微生物检验 14.docx
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微生物检验14
微生物检验(14)
临床医学检验考试辅导《微生物检验》肠杆菌科及检验●考点概述概念;命名与分类原则;共同特点;自然与人体内的分布;微生物学检查方法;临床意义。
埃希菌属.沙门菌属.志贺菌属.变形杆菌属.耶尔森菌属及其他肠杆菌科细菌。
生物学性状;微生物学检验;临床意义。
【内容讲解】
一.概述(共性)肠杆菌科是由多个菌属组成,G-杆菌,生物学性状相似。
大多数肠道杆菌属于正常菌群。
当机体免疫力降低或侵入肠道外组织时成为条件致病菌而引起疾病。
部分为致病性细菌。
(一)分类肠杆菌科细菌的种类繁多。
主要根据细菌的形态.生化反应.抗原性质以及核酸相关性进行分类。
根据《伯杰系统细菌学手册》(1984年)将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属.志贺菌属.沙门菌属.枸橼酸杆菌属.克雷伯菌属.肠杆菌属.沙雷菌属.哈夫尼亚菌属.爱德华菌属.普罗威登斯菌属.变形杆菌属.摩根菌属.耶尔森菌属等。
(二)生物学特性
1.形态与染色G-,杆菌,大小为(
1.0~
6.0)μm×(0.3~
1.0)μm。
多数有周鞭毛(除志贺菌属.克雷伯菌属.鼠疫耶尔森菌和EIEC),无芽胞,少数菌属细菌可形成荚膜。
2.培养需氧或兼性厌氧;营养要求不高;普皿和麦康凯培养基:
中等大小.表面光滑的菌落;液体培养基:
混浊生长。
3.生化反应发酵葡萄糖产酸.或产酸产气;乳糖发酵试验:
非致病菌+,致病菌发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以鉴别;②肠杆菌科细菌的分群,多采用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验,将肠杆菌科的细菌分为三个类群;③选择生化反应进行属种鉴别。
KIA和MIU将细菌初步定属。
(2)最后鉴定:
根据生化反应的结果初步定属.种,再用诊断血清做凝集反应才能作出最后判断。
二.埃希菌属5个种:
大肠埃希菌.蟑螂埃希菌.弗格森埃希菌.赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。
临床最常见的是大肠埃希菌。
(一)生物学性状
1.形态与染色G-,短杆菌,(
1.0~
3.0)μm×(0.4~0.7)μm。
多数有周鞭毛,有菌毛,有荚膜或微荚膜。
2.培养特性兼性厌氧菌;营养要求不高。
普通营养肉汤:
浑浊生长。
普通营养琼脂:
圆形,凸起,边缘整齐,灰白色的S型菌落,直径2~3mm。
血琼脂平板:
少数菌株产生β-溶血环。
伊红亚甲蓝琼脂:
菌落呈蓝紫色并有金属光泽(发酵乳糖)。
麦康凯和SS琼脂:
粉红色菌落。
3.生化反应发酵葡萄糖.乳糖.麦芽糖和甘露醇产酸产气,分解蔗糖因菌株而异,尿素酶试验阴性。
吲哚.甲基红.V-P.枸橼酸盐试验(IMViC试验)为++。
克氏双糖铁琼脂(KIA):
斜面和底层均产酸产气,H2S(-)。
动力-吲哚-尿素(MIU)培养基为++,短小杆菌,(2~3)μm×(0.5~0.7)μm,无荚膜,无芽胞,无鞭毛,有菌毛。
2.培养特性需氧或兼性厌氧;液体培养基:
呈混浊生长;普通琼脂平板和SS培养基:
中等大小.半透明的光滑型菌落(宋内志贺菌可形成扁平.粗糙的菌落)。
3.生化反应氧化酶试验阴性,动力阴性,不产生赖氨酸脱羧酶;KIA:
K/A,H2S(-);IMViC:
-.+.-.R变异及耐药性变异。
(二)临床意义致病物质:
侵袭力:
菌毛粘附于肠粘膜上皮细胞,诱导细胞内吞。
内毒素:
破坏肠粘膜;肠壁通透性;肠壁植物神经腹痛,腹泻,里急后重,粘液脓血便。
