环境生物学实验讲义.docx
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环境生物学实验讲义.docx
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环境生物学实验讲义
实验技术课的主旨和要求
1.1实验技术的主旨
任何科学知识和理论都来源于实际的观察和科学实验,这一点对于环境科学更是如此.实验技术课程是大多数课程的重要组成部分,在实验课上培养起来的科研素质和实验技能,不仅对学生完成学业而且对从事创新性课题研究都具有重要而深远的意义。
实验技能的培养包括:
1设计实验,在了解实验原理和目的基础上,逐渐学会自己设计实验;
2观察与测量,这是实验过程的主要内容;
3实验记录,真实准确地记录实验中每一个数据、每一个细节并且及时进行整理;
4分析和解释数据,是处理实验数据的基本功;
5写作实验报告,是对实验技术过程和实验结果的总结,同时也是提升综合科研素质和实验能力的重要一环。
1.2实验技术课的基本要求
1.2.1课前充分准备
课前务必做到如下准备
1预先仔细阅读实验讲义内容,明确实验目的和实验技术。
该实验与当前的课堂学习有关吗?
是否需要复习或预习这部分内容?
完成预习报告。
2实验时携带记录本,钢笔等必要的文具,以便记录实验中的数据和现象。
3认真了解并严格遵守实验室和野外工作的规则。
1.2.2实验过程
实验过程中认真、准确地记录每一个数据和每一个细节,不管是否对实验结果有意义,都要记录下来,不放过任何疑点。
实验过程中保持桌面整洁,实验记录本放在工作区附近,但不要放在工作区内;把清洁的器具放在实验桌的一边,使用过的放在另一边。
对于公用的实验试剂和用具,遵守“物归原处”的原则,用完后立即原样放好。
这是对自己对他人都方便的职业习惯,必须注意养成。
1.2.3按时完成实验报告或论文
在完成实验内容后或阶段性实验后,必须及时地进行总结,对实验内容和实验结果用简洁的文字表达出来,这就是实验报告,如果是阶段性课题研究就是科学论文。
写作实验报告和科学论文的过程也是提高写作水平和整理、提高科研水平的过程。
写实验报告时,从“材料和方法”开始写起,是最容易入手的方法。
把实验中所用的实验材料和实验方法用简洁的文字尽可能详细而又准确地表述出来。
“结果”、“讨论”是最难写的部分,可以先写出初稿,隔几天后再仔细斟酌每一句、每一字。
写实验报告也必须事先计划,务必安排足够时间进行修改、计论。
为了按时高质量地完成实验报告或论文,必须设置时间表,并要留有余地。
1.3实验工作记录
在进行现代化的实验室工作或课题研究项目时,需要掌握处理数据和观察结果的技能,要学会在实验记录本上记录研究情况,原因是:
准确和有条理的记录有助于以后使用,如写实验报告或写论文;进行重要的技能锻炼,如科学写作、绘图、制表或解释结论等;在研究过程中分析和处理数据,避免研究结束时积压起来。
1.4实验报告与论文写作
在每项实验完成后都必须尽快写出实验报告,这是培养和提高科学研究素质的重要方法,也是与他人进行科学成果交流的重要方式。
虽然实验报告与课题报告、学位论文在内容的深度、广度及篇幅上有很大区别,但是他们的基本结构是相同的,实验报告或论文的结构(格式)如下:
实验工作报告的结构(格式)几乎适用于所有毕业论文和论文,一般来讲大学生的实验报告和课题研究报告均以这种结构作为模式。
普通目录的格式有“结果和讨论”部分,便于分析结果,并指出经研究得到的一些观点。
在科技论文中,摘要之后紧跟着关键词。
要素(按顺序)内容/目的内容回顾
标题表明论文主题是否简短地说明了文章的内容
作者与单位介绍作者及其工作单位所有的细节是否正确?
和联系地址
摘要概括方法、结果和结论是否解释了进行这项工作的原因?
引言解释进行这项工作的原因是否提供足够的背景知识和
以及文献背景,选择这些实引用有相关的文献?
所有科学
验方法和实验材料的依据,术语是否定义?
是否已经解释
指明实验中隐藏的假设了研究这个问题的原因和整套
方法?
材料和方法实验所用材料和方法,应尽量是否包括每个实验和避免
详细,以便其他实验工作者重了必要的重复?
所有生物
复这项工作材料是否使用了正确的命名?
所有化学药品是
使用了正确的名称、来源和纯度?
