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18医院微生物实验室生物安全
第二军医大学
第三附属医院
编号:
ehbh-glzd-sysaq
版次:
2
管理制度
生效日期:
2011.1.1
第1页共7页
微生物实验室生物安全管理制度
目录
1.前言
2.实验室生物安全规程
2.1.进入规定
2.2.个人防护
2.3.实验室工作区
3.实验室安全操作
3.1.标本的安全操作
3.2.实验室的基本安全操作
3.3.实验室的其他安全操作
4.实验室设备和仪器
4.1.生物安全柜
4.2.离心机
4.3.组织研磨器
4.4.冰箱与冰柜的维护和使用
5.实验室意外事件或事故处理
5.1.生物危害物溢出的处理
5.2.刺伤、切割伤或擦伤
5.3.经胃肠道摄入潜在感染性物质
6.实验室废弃物处理
6.1.培养基、组织、体液等废弃物处理
6.2.锐器盒处理
7.参考文献
1.前言
由于新的感染性病原体的不断涌现,抗生素的耐药性问题日益严重,新的诊断和治疗技术的应用,以及生物恐怖的潜在危险,提高实验室的生物安全再一次成为人们的关注点。
临床微生物实验室工作人员面临着职业暴露于感染性病原体的危险。
其中,最危险的操作是标本的处理和接种。
由于人员感染后处于亚临床表现或实验室管理层没有上报,实验室获得性感染的实际发生率可能比已知的多得多。
采用适当的生物安全防护可以将感染的危险性降至最低。
生物安全防护包括安全设备、个体防护装置和措施,实验室的特殊设计和建筑要求,严格的管理制度和标准化的操作程序及规程。
其中,规范的微生物学操作技术是实验室生物安全的基础,专门的实验设备仅仅是一种补充,绝不能替代正确的操作规范。
根据有关规定,东方肝胆外科医院临床微生物实验室属于二级生物安全水平实验室。
2.实验室生物安全规程
2.1.进入规定
2.1.1.在实验室入口处贴生物危害警告标志,见上图。
注明临床微生物、Ⅱ级生物安全水平、负责人吉强,电话;
2.1.2.未经许可,非工作人员不得进入实验室。
外来合作者、进修和学习人员在进入实验室之前必须经过部门负责人(高春芳)的批准;
2.1.3.实验室总门应保持关闭状态;
2.1.4.与实验室工作无关的动物不得带入实验室。
2.2.个人防护
2.2.1.工作服:
在实验室工作时,必须穿着工作服;
2.2.2.手套:
在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料的操作时,应戴上合适的手套。
脱手套后必须洗手。
用过的一次性手套应丢入感染性废物袋内(标有生物危险Ⅱ级标志的黄色垃圾袋);
2.2.3.洗手:
在处理完感染性材料后,以及在离开实验室前,都必须洗手。
手要完全抹上皂液,搓洗至少15秒钟,纸巾擦干或自然晾干;
2.2.4.其他防护:
当有可能受到喷溅物污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害时,必须戴合适的安全眼镜;
2.2.5.不得穿着实验室工作服离开实验室;
2.2.6.不得在实验室内穿露脚趾的鞋子;
2.2.7.禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜;
2.2.8.禁止在实验室工作区域内储存食品和饮料;
2.2.9.在实验室内用过的工作服不得和日常服装放在同一柜子内。
2.3.实验室工作区
2.3.1.实验室应保持清洁整齐,严禁摆放和实验无关的物品;
2.3.2.每天工作结束之后,必须用爱尔施牌消毒片(成分:
三氯异氰尿酸,每片含有效氯500mg,按每片1000ml水比例进行溶解)消毒工作台面。
用75%酒精消毒生物安全柜台面。
活性物质溅出后要随时消毒,消毒剂为爱尔施(1片/1000ml),严重污染时(血液等标本的污染),将6片爱尔施溶于1000ml水(3000ppm)用以消毒;
2.3.3.所有受到污染的材料、标本和培养物应废弃于感染性废物袋内,而生活垃圾应弃于黑色垃圾袋,不能混淆。
需要清洁再利用的材料,必须先经高压灭菌处理;
2.3.4.需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。
3.实验室操作技术
3.1.标本的安全操作
3.1.1.标本容器:
标本用防漏的有盖的塑料容器盛装,容器上贴标签。
化验单不能卷在容器外面,而是要分开放置;
3.1.2.标本接收:
在实验室专门的接种房间接收标本;
3.1.3.打开包装:
容器要在生物安全柜内打开。
容器有破碎或标本泄漏时,根据标本拒收SOP予以拒收,并填写拒收单。
3.2.实验室的基本安全操作
所有标本在生物安全柜内操作,要尽量减少气溶胶和微小液滴形成。
在工作台面放置一块浸有爱尔施消毒液的纱布,使用后按感染性废弃物处理。
表1.实验室的基本安全操作
感染性物质
传播途径
材料和操作
目标
正确的操作
经呼吸道吸入
接种针和环
避免被接种物洒落
