医疗器械产品辐照灭菌剂量验证方案与报告.docx

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医疗器械产品辐照灭菌剂量验证方案与报告

XXXXX公司

建立医用产品灭菌剂量验证报告

送检单位：

公司

日期：

年月日

序言1

试验前准备工作2

方法3

实施内容4

结果5

结论6

附注6

参考资料6

初始污染菌检测规范6

确定灭菌剂量8

无菌检查9

序言

本实验是对医用产品公司的一次性医疗用品进行了辐射灭菌剂量设定和验证。

实验原理是基于ISO11137-2：

2006的方法，即先对辐照前产品的初始污染菌进行测定，然后选择验证剂量。

再用验证剂量对产品进行辐照，并测定辐照后存活微生物的样品件数，以此来确定所确定的验证剂量能够满足10-6的灭菌保证水平。

本实验从年月日开始至年月日结束。

试验前准备工作

一、样品

1样品：

医用产品，三个批号：

生产企业：

公司。

2器具及试剂

2.1器材

试管

容量瓶

三角烧瓶

酒精灯

灭菌剪刀、镊子

灭菌平皿（9cm）

75％乙醇棉

灭菌刻度吸管（1ml、5ml）

紫外可见分光光度计

立式压力蒸汽灭菌器

电热鼓风干燥箱

酸度计

恒温培养箱

电热恒温水浴锅

生化培养箱

电热恒温干燥箱

2.2培养基及试剂：

a）流体硫乙醇酸盐培养基

b）改良马丁培养基

c）营养琼脂培养基

2.3稀释液、冲洗液及其制备方法

a）质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液

b）0.1％蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。

c）pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

二、实验前准备

2.1培养基要求：

用于培养需（厌）气菌和真菌的培养基的制备、培养基灵敏度检查及其他各项要求应符合《中国药典（二部）》附录中《无菌检查法》的规定。

培养基使用按中国药典方生产的符合规定的脱水培养基。

制备后采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境。

2.2器具灭菌：

与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸气灭菌器内121℃30min，或置电热干燥箱内160℃2h。

2.3无菌室要求：

无菌室操作台局部符合洁净度100级单向流空气区域要求。

无菌室在消毒处理完毕后，检查空气中的菌落数，方法如下：

取直径约90mm培养皿数支，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL，在30℃～35℃培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好，置30℃～35℃培养48h后取出检查，3只培养皿上生长的菌落数平均不得超过1个。

无菌试验过程中检查空气中的菌落数，方法同上。

在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，符合上述要求。

2.4阳性对照：

选择金黄色葡萄球菌为对照菌，接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，将上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。

阳性对照试验的菌液制备方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试品无菌检查每份培养基接种的样品量。

阳性对照管培养48～72小时应生长良好。

2.5阴性对照：

取相同稀释液、冲洗液同上法操作，作为阴性对照。

阴性对照不得有菌生长。

方法

客户提供生产的医用产品，每件医用产品均是一个独立的单元产品，其样品份额为1。

具体步骤如下：

1.随机抽取连续三批常规生产的产品，每批10件，共30件做生物负载检测。

另从其中一批随机取5件样品，做回收率实验。

2.当每个批平均生物负载都不超过三批总平均生物负载的2倍时，根据三批的总平均负载的检测结果，选择灭菌保证水平为10-2的灭菌剂量作为验证剂量。

3.对以上三批抽样产品连续生产的110件产品实施验证剂量，实际吸收剂量应在验证剂量的±3%之内。

4.对用验证剂量辐照过的100件产品做无菌实验，其余的10件产品做无菌试验的验证实验。

5.根据无菌实验的结果，确定验证剂量是否被接受，即确定的验证剂量是否能够满足10-6的灭菌保证水平。

实施内容

一、回收率测定

取5ml洗脱液洗脱5支产品，分别洗脱四次，然后将样品用营养琼脂做琼脂覆盖，于37℃培养箱中，培养48±2h，记录结果并得出修正系数。

二、初始污染菌测定

将随机抽取的30件样品中生物负载进行评估，编号后，分别用5ml洗脱液洗脱，吸取1ml置于9ml稀释液中，振摇均匀后分别取1ml样品液于两个平皿中，记录编号为101，102，代表五十倍样，取1ml置于9ml稀释液，振摇均匀后分别取1ml样品液于两个平皿中，记录编号为1001，1002，代表五百倍样。

依次取第二件样品，至30件样品。

倾注营养琼脂，于37℃培养箱中，培养48±2h，记录结果。

三、确定验证剂量

ISO11137：

2006医疗器械灭菌的有效性确认和常规控制的要求中规定，若批次平均生物负载的每一个生物负载数值<总的平均生物负载*2，则用总的平均生物负载，若一批或更多批次的平均生物负载≥总的平均生物负载*2，则用最高批次。

