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鲍曼不动杆菌耐药性与β内酰胺酶基因研究
鲍曼不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究
赵玉杰,陈栎江,周翠,周铁丽,郭美艳,曹建明
【摘要】目的:
了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和β-内酰胺酶基因散布情形。
方式:
采纳VITEK-60全自动细菌分析仪对215株鲍曼不动杆菌临床分离株进行药敏检测,并通过特异性的PCR和DNA序列测定方式检测实验菌的β-内酰胺酶相关基因。
结果:
鲍曼不动杆菌对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的灵敏率最高,为%,对亚胺培南、美洛培南的灵敏率别离为%、%,对其他药物的灵敏率均很低,对三代头孢的灵敏率均低于20%;215株鲍曼不动杆菌中,27株扩增到超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因,占%,包括TEM16株,占%,SHV4株,占%,CTX-M-14株,占%,OXAⅡ3株,占%,经测序分型别离为TEM-1型、SHV-1型、OXA-21型、CTX-M-15型和CTX-M-22型,未检测到VEB、GES、CTX-M-二、CTX-M-八、CTX-M-九、TLA、IBC、OXA-10、OXAⅠ、OXAⅢ、OXAⅣ、OXAⅤ等基因。
129株扩增到头孢菌素酶(AmpC)基因,占%,其中ADC阳性82株,占%,DHA、EBC、ACC、CIT基因阳性株别离为35株(占%)、8株(占%)、3株(占%)和1株(占%),未检测到MOX、FOX、CARB基因;215株菌株中检出OXA-23阳性98株,占%。
结论:
临床分离鲍曼不动杆菌耐药严峻,其携带TEM、ADC、DHA、OXA-23等多种β-内酰胺酶相关基因。
【关键词】鲍曼不动杆菌;耐药性;β-内酰胺酶;基因
Abstract:
Objective:
Tounderstandthedrug-resistanceandthedistributionofβ-lactamases genesinAcinetobacterbaumannii.Methods:
AntimicrobialsusceptibilitywastestedwithVitek60-AMS.Genotypesofβ-lactamasewereanalysedwithpolymerasechainreaction(PCR)andverifiedbyDNAsequencing.Results:
Ofthe215Acinetobacterbaumanniistrains,%was susceptibletocefoperazone/sulbactam,%and%weresusceptibletoimipenemand meropenem,respectively.Butthesestrainsexihitedlowersusceptibletootherantibiotics, especiallytothirdgenerationcephalosporins(<20%);ofthe27ESBLspositivestrains,TEM-type wasencodedin16%),SHV,CTX-M-1,OXAⅡtypeswereencodedin4%),4%)and3%),subtypeswereTEM-1,SHV-1,CTX-M-15,CTX-M-22andOXA-21.ThisstudydidnotdigoutVEB,GES,CTX-M-2,CTX-M-8,CTX-M-9,TLA,IBC,OXA-10,OXAⅠ,OXAⅢ,OXAⅣandOXAⅤgenesinallstrains.AmpCwasencodedin129%),includingADC82%),DHA35%),EBC8%),ACC3%)andCIT1%),respectively.NoMOX,FOXandCARBgenesweredetected.OXA-23wasencodedin98%)in215strains.Conclutions:
ThemultidrugresistanceofAcinetobacterbaumanniifromclinicalisolationisaseriousissue.Andtheseisolationsharborallkindsofβ-lactamaseresistancegenes,includingTEM,ADC,DHA,OXA-23andsoon.