微生物接种环的直径为2~3mm完全封闭,长度小于6cm以减小抖动
接种标本
避免产生气溶胶
电子加热器消毒接种环
不在培养基上冷却接种环
在培养基上划线
避免病原体溅起
轻轻划线
标本涂片
避免产生气溶胶
不直接倒在玻片上
痰液涂片干燥
避免产生气溶胶
不用明火烧
移液管
避免产生气溶胶
不能反复吹吸混合含有感染性物质的溶液
不需要排出最后一滴液体
经消化道摄入
移液管
避免经口摄入
严禁用口吸移液管
实验材料
避免经口摄入
严禁将实验材料置于口内
严禁舔标签
不在实验室内饮食和储存食品,嘴里不应有笔或口香糖等物品
皮肤和眼睛接触
戴手套
避免接触感染性物质
操作时应戴一次性手套,避免触摸口、眼及面部
锐器损伤
皮下注射针头
避免意外注入感染性物质
减少使用注射器和针头
用过的针头禁止折弯、剪断、折断、重新盖帽、从注射器取下,禁止用手直接操作
注射器不能用于移液
针头、玻片以及破碎的玻璃
避免意外受伤
丢弃在锐器盒中
血培养瓶
避免锐器损伤
针刺入瓶时注意安全
3.3.实验室的其他安全操作
3.3.1.血清分离
Ø操作时应戴手套及防护眼镜;
Ø血液和血清应当小心吸取,而不能倾倒。
严禁用口吸移液管;
Ø移液管使用后应完全浸入爱尔施中浸泡30min。
然后高压灭菌(121℃1-1.5bar20min),清洗消毒后备用;
Ø带有血凝块等的废弃标本管,在加盖后放入感染性废物袋在内高压灭菌;
Ø备爱尔施消毒剂清除喷溅和溢出标本。
3.3.2.装有冻干感染性物质安瓿的开启
Ø在生物安全柜内操作;
Ø首先用75%酒精清洁安瓿外表面;
Ø如果管内有棉花或纤维塞,可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹;
Ø用75%酒精浸泡的纱布将安瓿包起来以保护双手,然后手持安瓿从标记的锉痕处打开;
Ø将顶部小心移去,放入锐器盒内;
Ø如果塞子仍然在安瓿上,用消毒镊子除去,弃于感染性废物袋内;
Ø缓慢向安瓿中加入营养肉汤以重悬冻干物,避免出现泡沫。
4.实验室设备和仪器
4.1.生物安全柜(ClassⅡ,LABCONCO)
4.1.1.操作步骤
Ø开启电源和内外风扇;
Ø在机器预热时将所有必需的物品置于安全柜内;
Ø准备一块浸有75%酒精的沙布;
Ø开始工作前及完成工作后,让安全柜工作5min来完成“净化”过程;
Ø手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约一分钟,以使安全柜调整完毕才开始对物品进行处理;
Ø接种环灭菌时,用电子加热器,而不应使用明火;
Ø在实验结束时,生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染,标本和培养基移出安全柜;
Ø每天实验结束时,用75%酒精擦拭工作台面、四壁及玻璃的内外侧等部位来清除污染;
Ø有标本溢出等污染时,用爱尔施消毒,然后用水再次进行擦拭。
4.1.2.注意事项
Ø每次开始实验之前将所需物品置于安全柜内,以尽可能减少双臂进出次数;
Ø双臂应该垂直地缓慢进出前面的开口;
Ø尽量减少操作者身后的人员活动;
Ø生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板;
Ø在生物安全柜内操作时,不能进行文字工作;
ØⅡ级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器设备或其他物品阻挡;
Ø所有物品应尽可能地放在靠近工作台后缘的位置,但不阻挡后部格栅;
Ø可产生气溶胶的设备(如混匀器、离心机等)应靠近安全柜的后部放置;
Ø生物危害性废弃物袋放在安全柜内右侧,袋中放入爱尔施消毒剂;
Ø房间中有人时要关闭紫外灯,以保护眼睛和皮肤,避免因不慎暴露而造成伤害;
Ø安全柜一直维持运行状态(8小时工作期间),不能反复开关;
Ø当气流警报响起时,立刻停止工作,并报告生物安全负责人(吉强)。
4.2.低温超速离心机
4.2.1.按照操作手册操作离心机;
4.2.2.正确放置十字轴和离心桶;
4.2.3.在使用前检查离心管和盛放离心标本的容器是否破损;
4.2.4.用于离心的试管和标本容器应当牢固盖紧;
4.2.5.离心桶的装载、平衡必须在生物安全柜内进行;
4.2.6.离心桶和十字轴按重量配对,并在装载离心管后正确平衡;
4.2.7.离心管不能装得过满,液面距离心管口留出一定空间,否则会导致漏液;
4.2.8.空离心管用蒸馏水来平衡;
4.2.9.每次使用后,要用75%酒精清除离心桶、转子和离心机腔的污染;
4.2.10.每天检查离心机转子部位的腔壁是否被污染或弄脏,离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕。
4.3.组织研磨器
4.3.1.戴上手套并用含75%酒精的纱布包住玻璃研磨器;
4.3.2.在生物安全柜内进行组织研磨器的打开和操作。
4.4.冰箱与冰柜的维护和使用