本次试验采用总平均初始污染菌120（cfu/SIP）确定验证剂量。

查ISO11137：

2006表格得出对应的验证剂量为8.2kGy，该试验剂量下的无菌保证水平SAL为10-2。

四、验证剂量辐照结果

从产品的单个批次中选出110个单元产品的样本，暴露在XXXXX公司的电子加速器传送带上辐照，使辐射剂量落在8.2±5%kGy范围内。

辐照后进行无菌试验。

五、无菌试验

5.1供试液制备及接种

取样品按容器内表面积每10cm2加入浸提介质1ml的比例，振摇数次。

收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。

5.2无菌检验培养温度

硫乙醇酸盐流体培养基，置30～35℃培养。

改良马丁培养基，置23～28℃培养。

5.3接种

采用直接接种法

每管培养基的最低用量——硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10ml。

5.4培养、观察

上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管和阴性对照管培养48～72小时外，其余管培养14天。

培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。

结果

对三批医用产品进行初始污染菌测试后，修正系数为1.08，结果如下：

批号

初始污染菌平均数（cfu/件）

总平均数

因此，根据ISO11137-2：

2006建立灭菌剂量的规定，选用总平均生物负载为120（cfu/件）来确定验证剂量。

根据以上数据查表得验证剂量为kGy,对以上批次110件，实测剂量为kGy（见辐照证明书）。

经观察，100件样品经验证剂量辐照后的无菌检查阳性数为零。

结论

依据ISO11137：

2006规定，当SAL=10-6时，医用产品的灭菌剂量为kGy。

在随后的常规辐照灭菌过程中，应通过剂量计监测，证明每一个产品的最小吸收剂量能够达到kGy的灭菌剂量，使灭菌保证水平为10-6SAL。

依据ISO11137：

2006标准，为了确保作为10-6SAL的灭菌剂量持续有效，必须按照规定的周期进行验证剂量审核，通常每三个月进行一次。

附注

1、试验样品不可替代批量产品。

2、当批量产品辐照时的剂量确定，必须随机抽取该批量部分产品作初始污染菌验证。

参考资料

1、ISO11137-1：

2006医疗保健产品的灭菌-----辐照-----第一部分：

医疗器械灭菌过程的发展、确认和常规控制要求

2、ISO11137-2：

2006医疗保健产品的灭菌-----辐照-----第二部分：

建立灭菌剂量

3、ISO11137-3：

2006医疗保健产品的灭菌-----辐照-----第三部分：

剂量指南

4、ISO11737-1：

1995医用器材灭菌-----微生物学方法-----第1部分：

产品上微生物总数量的测定

5、ISO11737-2：

1998医用器材灭菌-----微生物学方法-----第2部分：

灭菌过程确认中的无菌试验

初始污染菌检测规范

试验方法：

1、初始污染菌检测按ISO11737-2006医疗器械的灭菌-微生物方法第一部分产品上微生物总数的测定-MRC初始污染菌的测定

2、菌落总数回收率的测定方法同

（一）

回收率测定结果

样品名称：

医用产品

生产企业：

生产批号：

　　　　型号规格：

样品数量：

样本号

洗脱次数

每次洗脱的细菌数（cfu/SIP）

平均菌落数

1

2

3

4

5

1

2

3

4

琼脂覆盖

全部菌落数

回收率%

——

平均回收率

修正系数

初始污染菌检测

生产批号：

　型号规格：

样品数量：

样本号

批号

样本号

批号

样本号

批号

需氧菌（cfu/SIP）

需氧菌（cfu/SIP）

需氧菌（cfu/SIP）

1

11

21

2

12

22

3

13

23

4

14

24

5

15

25

6

16

26

7

17

27

8

18

28

9

19

29

10

20

30

SIP平均初始污染菌

SIP平均初始污染菌

SIP平均初始污染菌

校正后批平均初始污染菌（*1.08）

校正后批平均初始污染菌（*1.08）

校正后批平均初始污染菌（*1.08）

校正后平均初始污染菌

确定灭菌剂量

每批产品初始污染菌如下：

批号

平均初始污染菌数（cfu/件）

总平均数

剂量确定：

按照ISO11137-2：

2006中关于建立灭菌剂量验证方式1查得120cfu/件的验证剂量为kGy。

再按要求对20090529A03批次110件医用产品采用kGy的验证剂量进行辐照处理，经无菌检查，阳性数为零。

这表明，kGy能够满足医用产品10-6的灭菌保证水平。

无菌检查

试验方法:

1、样品接种均应按无菌操作法进行；

2、无菌打开包装用灭菌剪刀、镊子，将产品转移至胰酪胨大豆肉汤中；

3、将置有样品的培养基放30+0.5℃的培养箱中的培养14天；

观察有无细菌生长；

结果：

无菌试验的验证试验检验结果

生产批号

试验样品

数量

培养基

温度（℃）

培养天数

阳性数

阴性数

1

10

胰胳蛋白胨大豆肉汤

30±0.5

2

10

10

结论：

经测试，所有验证试验的结果均为阳性，表明样品中无抑制细菌生长的释出物，说明无菌试验的结果有效。

无菌试验检验结果

生产批号

试验样品

数量

培养基

温度（℃）

培养天数

阳性数

1

100

硫乙醇酸盐流体培养基

30±0.5

14

0

改良马丁培养基

23±0.5

14

0

结论：

经测试，无菌试验结果中，阳性数为0，证明验证剂量被接受，进而说明以KGy的剂量辐照产品能满足10-6的灭菌保证水平。

实验者：

日期：

审核者：

日期：