Keywords:
Acinetobacterbaumannii;resistance;β-lactamases;gene
最近几年来,鲍曼不动杆菌的耐药问题日趋严峻且受到普遍关注,多重耐药鲍曼不动杆菌已 成为医院感染的重要病原菌,其最重要耐药机制为细菌产β-内酰胺酶[1-2]。
迄今为止,在该 菌中已发觉包括SHV、TEM、CTX-M、PER、ADC、VEB、OXA-23等多种β-内酰胺酶基因[1-5],但各国家和地域发觉或流行的β-内酰胺酶型别不同,致使细菌的耐药特性也不尽相同,为了解温州地域鲍曼不动杆菌的耐药特点和基因散布特点,咱们对温州医学院附属第一医院临床分离的215株鲍曼不动杆菌进行了β-内酰胺酶基因研究,报告如下。
1材料和方式
菌株来源与鉴定
215株鲍曼不动杆菌为温州医学院附属第一医院2007年6月-2020年6月临床送检各类标本中持续分离的非重复菌株,所有菌株通过VITEK-60全自动细菌分析仪鉴定确认。
标本来源包括痰液200株,引流液4株,血液3株,伤口3株,导管2株,敷料、腹水和眼分泌物各1株。
质控菌株:
铜绿假单胞菌ATCC27853购自卫生部临检中心。
抗菌药物灵敏性实验
氨苄西林、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、美洛培南、环丙沙星、庆大霉素、氨曲南、头孢唑林、头孢他啶和头孢曲松采纳VITEK-60细菌鉴定药敏系统检测;头孢哌酮/舒巴坦采纳琼脂扩散法检测。
药敏结果按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)规那么判定。
仪器设备
VITEK-60型全自动细菌分析仪,PCR扩增仪,低温冰箱,低温离心机,隔水式恒温培育箱,细菌比浊仪等。
超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性产物送北京六合华大基因股分测序。
DNA模板制备
采纳煮沸法。
将细菌在LB培育基中增菌培育12h,离心后去上清,再用去离子水洗净细菌中残留的LB后煮沸15min,冰敷5min使DNA复性,12000r/min离心3min,上清液即为所需的DNA模板。
PCR及测序引物
10种β-内酰胺酶基因检测均利用PCR法,靶基因引物序列和目的产物的长度见表1,各类靶基因PCR扩增体系均为:
每反映体系引物P一、P2均为μL(10mmol/L),dNTPsμL(1mmol/L),10倍缓冲液(KCl10mmol/L,(NH4)2SO48mmol/L等不含Mg2+)μL,μL,TaqDNApolμL,超纯水μL,模板液2μL,总反映体积25μL。
PCR反映参数如下:
94℃预变性5min,94℃变性1min,50℃退火30s,72℃延伸60s,共循环35次,最终72℃延伸10min。
扩增产物在%琼脂糖凝胶中,电泳终止后在紫外凝胶成像仪下拍照。
ESBLs阳性产物送北京六合华大基因股分测序。
核苷酸序列测定分析
选取部份ESBLs阳性产物送北京六合华大基因测序,方式按sanger双脱氧结尾终止法进行正反向测序,结果在GenBank网上查对照较。
2结果
抗菌药物灵敏实验结果
215株鲍曼不动杆菌对11种临床经常使用抗菌药物的灵敏实验结果见表2。
β-内酰胺酶编码基因PCR扩增结果
215株鲍曼不动杆菌中,27株(占%)扩增到ESBLs基因;129株(占%)扩增到AmpC基因。
ESBLs和AmpC均阳性的菌株12株,其中1株菌同时携带CTX-M-1和OXAII基因。
另外,98株(占%)携带OXA-23基因。
部份β-内酰胺酶基因PCR扩增产物电泳图见图1和图2。
PCR产物测序结果
TEM阳性产物与参考序列ACX83572100%同源为TEM-1,SHV阳性产物与参考序列100%同源为SHV-1,CTX-M-1阳性产物3个与GQ385309100%同源为CTX-M-15,而另一株与GU125665100%同源为CTX-M-22,OXAII阳性产物与CAA71699100%同 源为OXA-21,本批菌株中未发觉新的β-内酰胺酶基因型。
3讨论
鲍曼不动杆菌是医院感染最重要的病原菌之一,可引发呼吸道、血液、伤口、尿道等多 部位和脏器的感染。
本研究215株鲍曼不动杆菌中有200株自痰标本中分离,与菌株易在呼吸 道定植,且耐药严峻,难以清除有关。
本研究结果显示,鲍曼不动杆菌的耐药性相当严峻。
仅对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮/舒巴坦的灵敏性较高,超过50%,推测与舒巴坦对鲍曼不动杆菌的直接杀灭作用和其通过抑酶作用爱惜β-内酰胺酶类药物的功能有关[6];对三代头孢菌素的耐药性最严峻,耐药率>80%,与近些年来三代头孢菌素的普遍利用有关;值得关注的是,菌株对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美洛培南耐药率也很高,而且呈逐年上升趋势,与本地域分离鲍曼不动杆菌高产碳青霉烯酶OXA-23有关[3]。
目前推荐临床上利用的抗菌药物仍然是含酶抑制剂类药物如头孢哌酮/舒巴坦和碳青酶烯类药物亚胺培南,因此,增强其耐药机制等研究,指导临床用药,操纵耐药性的进展十分重要。
产β-内酰胺酶是鲍曼不动杆菌耐药的要紧机制[1-2,7],而且在鲍曼不动杆菌中已发觉多种β-内酰胺酶及相关基因,国内有TEM-一、SHV-1八、PER-一、ADC、OXA-23[1,3,7]等发觉。
