沉淀，12000rpm离心2min，去乙醇后于37℃干燥10min。

7、重复做第6步

8、每管加100ulTE+400ul灭菌水+0.6倍体积冰冷的异丙醇，颠倒混匀，室温静置10min，12000rpm离心10min。

9、弃上清液，将沉淀定容于200ulTE缓冲液中，加0.2倍体积8MKAC，颠倒混匀，室温静置5min，12000rpm离心10min。

10、吸取上清液移到新的EP管中，加0.6倍体积冰冷的异丙醇，颠倒混匀，室温静置10min，12000rpm离心10min。

11、弃上清液，用1ml70%乙醇洗涤DNA沉淀、12000rpm离心10min，干燥，溶于200ulTE缓冲液中。

12、吸取20ulDNA溶液，在1%琼脂糖凝胶上进行电泳，检测DNA提取效果。

加上1kbMaker作为DNA大小的标准。

五、实验报告

把在1%琼脂糖凝胶观察到的现象记录下来，进行分析。

六、思考题

①SDS和乙酸钾的作用?

②不同浓度的琼脂糖凝胶电泳的分辨率?

实验三微生物总DNA中的16SrDNAPCR扩增技术

一、实验目的

①了解以通过引物进行16SrDNAPCR扩增的基本原理

②掌握从活性污泥微生物总DNA中进行16SrDNAPCR扩增的方法

二、实验原理

RCR是一种选择性体外扩增DNA的方法，类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成。

在本实验中，PCR扩增的模板是从活性污泥中提取的微生物总DNA，扩增的目的序列是微生物16SrDNA的V3区。

采用的引物是细菌的一对通用引物，正向引物338F:

5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCGCGGGGGGACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’。

反向引物518R：

5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’。

其中，正向引物338F的5’端连接有40bp的GC发夹，以增加DNA解链区的GC含量，提高解链温度。

三、实验仪器和试剂

①样品

从活性污泥中提取得到的微生物总DNA。

②仪器及相关用品

PCR扩增仪，琼脂糖凝胶电泳所需的设备，凝胶成像分析系统，移液枪及吸头，PCR管，高速离心机。

③试剂

TaqDNA聚合酶，10×PCR反应缓冲液，MgCl225mmol/L,四种dNTP混合物各为2.5mmol/L。

引物：

正向引物及反向引物（浓度为25pmol/L），灭菌的去离子水。

模板：

从活性污泥中提取得到的微生物总DNA，用灭菌的去离子水稀释10倍后用作模板进行PCR扩增。

1kbDNA分子量标准：

1.0％琼脂糖；核酸上样缓冲液。

四、实验方法

1.建立PCR扩增反应体系

PCR扩增反应体系总体积为50ul，向PCR反应管中依次加入以下试剂：

10×PCR反应缓冲液5ul；dNTPs2ul；MgCl25ul；引物各1ul；模板1ul；TaqDNA聚合酶2.5U;去离子水35ul。

在做上述实验的同时，以去离子水代替扩增模板做一次阴性对照。

2．设置PCR反应条件

95℃（5min）→｛95℃（1min）→55℃（1min）→72℃（1min）｝35个循环→72℃（10min）→4℃备用

3.电泳检查结果

PCR反应结束后，取5ul反应液在1％琼脂糖凝胶上进行电泳，检测扩增产物。

DNA上样时，加上DNA分子量标记作为判断PCR产物大小的参照物。

五、实验报告

1.简述通用引物进行16SrDNAPCR扩增的基本原理

2.进行结果和观察、记录与分析。

六、注意事项

1.在配制PCR反应体系的过程中，应在加入dNTP混合物后再加入TaqDNA聚合酶，因为有些酶的3’→5’外切酶的活性较强，如果反应体系中不含dNTP，可能导致引物分解。