外毒素(志贺毒素,ST):
肠毒素活性;细胞毒活性;神经毒性。
所致疾病:
细菌性痢疾,简称菌痢。
1.急性菌痢。
2.中毒性菌痢。
3.慢性菌痢。
传染源为病人和带菌者,经粪口传播。
(三)微生物检验
1.标本采集尽可能在发病早期及治疗前采集新鲜粪便,选择脓血便或黏液便,必要时可用肛拭子采集。
2.检验方法及鉴定鉴别:
动力乳糖靛基质赖氨酸黏液酸.醋酸盐.枸橼酸盐志贺菌+大肠埃希菌++++FO诊断血清志贺菌人传播,污染水和食物可引起暴发流行。
四.沙门菌属
(一)生物学性状
1.形态与染色G-,直杆菌,(0.7~
1.5)μm×(
2.0~
5.0)μm,无芽胞,无荚膜,周鞭毛(除鸡沙门菌),多数有菌毛。
2.培养特性营养要求不高;液体培养基:
均匀混浊生长;SS琼脂和麦康凯琼脂培养基:
约2~4mm的透明或半透明菌落,对胆盐耐受。
产H2S者在SS琼脂上形成黑色中心菌落。
3.生化反应不能发酵乳糖(除亚利桑那菌),不产生靛基质,不分解尿素,甲基红反应阳性,V-P试验阴性。
大多数菌株产生H2S,发酵葡萄糖产酸产气(伤寒沙门菌产酸不产气)。
4.抗原结构O抗原:
有58种,以阿拉伯数字依次标记。
H抗原:
H抗原是定型的依据。
H抗原有两相,第一相为特异性抗原,用a.b.c……表示;第二相为共同抗原,用
1.2.3……表示。
表面抗原:
已证实沙门菌属有Vi.M和5抗原三种。
5.变异性S~R变异H~O变异相位变异:
具有双相H抗原(第Ⅰ相为特异相,第Ⅱ相为非特异相)的沙门菌变成只有其中某一相H抗原的单相菌,称相位变异。
V~W变异:
失去全部Vi抗原的变异。
(二)致病性致病因素:
侵袭力.内毒素和肠毒素。
所致疾病:
1.肠热症即伤寒与副伤寒病。
由伤寒与副伤寒沙门菌所引起的慢性发热症状。
为法定传染病之一。
2.食物中毒
3.慢性肠炎
4.败血症
5.沙门菌的局部感染如颈部.腰部等。
(三)微生物检验
1.标本采集根据不同疾病采取不同的标本进行分离与培养。
肠热症的第一.二周采血液,第二.三周采粪便与尿液。
整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。
食物中毒采集食物与粪便。
2.检查方法及鉴定最后鉴定:
沙门菌血清学鉴定主要借助于沙门菌O抗原多价血清与O.H.Vi抗原的单价因子血清。
(三)微生物检验
2.检查方法及鉴定血清学诊断肥达试验用已知的伤寒沙门菌O.H抗原,副伤寒甲.乙H抗原稀释后与被检血清作定量凝集试验,以检测患者血清中抗体的含量,来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热症并判别沙门菌的种类。
(四)防治原则预防沙门菌属细菌主要措施:
加强饮食卫生,防止污染食品及水源经口感染,携带者的积极治疗,皮下注射死菌苗或口服减毒活菌苗。
临床治疗:
可选择的抗生素有氯霉素.氟喹诺酮类.氨苄西林.复方磺胺甲恶唑.三代头孢等。
五.变形杆菌属.普罗威登斯菌属及摩根菌属这三个属的细菌为肠道寄居的正常菌群,在一定条件下能引起各种感染,也是医源性感染的重要条件致病菌。
(一)生物学特性
1.形态与染色G-,杆菌,两端钝圆,有明显的多形性,呈球状或丝状;周身鞭毛(摩根菌属的部分菌株在30℃以上培养条件下不形成鞭毛),无芽胞,无荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧,营养要求不高,生长温度10~43℃。
营养琼脂和血琼脂平板:
普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长现象。
产黏变形杆菌具有产生黏液状薄膜层的能力及溶血性质。
普罗威登斯菌和摩根菌无迁徙生长现象。