国外报导,有PER-一、TEM-一、VEB-一、OXA-23、CTX-M-2[4-5,8-9]等。
ESBLs和AmpC酶是介导革兰阴性杆菌耐药的最要紧的两种酶[10]。
ESBLs与鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药率显著相关,产ESBLs菌感染的患者通常大量利用过超广谱头孢菌素[2],本次调查分离的鲍曼不动杆菌产ESBLs率为%。
因此,在临床用药时,必需操纵超广谱头孢菌素利用的疗程和用量。
AmpC酶是由革兰阴性杆菌产生的能使包括第三代头孢菌素在内的许多β-内酰胺类抗生素失活的头孢菌素酶,即可由染色体介导也能够由质粒介导,由于其优先水解头孢菌素而被称为头孢菌素酶,本实验中高产ADC、DHA等AmpC酶成为鲍曼不动杆菌多重耐药的重要缘故之一,ADC基因%的高检出率值得重视,ADC型β-内酰胺酶为不动杆菌属特有的AmpC酶,距今发觉的ADC亚型已超过30种,鲍曼不动杆菌所产的ADC型AmpC酶能水解青霉素类、第三、第四代头孢菌素类,克拉维酸和他唑巴坦对其抑制作用很弱,但可被舒巴坦所灭活,因此,在临床用药中,能够用含舒巴坦的复合药医治[7]。
本组实验中OXA-23基因的产率也很高,携带OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床经常使用抗菌药的耐药率均较高,OXA-23酶是第一个从鲍曼不动杆菌中分离出来的D类碳青霉烯酶,其位于质粒或染色体上,其连年来不断的进化突变作用,起到了重要的生物化学作用,可能是OXA酶对碳青霉烯类抗生素耐药进展的一个重要因素。
本研究中,临床分离的215株鲍曼不动杆菌携带至少10种β-内酰胺酶基因,是致使鲍曼 不动杆菌多重耐药的要紧缘故。
可是,其中有%的菌株超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶和 OXA-23基因均阴性,三代头孢菌素仍然高水平耐药,推测与细菌对β-内酰胺类抗生素耐药 的其他机制,如膜孔蛋白缺失、青霉素结合蛋白(PBP)的改变、主动外排机制等[3]参与有 关。
另外,不同β-内酰胺酶对抗菌药物的水解能力不同、基因定位和基因转移情形等还有 待于进一步研究,以从分子水平更好地了解细菌的耐药机制。
【参考文献】
[1]张哲,蒋晓飞,吕元.鲍氏不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因型研究[J].中华医院感染学杂志,2007,17(10):
1189-1192.
[2]李蓉,李文林,石小玉.产ESBLs鲍鳗不动杆菌的耐药特性、质粒谱及耐药基因型[J].中国抗生素杂志,2006,31(4):
202-206.
[3]周铁丽,林小玲,冯红军,等.鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药机制研究[J].中华医院感染学杂志,2007,17(4):
375-378.
[4]NaasT,BogaertsP,BauraingC,etal.EmergenceofPERandVEBextended-spectrumbeta-lactamasesinAcineto-bacterbaumanniiinBelgium[J].JAntimicrobChemother,2006,58
(1):
178-182.
[5]NaganoN,NaganoY,CordevantC.NosocomialTransmis-sionofCTX-M-2β-lactamase-producingAcinetobacterbaumanniiinaneurosurgeryward[J].JClinMicrobiol,2004,42(9):
3978-3984.
[6]时露,段秀杰.鲍曼不动杆菌耐药机制及药物医治研究进展[J].中国公共卫生,2020,26(3):
379-381.
[7]钱小毛,糜祖煌.鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因型研究及ADC型AmpC酶基因的发觉[J].中华医院感染学杂志,2020,18(4):
470-473.
[8]FeizabadiMM,DelfaniS,RajiN,etal.Distributionofbla(TEM),bla(SHV),bla(CTX-M)genesamongclinicaliso-latesofKlebsiellapneumoniaeatLabbafinejadHospital,Tehran,Iran[J].MlicrobDrugResist,2020,16
(1):
49-53.
[9]KohlenbergA,BrummerS,HigginsPG,etofcarbapenem-resistantAcinetobacterbaumanniicarryingthecarbapenemaseOXA-23inaGermanuniversitymedicalcentre[J].JMedMicrobiol,2020,58(11):
1499-1507.
[10]周铁丽,陈俐丽,潘钦石.革兰阴性杆菌中超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的检测与分析[J].温州医学院学报,2003,33(6):
386-388.
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