结果以一种容易理解的方式排列和实验结果是否具有逻辑
描述获得的数据(用图则不用表性?
所有部分是否有足够
格,或用小表格而尽量不用大表的联系?
所有数据是否以
格)最清楚的方式表达出来?
是否进行了统计分析?
所有图和表格是否以应有的顺序出现?
所用的图和表格说明是否提供了足够解释结果的信息?
讨论/结论讨论结果:
结果的意义、是否解释了结果的重要性?
重要性以及与其他人所做的与已发表的资料进行比较
进行比较分析,建议下一步创新点是什么?
将做什么
致谢感谢那些给予帮助的人是否列出所有给予帮助人
(包括给予资助的团体)的姓名
参考文献以合适的形式列出所有的是否列出论文中出现的所有
参考文献:
提供足够的信息参考文献?
所列的参考文献
以便读者能方便的找到这些论文中出处编号是否正确?
文献期刊是否完全以正确的形式
出现?
是否按顺序或正确的序号列出?
实验一温度对鱼类呼吸速率的影响
一、实验目的:
通过对变温动物(鱼)呼吸速率随温度变化规律的观察,验证范霍夫定律(VanHolf’sLaw).
二、实验原理:
动物的代谢(生化反应)速率(包括呼吸反应),随温度上升而加快。
这种温度与反应速率的关系,可用温度系数来表示,或称为范霍夫定律。
它可以用下式表示。
Q10=(k2/k1)10/(t2-t1)
Q10=(v2/v1)10/(t2-t1)
式中,Q10为温度系数,表示温度每提高10℃,反应速度增加的倍数,通常是2~3倍,或表示温度每提高1℃,反应速度增加9.6%;K1、K2为相对温度t1、t2的速度常数,它与反应速度v1、v2成正比,所以也可以用反应速率代替速度常数。
鱼类的呼吸速度与水温关系,通常与定律相当吻合,所以应用鱼类进行呼吸速率的试验是比较理想的。
三、材料与方法
1.材料活金鱼若干条
2.方法观察金鱼呼吸的方法
四、实验步骤
1.提前一天在水族箱(或以玻璃缸代替)内放入自来水(即曝气一天)。
2.向恒温水浴中加入自来水至水浴锅的2/3,挑选健康的实验鱼一条,放入1000ml烧杯中。
加入曝气水600~700ml,将烧杯放入恒温水域中,使烧杯中水的液面与水域过水面平行。
将温度计插入烧杯中,读出初始温度。
经过15min,让鱼在水里有一个较短时间的适应,然后观察鱼的鳃盖活动(呼吸运动),记录下鱼的呼吸次数(次·min-1),重复计数10次(注意计数时应尽量避免或远离外界对鱼的干扰,包括说话按动计数器的声音等)。
并且用溶氧仪测定水中的初始DO值,记录至表1中。
3.水浴锅开始逐渐升温,1h升高10℃,即平均每6min左右升高1℃(以烧杯内温度计的温度示数为准)。
温度每升高1℃,用溶氧仪测定水中的DO值一次,记录。
当温度升高了10℃以后,保持升温后的水温不变,开始观察鱼的鳃盖活动,并记录下鱼的呼吸次数。
重复计数10次。
观察记录结果至表2中。
五、结果与讨论
(1)试验验证,温度上升10℃后呼吸速度增加了多少倍?
是否符合范霍夫定律?
(2)为什么范霍夫定律只有在一定范围内才适用?
(3)温度系数只适用于变温动物,为什么?
(4)耗氧速率与水温有什么关系?
这种关系与范霍夫定律是否吻合?