含有胆盐的培养基:
菌落呈扁平.圆形.半透明。
含有铁或铅离子的培养基:
产硫化氢菌株菌落中心呈黑色。
SS培养基:
与沙门菌.志贺菌相似的菌落特征。
液体培养基:
迅速生长,早期培养物呈混浊,有部分沉淀。
3.生化反应三属菌共同特点是氧化酶阴性,苯丙氨酸脱氨酶阳性的革兰阴性杆菌。
属间鉴别:
变形杆菌属普罗威登斯菌属摩根菌属迁徙生长+硫化氢产生+液化明胶+脂酶+鸟氨酸脱羧酶+枸橼酸盐利用变形杆菌属的种鉴别:
普通变形杆菌奇异变形杆菌产黏变形杆菌靛基质+麦芽糖++++
(二)致病性
1.变形杆菌属普通变形杆菌和奇异变形杆菌引起尿道.创伤.烧伤的感染。
普通变形杆菌还可引起多种感染及食物中毒;奇异变形杆菌还可引起婴幼儿肠炎。
产黏变形杆菌尚无引起人类感染的报道。
外-斐(Weil-Felix)反应:
普通变形杆菌OX19.OX
2.OXk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原,是用以诊断某些立克次体病的依据。
2.普罗威登斯菌属本属菌可引起烧伤.创伤与尿道感染。
3.摩根菌属本属细菌为医源性感染的重要病原菌之一。
(三)微生物检验
1.标本采集采集尿液.脓汁.伤口分泌物及婴儿粪便等。
2.检验方法及鉴定
(1)直接涂片
(2)分离培养:
接种于血琼脂平板和麦康凯或伊红亚甲蓝(EMB)琼脂平板;或SS琼脂和麦康凯或EMB琼脂平板上。
变形杆菌属在血琼脂上呈迁徙生长,在肠道菌选择培养基上形成不发酵乳糖菌落,在SS琼脂上常为有黑色中心的菌落。
(3)鉴定六.耶尔森菌属耶尔森菌属包括11个种;其中鼠疫耶尔森菌.假结核耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌与人类致病有关。
(一)鼠疫耶尔森菌
(二)小肠结肠炎耶尔森菌
(三)假结核耶尔森菌
(一)鼠疫耶尔森菌俗称鼠疫杆菌,是烈性传染病鼠疫的病原菌。
鼠疫是自然疫源性传染病,通过直接接触染疫动物或节肢动物叮咬而感染。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,杆菌,短而粗,两端钝圆,两极浓染,(
1.0~
2.0)μm×(0.5~0.7)μm。
有荚膜,无鞭毛,无芽胞。
(2)培养特性:
需氧和兼性厌氧。
最适生长温度是28~30℃,培养基最适pH为
6.9~
7.1。
培养16~18h,用显微镜观察可见一层形状不一,浅灰色小菌落,这是鼠疫耶尔森菌培养初期的菌落特征(鉴定意义)。
培养24~48h后可形成直径0.1~0.2mm,圆形,中心突出,透明的浅灰色小菌落。
液体培养基:
形成絮状沉淀和菌膜。
底部絮状沉淀堆积呈“钟乳石”状。
(3)生化反应:
KIA:
K(A)/A,H2S(-)MIU:
-.-.-
2.微生物检验标本采集:
主要采集血液.痰和淋巴结穿刺液。
检验方法及鉴定:
注:
鼠疫耶尔森菌为甲类病原菌,传染性极强,故应严格遵守检验操作规程,要求实验室有隔离设施,防鼠.防蚤和严密的个人防护措施;用过的实验器材及物品随时消毒处理。
直接涂片检查;分离培养;鉴定;最后鉴定(①噬菌体裂解试验;②动物试验;③免疫学方法)。
(二)小肠结肠炎耶尔森菌
1.生物学性状
(1)形态与染色菌体大小为(
1.0~
2.0)μm×(0.5~
1.0)μm,25℃培养时形成周鞭毛,呈翻滚旋转状运动,37℃培养无动力,无芽胞,无荚膜的革兰阴性球杆菌。
(2)培养特性需氧或兼性厌氧,4~40℃均能生长,最适生长温度为20~28℃。
血琼脂平板上,形成直径为1~2mm,圆形光滑,凸起的菌落。
麦康凯培养基上生长,形成不发酵乳糖的无色.透明或半透明.扁平.较小的菌落。
SS琼脂板上生长不良。