4.4.1.冰箱和低温冰箱通常每半年除霜和清洁,如有特殊情况应立即除霜和清理,清理出在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。
清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护;
4.4.2.储存在冰箱内的所有容器清楚地标明内装物品的名称、储存日期和储存者的姓名。
未标明的或废旧物品应高压灭菌后丢弃;
4.4.3.由微生物室组长(吉强)保存一份冻存物品的清单;
4.4.4.冰箱内不能放置易燃溶液。
5.实验室意外事件或事故处理
工作人员在操作过程中发生意外,如针刺和切伤、皮肤污染、感染性标本溅及体表和口鼻眼内等视为安全事故。
出现生物危害物的溢出、事故以及明显或可能暴露于高传染性物质时,必须向部门负责人(高春芳主任)报告。
实验室保存这些事件或事故的书面报告。
生物危害物的溢出是指具有高度传染性或危害性的感染性物质(如结核分枝杆菌)的明显溢出(如标本打翻或离心管破裂)。
5.1.生物危害物的溢出处理
5.1.1.潜在危害性气溶胶的释放(在生物安全柜以外)
Ø所有人员必须立即撤离相关区域;
Ø立即报告部门负责人;
Ø为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降,在1h内严禁人员入内;
Ø门口张贴“禁止进入”的标志,过了相应时间后,在生物安全负责人(吉强)的指导下来清除污染;
生物危害物溢出清除程序:
1)戴手套、口罩,穿防护服,必要时进行脸和眼睛防护;
2)用布覆盖并吸收溢出物;
3)向布上倾倒爱尔施消毒剂(6片溶于1000ml水),并覆盖周围区域;
4)使用消毒剂时,从溢出区域的外围开始,朝向中心进行处理;
5)作用60min后,将布以及污染材料清理掉。
如果含有碎玻璃或其他锐器,玻璃碎片应用镊子清理,使用簸箕来收集处理过的物品,并将它们置于锐器盒中以待处理;
6)再次用消毒剂擦拭污染区域(如有必要,重复第2~5步);
7)污染材料及用于清理的布和抹布放入感染性废物袋内;
8)如果用簸箕清理破碎物,应当将其放在消毒液内浸泡;
9)如果实验表格或其他打印或手写材料被污染,应将这些信息复制,并将原件置于感染性废物袋内;
10)在成功消毒后,报告部门负责人目前溢出区域的清除污染工作已经完成。
5.1.2.潜在危害性气溶胶的释放(在生物安全柜内)
Ø在安全柜处于工作状态下立即进行清理;
Ø使用爱尔施消毒剂(1000ml/6片),并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成,作用60min,再用水擦拭干净;
Ø所有接触溢出物品的材料都要用75%酒精消毒和/或高压灭菌。
5.1.3.未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂
Ø关闭机器电源,让机器密闭30min使气溶胶沉积;
Ø通知生物安全负责人(吉强);
Ø戴厚橡胶手套操作;
Ø破碎的离心管、离心桶、十字轴和转子都放在75%酒精内;
Ø未破损的带盖离心管应放在另一个有75%酒精的容器中,然后回收;
Ø离心机内腔用75%酒精擦拭;
Ø清理时所使用的全部材料都按感染性废弃物处理,放入感染性废物袋内。
5.2.刺伤、切割伤或擦伤
5.2.1.受伤人员用流水清洗双手和受伤部位;
5.2.2.使用碘伏进行皮肤消毒,执行锐器伤处理流程;
5.2.3.记录受伤原因和相关的微生物,并应保留完整的医疗记录。
5.3.经胃肠道摄入潜在感染性物质
5.3.1.受害人脱下防护服;
5.3.2.去医院门急诊进行相应的处理;
5.3.3.报告摄入材料的鉴定和事故发生的细节,并保留完整的医疗记录。
6.废弃物处理
废弃物处理的原则是所有感染性物品必须在实验室内清除污染,应采用高压灭菌方法。
6.1.培养基、组织、体液等废弃物处理
6.1.1.放在感染性废物袋内储存、运输及消毒灭菌;
6.1.2.在丢弃之前高压灭菌消毒;
6.1.3.高压灭菌后由暂存点工作人员统一回收;
6.1.4.运送前必须检查医疗废物收集袋或容器封口是否严密,是否破损、泄漏,如有破损、泄漏应加套防漏感染性废物袋确保运送途中安全;
6.1.5.运输推车采用爱尔施擦拭消毒,上、下午工作结束后各一次。
6.2.锐器盒处理
6.2.1.锐器盒采用有资质的厂家所生产的标准利器盒;
6.2.2.锐器盒盛装废物3/4时即封口;
6.2.3.由暂存点工作人员回收至东方肝胆外科医院废物集中储存点。
参考文献:
2004年WHO《实验室生物安全手册》(第三版)
2004年《中华人民共和国传染病防治法》(修订版)
2004年国务院《病原微生物实验室生物安全管理条例》
2004年卫生部《实验室-生物安全通用要求》(第一版)
2006年卫生部《医院感染管理办法》
制定日期
2009.3
修订次数
1
修订日期
2011.1
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