2.应对吸头和PCR管进行高压灭菌，每次操作前必须更换吸头，以免试剂相互污染。

七、思考题

1.以细菌通用引物进行16SrDNAPCR扩增的目的是什么？

2.影响PCR扩增效率的因素有哪些？

3.如果出现非特异性的DNA条带，可能的原因有哪些？

实验四重铬酸钾法（CODCr）测定化学需氧量COD

一、实验目的：

掌握重铬酸钾法测定COD的原理及方法。

二、实验原理

化学需氧量是指一定条件下，用强氧化剂氧化水样中有机物消耗的强氧化剂的量所相当于O2的量即为COD，以氧的mg/L来表示。

化学需氧量反映了水体中还原性物质（有机物、亚硝酸盐、亚铁盐等）污染的程度，可以作为有机物相对含量的指标，在水处理工程和水质管理中常规必比可少的测试项目。

重铬酸钾法的原理在强酸性溶液中，准确加入过量的重铬酸钾标准溶液，加热回流，将水样中还原性物质（主要是有机物）氧化，过量的重铬酸钾以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵标准溶液回滴，根据所消耗的重铬酸钾标准溶液量计算水样化学需氧量。

试验部分

三、实验仪器和试剂

仪器：

高压灭菌锅带温度表、压力表,250mL锥形瓶;棉纱布;麻绳,数粒玻璃珠，

试剂：

（1）重铬酸钾标准溶液。

纯重铬酸钾12.25g溶于水中,移入1000mL容量瓶中,稀释至标线,摇匀,制得0.25mol/L的重铬酸钾溶液。

（2）试亚铁灵指示液。

称取1.485g邻菲啰啉（C12H8N2·H2O）和0.695g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）溶于水,稀释至100mL,制得试亚铁灵指示液储于棕色瓶内。

（3）硫酸亚铁铵标准液[c（NH4）2Fe（SO4）2.6H2O约等于0.1mol/L]：

称取39.5g硫酸亚铁铵溶于水中,边搅拌边缓慢加入20mL浓硫酸,冷却后移入1000mL容量瓶中,加水稀释至标线,摇匀制得硫酸亚铁铵标准液。

临用前,用重铬酸钾标准溶液标定。

标定方法：

准确吸取10.00mL重铬酸钾标准溶液于500mL锥形瓶中，加水稀释至110mL左右，缓慢加入30mL浓硫酸，混匀。

冷却后，加入3滴试亚铁灵指示液（约0.15ml），用硫酸亚铁铵溶液滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色