液体培养基中呈混浊生长,液体表面可形成白色菌膜或有沉淀生成。
(3)生化反应:
葡萄糖和蔗糖产酸不产气,绝大多数菌株不发酵乳糖,硫化氢阴性,脲酶阳性,靛基质不定。
VP试验25℃阳性,37℃阴性,鸟氨酸脱羧酶阳性。
2.致病性
(1)致病因素:
侵袭力和肠毒素。
(2)所致疾病:
人畜共患病,动物感染后多无症状,通过消化道传播引起人类肠道感染性疾病。
小肠结肠炎.末端回肠炎.胃肠炎.阑尾炎和肠系膜淋巴结炎。
除肠道感染外尚可发生败血症,结节性红斑及关节炎等。
3.微生物检验
(1)标本采集:
标本来自被检者粪便.血液.尿液.食物或脏器组织等。
(2)检验方法及鉴定:
1)分离培养:
粪便标本可直接接种于麦康凯.NyE(耶尔森选择性琼脂)或SS琼脂。
2)鉴定:
30℃以下动力(+)脲酶(+)
(三)假结核耶尔森菌啮齿动物家畜和禽类致病,并通过污染食物导致人类感染。
人类感染少见,偶见肠道感染及肠系膜淋巴结炎。
菌体呈球形或短杆形,两端浓染。
25℃培养有周鞭毛,有动力,37℃培养无动力。
兼性厌氧,最适生长温度30℃,pH
6.0~
8.0。
菌落:
圆形,中心凸起,呈颗粒状,灰黄色,半透明的菌落。
血琼脂平板上不溶血,SS琼脂上不生长,能在含胆盐培养基或麦康凯培养基上生长。
在液体培养基中呈均匀浑浊生长者为光滑型菌株,沉淀生长为粗糙型菌株。
七.肠杆菌科的其他菌属在临床感染标本中具有较高的分离率,大多属于条件致病菌。
枸橼酸杆菌属克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属枸橼酸杆菌属包括弗劳地枸橼酸杆菌.异型枸橼酸杆菌和无丙二酸盐枸橼酸杆菌三个种,属正常菌群成员。
1.生物学性状
(1)形态与染色:
G-,直杆状,无荚膜,无芽胞,具有周鞭毛。
(2)培养特性:
需氧或兼性厌氧,营养要求不高。
在血液琼脂上的菌落不溶血,在肠道选择培养基上发酵乳糖,在液体培养基中呈混浊生长。
(3)生化反应:
靛基质硫化氢丙二酸盐弗劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌+半乳糖苷酶赖氨酸脱羧酶枸橼酸盐利用枸橼酸杆菌属+/+++爱德华菌属2)种的鉴别:
根据产生靛基质.硫化氢.丙二酸盐与否鉴别。
(二)克雷伯菌属本属细菌共有7个种,引起的医院感染日见增多,其中以肺炎克雷伯菌最为多见。
产酸(催娩)克雷伯菌次之。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,卵圆形或球杆状,成双排列,菌体外有明显荚膜,无鞭毛,无芽胞。
(2)培养特性:
需氧或兼性厌氧,营养要求不高。
在血琼脂上形成圆形,凸起,灰白色,不溶血的粘液性菌落。
有时菌落呈现黏液型,用接种环挑取时呈长丝状。
在肠道菌选择培养基中为乳糖发酵型菌落。
在液体培养基中呈混浊生长,可形成菌膜与黏性沉淀物。
(3)生化反应:
触酶阳性.脲酶阳性.氧化酶阴性.鸟氨酸脱羧酶阴性。
其中动力和鸟氨酸脱羧酶阴性是本菌的最大特点。
2.致病性肺炎克雷伯菌肺炎亚种引起婴儿肠炎.肺炎.脑膜炎.腹膜炎.外伤感染.败血症和成人医源性尿道感染。
臭鼻克雷伯菌引起臭鼻症。
鼻硬节克雷伯菌引起鼻腔.咽喉和其他呼吸道的硬节病。
催娩克雷伯菌可引起呼吸道和泌尿道感染.创伤感染与败血症等。
(三)肠杆菌属
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,短而粗的杆菌,有周鞭毛,部分菌株有荚膜,无芽胞。
(2)培养特性:
需氧或兼性厌氧,最适温度为30℃,营养要求不高。
在普通琼脂上形成大而湿润的黏液状菌落;在血琼脂板上不溶血;肠道菌选择培养基上多数形成乳糖发酵菌落;在液体培养基中呈均匀混浊,表面有薄膜,管底有黏稠性沉淀物。