六、试验记录和报告
记录试验名称、试验日期、指导教师、学生姓名,填写原始记录。
表1DO值随温度升高的变化记录
温度
DO值
表2试验鱼呼吸速率原始记录
温度/℃
呼吸频度/次·min-1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
实验二 植物体内游离脯氨酸含量的测定
植物在正常条件下,游离脯氨酸含量很低,但遇到干旱、低温、盐碱等逆境时,游离脯氨酸便会大量积累,并且积累指数与植物的抗逆性有关。
因此,脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。
【原理】
采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸,不仅大大减少了其他氨基酸的干扰,快速简便,而且不受样品状态(干或鲜样)限制。
在酸性条件下,脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物,用甲苯萃取后,此缩合物在波长520nM处有一最大吸收峰。
脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。
【仪器与用具】
分光光度计:
水浴锅;漏斗;20ml大试管数支;20ml具塞刻度试管9支;5~10ml注射器或滴管。
【试剂】
3%磺基水杨酸水溶液;甲苯;
2.5%酸性茚三酮显色液;冰乙酸和6mol/L磷酸以3∶2混合,作为溶剂进行配制,此液在4℃下2~3d有效;
脯氨酸标准溶液:
准确称取25Mg脯氨酸,用蒸馏水溶解后定容至250ml,其浓度为100μg/ml。
再取此液10ml,用蒸馏水稀释至100ml,即成10μg/ml的脯氨酸标准液。
【方法】
1标准曲线制作
(1)取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。
混匀后加玻璃球塞,在沸水中加热40Min。
表1各试管中试剂加入量
管号
0
1
2
3
4
5
6
标准脯氨酸量(ml)
0
0.2
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
水(ml)
2
1.8
1.6
1.2
0.8
0.4
0
冰乙酸(ml)
2
2
2
2
2
2
2
显色液(ml)
3
3
3
3
3
3
3
脯氨酸含量(ug)
0
2
4
8
12
16
20
(2)取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡,以萃取红色物质。
静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在波长520nm下比色。
(3)以吸光度为纵坐标,脯氨酸含量为横坐标,绘制标准曲线,求线性回归方程。
2样品测定
(1)脯氨酸提取取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2~0.5g(干样根据水分含量酌减),分别置于大试管中,加入5ml3%硝基水杨酸溶液,管口加盖玻璃球,于沸水浴中浸提10min。
(2)取出试管,待冷却至室温后,吸取上清液2ml,加2ml冰乙酸和3ml显色液,于沸水浴中加热40min,下步操作按标准曲线制作方法进行甲苯萃取和比色。
(3)结果计算从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度,按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。
脯氨酸[μg/g(干或鲜样)〕=(C×V/A)/W
式中C:
提取液中脯氨酸浓度(μg),由标准曲线求得;
V:
提取液总体积(ml);
A:
测定时所吸取的体积(ml);
W:
样品重(g)。
【思考题】
1植物体内游离脯氨酸测定有何意义
2当改变萃取剂时,比色应做哪些改变?
如何选择最适波长?
如何选择最佳萃取剂?
实验3植物组织逆境伤害程度的测定
——电导法
【原理】
植物组织受到逆境伤害时,由于膜的功能受损或结构破坏,而使其透性增大,细胞内各种水溶性物质包括电解质将有不同程度的外渗,将植物组织浸入无离子水中,水的电导将因电解质的外渗而加大,伤害愈重,外渗愈多,电导度的增加也愈大。
故可用电导仪测定外液的电导度增加值而得知伤害程度。
【仪器与用具】
电导率仪1台;真空泵(附真空干燥器)一套;恒温水浴1具;水浴试管架1个;20ml具塞刻度试管10支;打孔器1套(或双面刀片1片);10ml移液管(或定量加液器)1个;试管架1个;铝锅1个;电炉1个;镊子1把;剪刀1把;搪瓷盘1个;记号笔1支;去离子水适量;滤纸适量;塑料纱网(约3cm2)6片。
【方法】
1.容器的洗涤
电导法对水和容器的洁净度要求严格,水的电导值要求为1~2μS(微西门子);所用容器必须彻底清洗,再用去离子水冲净,倒置于洗净而垫有洁净滤纸的搪瓷盘中备用。