c=（0.2500·10.00）/V

式中c——硫酸亚铁铵标准溶液的浓度，mol/L；

V——硫酸亚铁铵标准溶液的用量，ml。

（4）硫酸-硫酸银溶液。

于500mL浓硫酸中加入5g硫酸银,30℃50rpm放置1~2d,不时摇动使其溶解,制得硫酸-硫酸银溶液。

（5）硫酸汞。

硫酸汞为结晶或粉末。

四、实验方法

1、在2个250mL锥形瓶中,分别加入10ml水样（一次处理水）+10ml蒸馏水和20ml蒸馏水（做空白对照）。

2、准确加入10mL重铬酸钾标准溶液及数粒洗净的玻璃珠。

3、量取30mL硫酸-硫酸银溶液缓慢加入锥形瓶中（此时会产生大量的热量）,轻轻摇动锥形瓶使溶液混合均匀,用棉纱布盖住锥形瓶口并用麻绳扎牢。

4、将锥形瓶放入已加入适量水的高压灭菌锅内,高压灭菌121℃40min。

5、取出锥形瓶，冷却后,将90mL水沿锥形瓶壁边摇边缓慢加入锥形瓶,继续冷却至室温。

6、加3滴试亚铁灵指示液,用硫酸亚铁铵标准溶液滴定至溶液的颜色由黄色经蓝绿色至红褐色即为终点,记录硫酸亚铁铵标准溶液的用量。

7、.计算

CODCr（O2，mg/L）=（V0-V1）×C×8×1000/V

式中：

c—硫酸亚铁铵标准溶液的浓度，mol/L；

V0—滴定空白时硫酸亚铁铵标准溶液用量，ml；

V1—滴定水样时硫酸亚铁铵标准溶液的用量，ml；

V—水样的体积，ml；

8—氧（1/2O）摩尔质量，8g/mol。

五、实验报告

1、计算COD的值并对结果进行分析。

2、对实验现象进行观察、记录。

六、注意事项

6.1使用0.4硫酸汞络合氯离子的最高量可达40mg，如取用20mL水样，即最高可络合2000mg/L氯离子浓度的水样。

若氯离子的浓度较低，也可少加硫酸汞，使保持硫酸汞：

氯离子=10：

1（W/W）。

若出现少量氯化汞沉淀，并不影响测定。

6.2水样取用体积可在10.00—50.00mL范围内，但试剂用量及浓度需按下表进行相应调整，也可得到满意的结果。

6.3对于化学需氧量小于50mg/L的水样，应改用0.0250mol/L重铬酸钾标准溶液。

回滴时用0.01mol/L硫酸亚铁铵标准溶液。

6.4水样加热回流后，溶液中重铬酸钾剩余量应为加入量的1/5—4/5为宜。

6.5用邻苯二甲酸氢钾标准溶液检查试剂的质量和操作技术时，由于每克邻苯二甲酸

氢钾的理论CODCr值为1.176g，所以溶解0.4251g邻苯二甲酸氢钾（HOOCC6H4COOK）于重蒸馏水中，转入1000mL容量瓶，用重蒸馏水稀释至标线，使之成为500mg/L的CODCr标准溶液。

用时新配。

6.6CODCr的测定结果应保留三位有效数字。

6.7每次滴定时，应对硫酸亚铁铵滴定溶液进行标定，室温较高时尤其应注意其浓度的变化。

七、精密度和准确度

实验室分析CODCr为500mg/L的邻苯二酸氢钾

标准溶液,相对误差为2.50%;相对标准偏差为3.91%。

八、思考题

1、测定COD方法有哪些？

2、重铬酸钾法测定COD的原理？

实验五五日生化需氧量的测定（BOD5）

一、实验目的：

掌握测定五日生化需氧量的原理和方法

二、实验原理

生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。

通常情况下是指水样充满完全密封的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4h（先在0-4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃暗处培养5d），即培养（2+5）d），分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5形式表示。

若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需要适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。

三、实验仪器和试剂

仪器：

恒温培养箱（20℃±1℃）,BOD测量仪（BOD测量主机，专用棕色玻璃瓶，测量头，橡胶环，磁力搅拌子，玻璃溢流瓶，超薄专用磁力搅拌器，电池）

试剂：

45%KOH溶液

四、实验方法

步骤：

1，水样的预处理

（1）样品的酸度值在6.5-7.5之间，可加1MHCL或1MNaOH调节

（2）样品的前期处理

根据污水样品的特点进行预处理（充分混合，沉淀，过滤和均质），水样中含有铜，铅，锌，镉，铬，砷，氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或增大稀释倍数，以减小毒物的浓度。

含有少量游离氯的水样，一般放置1-2h，游离氯即可消失

（3）定容污水注意：

取样要具有代表性。

（4）仪器的设定，测量。

五、实验报告

记录BOD的值并对结果进行分析。

六、思考题

有几种测定BOD的方法。

实验六空气中细菌数量的监测

一、实验目的：

①了解一定环境空气中微生物的分布情况。

②学习并掌握检定和计数空气微生物的基本方法

二、实验原理：

空气中没有可为微生物直接利用的营养物质和足够的水分，它不是微生物生长繁殖的天然环境，因此空气中没有固定的微生物种类。

它主要通过土壤尘埃、小水滴、人和动物体表的干燥脱落物、呼吸道的排泄物等方式被带入空气。

由于微生物能产生各种休眠体，故可在空气中存活相当长的时期而不至死亡。

空气中微生物的种类，主要为真菌和细菌，其数量则取决于所处的环境和飞扬的尘埃量。

三、实验仪器和试剂：

仪器：

灭菌吸管、灭菌培养皿、天平、称量纸、恒温培养箱、

试剂：

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）：

牛肉膏5.0g；蛋白胨10.0g；NaCl5.0g；琼脂20.0g；蒸馏水1000mL；pH7.0。

高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）：

可溶性淀粉20g；KNO31.0g；K2HPO40.5g；MgSO4·7H2O0.5g；NaCl0.5g；FeSO4·7H2O0.01g；琼脂20g；蒸馏水100mL；pH7.2~7.4。

查氏培养基（培养霉菌）：

蔗糖30g；K2HPO41.0g；KCl1.0g；NaNO32g；MgSO4·7H2O0.5g；FeSO4·7H2O0.01g；蒸馏水1000mL；pH6.7。

如果用于分离霉菌时可以加乳酸调成pH5.0~5.5制成酸性培养基。

四、实验方法：

（沉降法）

1、将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、查氏培养基、高氏一号琼脂培养基融化后，各倒四个平板。

