8微生物与血库作业指导书要点.docx
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8微生物与血库作业指导书要点
微生物与血库
作业指导书
文件编号:
ABCD-3-WS-01~10
ABCD-3-WS-01~05
第A版
编制:
审核:
批准:
生效日期:
2009年8月8日
ABCD医院检验科
目录
序号
主题内容
代号
页号
微生物室作业指导书部分
1
结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定
ABCD-3-WS-01
4
2
涂片找抗酸杆菌操作规程
ABCD-3-WS-02
6
3
普通细菌培养鉴定操作规程
ABCD-3-WS-03
8
4
尿液培养操作规程
ABCD-3-WS-04
10
5
血液培养操作规程
ABCD-3-WS-05
12
6
黑马Bact-ist微生物分析系统操作维护规程
ABCD-3-WS-06
14
7
GNP-9270型隔水式恒温培养箱操作维护规程
ABCD-3-WS-07
18
8
BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程
ABCD-3-WS-08
19
9
BSC-1100ⅡB2型生物安全柜操作维护规程
ABCD-3-WS-09
24
10
飞鸽牌离心机操作维护规程
ABCD-3-WS-10
28
血库作业指导书部分
1
血库工作制度
ABCD-3-XK-01
30
2
交叉配血(凝聚胺法)
ABCD-3-XK-02
31
3
ABO血型鉴定(生理盐水法)
ABCD-3-MY-03
33
4
ABO正定型和Rh血型鉴定
ABCD-3-MY-04
38
5
KJX-IA型冰冻血浆解冻箱
ABCD-3-MY-05
41
修订页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
结核分支杆菌药敏和初步菌种鉴定
1检验目的
做疾病的病原学诊断,查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系,指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2原理
若接种的MGIT培养管中有分支杆菌生长,管中的营养成分和氧气将不断被消耗,MGIT培养管中的荧光显示剂将随着管内氧气浓度的变化而发生反应。
一旦培养管内氧气被利用,管内荧光指示剂将在特定光源的激活下释放荧光。
BACTECMGIT960荧光强度记忆探测器将每隔60min连续测定培养管内荧光强度,从而判断管内分支杆菌生长情况。
3标本要求
(1)标本类型:
深部痰液。
(2)标本采集:
见标本采集手册
(3)标本储存和运输:
室温放置,室温运输并立即送检。
(4)标本拒收状态:
非无菌方式采集的标本。
4容器和添加剂类型
使用灭菌器皿盛放标本,不加任何防腐剂。
5试剂
(1)试剂名称:
Middlebrook7H9培养肉汤,OADC营养添加剂,抑菌剂PANTA。
(2)试剂生产厂家:
美国BD生物技术有限公司
(3)包装规格:
7X100
(4)试剂盒组成:
培养肉汤,营养添加剂,抑菌剂
6仪器设备:
BACTECMGIT960全自动分支杆菌培养仪;美国BD生物技术有限公司。
酒精灯
显微镜、超净工作台、台式离心机
7校准程序
(送XX市计量质量检测研究所校准)
8操作步骤
见仪器操作维护规程:
BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程;
9质量控制:
参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动
10生物参考区间
阴性
11患者检验结果的可报告区间
阴性/阳性,
药敏及菌种鉴定见BD960结核分支杆菌培养仪操作维护规程;
12临床意义:
分支杆菌的药敏试验有助于筛选有效的抗结核药物,提示药物所需的治疗剂量,供临床医生和防痨医生参考;同时,还可了解耐药株的流行情况,为抗结核药物的合理应用提供试验依据。
涂片找抗酸杆菌操作规程
(改良碱性复红法)
1检验目的
检验样本中是否含有抗酸杆菌,为临床提供诊断依据。
2原理
结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌,因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色,但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。
利用这特性并以增强的染色液予染色,然后再以酸及乙醇加以处理,使其脱色后再对比染色,此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色(红色)。
3标本要求
(1)标本类型:
病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液等
(2)标本采集:
见标本采集手册(一般须得深咳痰,其它无特殊要求。
)
(3)标本储存和运输:
可室温保存、室温运送。
病人标本须密封运送以避免污染环境。
4容器和添加剂类型
痰盒、尿杯、试管等
6试剂
(1)试剂名称:
结核菌染色液
(2)试剂生产厂家:
广东省结核病研究所统一配制
(3)包装规格:
3X500ML
(4)试剂盒组成:
试剂1:
石碳酸复红液
试剂2:
酸性酒精溶液
试剂3:
亚甲基蓝溶液
7仪器设备:
CHKIKO320奥林巴斯双目显微镜BH-2奥林巴斯落射荧光显微镜
8校准程序
送XX市计量质量检测研究所校准
9操作步骤
涂片经火焰固定,加石碳酸复红液染色5分钟或更久(需加温)。
水洗(之后尽可能将水沥干)。
加酸性酒精溶液,脱色1-2分钟。
水洗(假如标本面还可以看到残存红色时,再加酸性酒精溶液脱掉红色为止)。
加亚甲基蓝溶液染色30秒,水洗,干燥。
(6)镜检。
10质量控制:
参加我科质量管理组的质量控制活动。