为了检查试管是否洁净,可向试管中加入电导值在1~2μS的新制去离子水,用电导仪测定是否仍维持原电导。
2.试验材料的处理
分别在正常生长和逆境胁迫的植株上取同一叶位的功能叶若干片。
若没有逆境胁迫的植株,可取正常生长的叶片若干片,分成两份,用纱布擦净表面灰尘。
将其中一份放在﹣20℃左右的温度下冷冻20min(或置40℃左右的恒温箱中处理30min)进行逆境胁迫处理。
另一份裹入潮湿的纱布中放置在室温下作对照。
3.测定
(1)将处理组叶片与对照组叶片用去离子水冲洗两次,再用洁净滤纸吸净表面水分。
用6~8mm的打孔器避开主脉打取叶圆片(或切割成大小一致的叶块),每组叶片打取叶圆片30片,分装在三支洁净的刻度试管中,每管放10片。
(2)在装有叶片的各管中加入10ml的去离子水,并将大于试管口径的塑料纱网放入试管距离液面1cm处,以防止叶圆片在抽气时翻出试管。
然后将试管放入真空干燥箱中用真空泵抽气20min(也可直接将叶圆片放入注射器内,吸取10ml的去离子水,堵住注射器口进行抽气)以抽出细胞间隙的空气,当缓缓放入空气时,水即渗入细胞间隙,叶片变成透明状,沉入水下。
(3)将以上试管置室温下保持1h,其间要多次摇动试管,或者将试管放在振荡器上振荡1h。
(4)1h后将各试管充分摇匀,用电导仪测其初电导值(S1)。
(5)测毕,将各试管盖塞封口,置沸水浴中10min,以杀死植物组织。
取出试管后用自来水冷却至室温,并在室温下平衡10min,摇匀,测其终电导值(S2)。
4.计算
按下式计算相对电导度:
相对电导度(L)=S1/S2
相对电导度的大小表示细胞膜受伤害的程度。
由于室温对照也有少量电解质外渗,故可按下式计算由于低温或高温胁迫而产生的外渗,称为伤害度(或伤害性外渗)。
伤害度(%)=
式中Lt—处理叶片的相对电导度;
Lck—对照叶片的相对电导度。
在电导度测定中一般应用去离子水,若制备困难可用普通蒸馏水代替,但需要设一空白试管(蒸馏水作空白),测定样品时同时测定空白电导值,按下式计算相对电导度:
相对电导度(L)=
【注意事项】
1.CO2在水中的溶解度较高,测定电导时要防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试管,以免影响结果的准确性。
2.温度对溶液的电导影响很大,故S1和S2必须在相同温度下测定。
【思考题】
测定电解质外渗量时,为何要对材料进行真空渗入?
测定过程中为何进行振荡?
实验四种子发芽毒性实验
植物种子在适宜条件(水分、温度、和氧气等)下,吸水膨胀萌发,在各种酶的催化作用下,发生一系列的生理、生化反应。
但是,当有污染物存在时,污染物会抑制一些酶的活性,从而使种子萌发受到影响,破坏发芽过程,因此,通过测定种子发芽情况,如小麦、黑麦等种子的发芽势和发芽率,就可以预测和评价环境污染物对植物的潜在毒性和生物有效性。
(一)材料与方法
(1)材料
选择发育正常、无霉无蛀、完整而没有任何损坏的小麦种子或其他种子,品种不限,但是要求所取样品具有代表性。
(2)方法
在一定温度、湿度和光照条件下,用滤纸作发芽床,分别在第3天和第7天测定发芽势和发芽率。
(二)实验前的准备工作
(1)培养皿用洗液或洗衣粉刷洗干净,除去表面污物,然后用自来水冲洗干净,晾干备用,在皿盖侧面贴上标签,注明浓度、序号及使用人。
(2)配制污染物浓度梯度浓度溶液(低、中、高)。
每种浓度溶液设2个平行实验,以无离子水为对照组。
(三)实验步骤
(1)在培养皿(直径9cm)内放入等径滤纸两张做发芽床。
发芽床的润湿程度对发芽有着很大影响,水分过多妨碍空气进入种子,水分不足会使发芽床变干,这两种情况都能影响发芽过程,使实验结果不准确。
在发芽床上加入10ml试液,加入时避免滤纸下面产生气泡。
然后用镊子将种子腹沟(种子腹面凹陷处为腹沟)朝下,整齐地排列在芽床上,粒与粒之间距离要均匀,避免相互接触。
置于20-25℃温箱中或常温下室内进行培养。
为保证种子发芽条件适宜,在发芽期需每天观察发芽情况及发芽床的湿润情况,必要时适当补充水分。
(2)发芽势与发芽率的测定,不同植物种子有所不同,通常每日观察,分两期进行测定统计,第一期内发芽种子数量为种子发芽势,第二期内发芽种子数量为发芽率。
小麦种子的发芽势测定在第3天,发芽率测定在第7天。
(3)种子发芽后应具备的特征是:
小麦等禾谷类作物,在正常发育的幼根中,其主根长度不短于种子长度的1/2者,为具有发芽能力的种子,以此标准观察、计数。
(4)发芽势与发芽率的计算,分别于第3天和第7天测定记录小麦种子发芽情况,其中感染霉菌的种子要及时除去。
规定天数内已发芽的种子粒数
发芽势(%)=×100(8-1)
供作发芽的种子总粒数
全部发芽的种子粒数
发芽率(%)=×100(8-2)
供作发芽的种子总粒数
(三)结果与讨论
(1)结果报告:
种子名称,来源,每种浓度处理的种子数,培养条件,污染物的每种浓度处理组和对照组的发芽率和发芽势的平均值。
(2)本实验结果说明了什么?