2、将上述三种培养皿各取两个，在室外打开皿盖，分别暴露于空气中5min、10min，另两个培养皿在实验室（自己选择空间）空气中分别暴露5min、10皿。

3、牛肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培养1天；查氏琼脂平板和高氏一号琼脂平板倒置于28℃培养，分别培养3-4天和7-10天后计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。

4、计算每立方米空气中微生物的数量。

奥梅梁斯基曾建议：

面积为100cm2平板培养基，暴露在空气中5min相当于10L空气中的细菌数。

计算公式如下：

X=N*100*100/πr2（个/m3空气）

五、实验报告：

根据沉降法，记录空气中微生物的种类和相对数量，填写下表，推算出1m3空气中细菌数。

表1空气中微生物的种类和数量

菌落数

环境

细菌

霉菌

放线菌

菌落数

环境

细菌

霉菌

放线菌

室内

5min

室外

5min

10min

10min

六、注意事项：

1、根据空气污染程度确定暴露时间，如果空气污浊，暴露时间宜适当缩短。

2、在野外暴露取样时，应选择背风的地方，否则影响取样效果。

七、思考题：

1、空气中微生物的分布和数量与什么因素有关？

空气中的微生物如何进行测定？

2、空气微生物有几种检测方法？

实验七土壤中微生物数量的监测

一、实验目的

①学会土壤悬液的稀释方法

②掌握土壤微生物数量的检测方法

二、实验原理

土壤是微生物生活最适宜的环境，它具有微生物所需的一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件，所以土壤中的微生物的数量和种类都很多，它们参与土壤中的氮、碳、硫、磷等的矿化作用，使地球上的这些元素能被循环使用。

此外，土壤微生物的活动对土壤的形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用，因此，查明土壤中的微生物的数量及其组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。

三、实验仪器和试剂

1.培养基

琼脂培养基:

牛肉膏1g、酵母膏2g、蛋白胨5g、NaCL5g、琼脂15g、加水定容至1000ml调PH为7．4

查氏培养基：

NaNO32g、K2HPO41g、KCl0.5g、MgSO40.5g、FeSO40.01g、蔗糖30g、琼脂15~20g、水1000mL、pH6.7

2.灭菌稀释水、灭菌吸管、灭菌培养基

3.土壤样品、天平、称量纸

四、实验方法

1.取新鲜土壤样品10g，加入90ml无菌水中，塞上灭菌塞子，在摇床上震荡10min，制成土壤悬液。

2.按10倍稀释法，将上述土壤悬液稀释至10-6。

3.分别吸取10-2、10-3的稀释土壤悬液0.1ml，至灭菌培养基中。

4.将加热完全融化后冷却至45℃的查氏琼脂培养基倾入已加有稀释土壤悬液的平皿中约15ml，摇匀后平置，待其固化。

5.按同样方法吸取10-5、10-6的稀释土壤悬液0.1ml，至灭菌平皿中，倾入营养琼脂。

6.营养琼脂平板倒置后于28℃培养，查氏平板于25℃培养。

五、实验报告

根据平板上的菌落数与平皿中土壤悬液稀释倍数算得每克土壤中的微生物数量。

六、注意事项

1.在营养琼脂平板上长出的菌落以土壤中异养细胞占绝对优势，对偶然出现的霉菌和放线菌菌落可根据菌落外现形态特征的差异而将其删除，必要是可挑取菌落培养物制成悬滴标本后加以观察。

2．.查氏培养基含有3％蔗糖，它能抑制大多数细菌的生长，而霉菌和放线菌能忍受高渗透压，故能在这种培养基上生长，所得菌数为霉菌和放线菌的菌数。

七、思考题

1.为什么说土壤是微生物最好的培养基？

2.如何进行土壤中的微生物的分离和计数？

实验八油烟污染物降解菌的分离

一、实验目的：

①掌握用稀释平板分离法分离可降解环境污染物的微生物；

②掌握用划线法分离微生物；

③掌握菌体分离的原理和方法。

二、实验原理：

油烟污染物由多种有害物质组成，不易于降解。

但在长期受油烟污染的土壤中存在着降解油烟的降解菌