(3)生化反应:
IMViC:
-.-.+.+
2.致病性阴沟.产气.聚团.日勾维等肠杆菌常导致条件致病,引起呼吸道.泌尿生殖道感染,亦可引起菌血症,引起新生儿脑膜炎。
(四)沙雷菌属临床标本中以粘质沙雷菌最常见。
1.生物学特性
(1)形态与染色:
G-,细小杆菌,有周鞭毛,有些菌种有微荚膜,无芽胞。
粘质沙雷菌是最小的细菌。
(2)培养特性:
兼性厌氧,营养要求不高,在普通营养琼脂上生长良好,呈白色.红色或粉红色菌落。
各种沙雷菌株可以产生两种色素:
灵菌红素(非水溶性)和吡羧酸(水溶性)。
(3)生化反应:
本属的关键生化反应是DNA酶阳性.葡萄糖酸盐阳性。
2.致病性粘质沙雷菌可导致呼吸道与泌尿道感染。
液化沙雷菌存在于植物和啮齿类动物的消化道中,是人的条件致病菌,主要引起呼吸道感染。
【例题】
ESBLs的主要产生菌株,同时也是人类泌尿系感染的主要病原菌是A.大肠埃希菌B.肺炎克雷伯菌C.阴沟肠杆菌D.铜绿假单胞菌E.伤寒沙门菌
[答疑编号502389140201]
【正确答案】
A
【例题】
发酵葡萄糖,不发酵乳糖,感染途径为粪口传播,感染患者外周血白细胞往往减少的细菌是A.大肠埃希菌B.肺炎克雷伯菌C.阴沟肠杆菌D.铜绿假单胞菌E.伤寒沙门菌
[答疑编号502389140202]
【正确答案】
E
【例题】
下列哪种细菌无动力A.大肠埃希菌B.伤寒沙门菌C.变形杆菌D.肺炎克雷伯菌E.阴沟肠杆菌
[答疑编号502389140203]
【正确答案】
D
【例题】
大肠埃希菌和痢疾志贺菌的IMViC试验多数结果分别为A.++--和-+--B.++--和++--C.--++和-+--D.--++和--++E.--++和-++-
[答疑编号502389140204]
【正确答案】
A
【例题】
鉴别肠道致病菌和非致病菌常选用A.吲哚试验B.菊糖分解试验C.葡萄糖发酵试验D.乳糖发酵试验E.甘露醇发酵试验
[答疑编号502389140205]
【正确答案】
D
【例题】
疑为痢疾患者的粪便标本分离培养应选用A.血平板B.普通琼脂平板C.中国兰培养基D.肉汤培养基E.SS琼脂培养基
[答疑编号502389140206]
【正确答案】
E
【例题】
有迁徙生长现象的细菌为A.霍乱弧菌B.伤寒沙门菌C.大肠埃希菌D.变形杆菌E.痢疾志贺菌
[答疑编号502389140207]
【正确答案】
D
【例题】
关于肠杆菌细菌,下列哪些叙述是正确的A.为一组革兰阴性杆菌,形态染色无诊断意义B.均为人类肠道正常菌群,机体免疫力下降时可导致感染C.无芽胞,多数有鞭毛,能运动D.营养要求不高,兼性厌氧或需氧E.可引起肠道外感染
[答疑编号502389140208]
【正确答案】
ACDE
【例题】
大肠埃希菌A.能分解乳糖,产酸不产气B.是肠道内正常菌群,不致病C.能引起肠道外感染D.大多数菌株动力试验阴性E.是水的卫生细菌学检查的指标菌
[答疑编号502389140209]
【正确答案】
CE
【例题】
下列哪一类大肠埃希菌临床上可引起类似志贺样腹泻症状A.ETECB.EPECC.EIECD.EHECE.EaggEC
[答疑编号502389140210]
【正确答案】
C
【例题】
生化反应为分解葡萄糖产酸产气,乳糖不分解,H2S(+),动力(+),迅速分解尿素,在下列肠杆菌科细菌中可能的是A.大肠埃细菌B.志贺菌C.伤寒杆菌D.乙型副伤寒沙门菌E.变形杆菌
[答疑编号502389140211]
【正确答案】
E本章小结:
一.肠杆菌科细菌的共同特性
二.埃希菌属.志贺菌属.沙门菌属.变形杆菌属.耶尔森菌属等生物学性状.临床意义.微生物学检验
三.其他肠杆菌科细菌的性状
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