11干扰和交叉反应
麻风菌可能对检验结果产生影响。
12生物参考区间
涂片未见抗酸杆菌
13患者检验结果的可报告区间
涂片未见抗酸杆菌/涂片见细长、红色抗酸杆菌
14临床意义:
结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素,其毒力主要是在机体中细胞内、外生长与大量繁殖的能力,细菌成分与其代谢产物引起免疫反应(Ⅳ型)导致一系列组织学上的意义。
普通细菌培养鉴定操作规程
1检验目的
做疾病的病原学诊断,查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系,指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2原理
人体很多部位与外界相通,存在栖息菌群,但不致病,当菌群失调或分离到致病菌则具有临床意义;另外机体某些部位是无菌的,如检出细菌则视为致病菌。
并排除采样及操作污染。
3标本要求
(1)标本类型:
血液,骨髓,脑脊液,胸水,腹水,尿液,等体液;痰液,前列腺液,脓液,组织分泌物或穿刺液等。
(2)标本采集:
见标本采集手册
(3)标本储存和运输:
室温放置,室温运输并立即送检。
人泌尿生殖道标本如白带前列腺液等需临床标本接种于巧克力平板或特殊的运送培养基并置保温设备中送检。
(4)标本拒收状态:
非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。
4容器和添加剂类型
均使用灭菌器皿盛放标本
5试剂
(1)试剂名称:
革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等
(2)试剂生产厂家:
珠海黑马生物技术有限公司
6仪器设备:
(1)接种针、接种环、酒精灯、
(2)BACT-IST黑马微生物鉴定系统。
(3)显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平
7校准程序
(送XX市计量质量检测研究所校准)
8操作步骤
(1)血液、骨髓、脑脊液等标本按照培养目的增菌培养12-18小时后盲目接种或待自动分析仪报警后接种。
(2)接种:
以上增菌标本及其他临床标本用接种环取标本接种环划线血平板及其他选择性培养基上,35℃培养过夜,观察结果。
(3)涂片:
肉眼见细菌生长,取生长物涂片做革兰氏染色;
(4)纯培养:
根据需要接种血平板、巧克力、中国蓝/麦康凯或厌氧平板过夜培养以获得纯培养。
(5)鉴定:
按照鉴定仪要求调配菌液浓度,细菌的鉴定见BACT-IST黑马微生物鉴定系统
12质量控制:
参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动
11生物参考区间
血液,骨髓,脑脊液等无菌部位采取的标本未见细菌生长;其他标本如大便,痰液为正常菌群或未见致病菌。
12患者检验结果的可报告区间
细菌鉴定到种或属;菌群调查报告比例。
13临床意义:
为医生提供病原学诊断,并为进一步药敏实验提供依据。
尿液培养操作规程
1检验目的
做疾病的病原学诊断,查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系,指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
患有泌尿系感染时,尿中的细菌数高于104/mL,以此作为诊断泌尿系感染依据。
2原理
使用BACT-IST黑马微生物鉴定系统,原理见鉴定系统操作规程。
3标本要求
(1)标本类型:
中段尿液。
(2)标本采集:
见标本采集手册
(3)标本储存和运输:
室温放置,室温运输并立即送检。
(4)标本拒收状态:
非无菌方式采集的标本。
4容器和添加剂类型
使用灭菌器皿盛放标本,不加任何防腐剂。
5试剂
(1)试剂名称:
革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、麦康凯平板、相关生化试剂等
(2)试剂生产厂家:
珠海黑马生物技术有限公司
(3)包装规格:
4X500Ml
(4)试剂盒组成:
试剂1:
龙胆紫液试剂2:
碘溶液试剂3:
脱色液试剂4:
沙黄溶液
6仪器设备:
(1)接种针、接种环、酒精灯、
(2)BACT-IST黑马微生物鉴定系统
(3)显微镜、GNP-P270隔水式恒温培养箱、SW-CJ-IF超净工作台、MCO-15A三洋牌二氧化碳培养箱、0414-1台式离心机、FA1004电子天平
7校准程序
(送XX市计量质量检测研究所校准)
8操作步骤
(1)细菌的分离培养:
用接种环取1uL标本接种于血平板及麦康凯琼脂培养基,35℃培养过夜,观察结果。
菌落生长者做菌落计数,并挑取优势菌菌落做纯培养。
(若初次分离菌落单一且生长较多时可直接做鉴定)
(2)涂片:
取菌落涂片做革兰氏染色,确认时G+或G-以及是球菌还是杆菌(球杆菌)。
(3)细菌鉴定及药敏实验:
革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验(必要时做动力试验),氧化酶试验阳性或氧化酶试验阴性但不利用葡萄糖不产酸者使用非发酵鉴定测试板;氧化酶试验阴性者则使用肠杆菌科细菌测试板;革兰氏阳性球菌(主要是成簇或四联排列),触酶试验阳性者接种葡萄球菌、微球菌鉴定/药敏测试板;触酶试验阴性者则接种链球菌鉴定/药敏测试板;革兰氏阴性双球菌,氧化酶试验阳性者使用淋球菌鉴定/药敏试剂盒测试。
(4)鉴定:
按照鉴定仪要求调配菌液浓度,见BACT-IST黑马微生物鉴定系统、PHOENX100全自动细菌鉴定药敏分析系统操作规程。
9质量控制:
参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动
10生物参考区间
正常人体膀胱中尿液无菌。
11患者检验结果的可报告区间
细菌鉴定到种或属,菌落计数高于104/
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