是否还需要进一步做实验证实?
(3)影响小麦发芽的主要因素是什么?
试从植物种子发芽生理角度分析。
实验五植物叶绿素含量的测定
一、目的与要求
了解分光光度计定量测定叶绿素的基本原理,掌握用分光光度计测定叶绿素总量、叶绿素a和叶绿素b含量的方法。
二、基本原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
应用分光光度法测定物质的量,其溶液必须遵守“罗伯特—比儿定律”,即某有色溶液的吸光度A与溶液浓度C和液层厚度L的乘积成正比,即:
A=KCL
式中,K为吸光系数,是指溶液浓度C以质量浓度为单位,液层厚度为1cm时,K为该物质的吸光值。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
有色物质对光的吸收具有选择的特性,如果让各种波长的单色光分别地、依次地通过浓度为C的某一物质的溶液,测定溶液对每一种光波的吸光度,即可绘制出该物质的光吸收曲线,曲线上有最大吸收峰。
最大吸收峰处的波长,叫做最大吸收波长,以λmax表示。
我们应选择λmax来测定该物质溶液的浓度,叶绿素a和叶绿素b的80%的丙酮溶液的吸收光谱有两个最大吸收峰,为了排除黄色素的干扰,故选择红光区的λmax进行定量测定,叶绿素a的λmax为663nm,叶绿素b的λmax为645nm,两条曲线相交处的波长为652nm,可测定叶绿素的总量。
如果溶液中有数种吸光物质,则此混合液在某一波长的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和,这就是吸光度的加合性。
用纯的叶绿素a和叶绿素b标准品,在波长663nm处,测得叶绿素a和叶绿素b的80%丙酮溶液的吸光系数分别为82.04和9.27,在波长645nm处分别为16.75和45.60,根据加合性列出下列关系式:
A663=82.04Ca+9.27Cb
(1)
A645=16.75Ca+45.60Cb
(2)
式中的A663和A645为叶绿素溶液在663nm和645nm处的吸光度。
Ca和Cb分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度,以mg/L为单位。
解方程式
(1),
(2)得:
Ca=12.72A663-2.59A645(3)
Cb=22.88A645-4.67A663(4)
将Ca与Cb相加即得叶绿素总量CT;
CT=Ca+Cb=20.29A645+8.05A663(5)
另外,叶绿素a和b在652nm处有相同的吸光系数,均为34.5,也可在此波长下测定其吸光度,直接计算叶绿素总量。
CT=A652×1000/34.5(6)
三、仪器设备与材料
1、材料
新鲜(或烘干)的植物叶片。
2、仪器设备
分光光度计,电子天平,研钵1个,剪刀1把,50mL棕色容量瓶1个,小漏斗1个,玻璃棒,定量滤纸,吸水纸,擦镜纸,滴管,5mL移液管,50mL烧杯。
3、试剂
80%丙酮,石英砂,碳酸钙粉。
四、步骤和方法
(1)取新鲜植物叶片,洗净,擦干,除去中脉,称取1g,剪碎。
(2)将剪碎的新鲜样品1g,共三份,分别置于研钵中,加少量石英砂和0.1g碳酸钙,再加少许80%丙酮,将组织磨成匀浆。
再加15mL左右的80%丙酮,搅拌后,静置3~5min,将上层液倒入小漏斗中抽滤,残渣再用10mL80%丙酮研磨,抽滤,经第二次提取后,组织应无绿色,如尚存绿色,再用少量80%丙酮提取一次。
(3)取滤纸一张,置漏斗中,用80%丙酮润湿,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤至50mL棕色瓶中,用少量丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起道如漏斗中。
(4)用滴管吸取丙酮,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中,直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用丙酮定容至50mL,摇匀。
(5)用移液管吸取植物叶片的叶绿素提取液5mL,置于小烧杯中,加5mL80%丙酮稀释,倒入1cm的比色杯中以80%丙酮为空白对照,用分光光度计测定波长分别为645nm、663nm和652nm处叶片提取液的吸光度。
五、结果和报告
按公式(3)、(4)、(5)、或(6)分别计算叶绿素a、b和叶绿素总浓度。
求得叶绿素浓度后,可按下式计算叶绿素在叶片中的含量(mg/g):
叶绿素含量=叶绿素浓度×提取液最终浓度×稀释倍数/叶组织鲜重克数
叶组织鲜重克数
六、注意事项
(1)操作应在弱光下进行,且研磨时间应尽量短些,以避免叶绿素光分解。
(2)叶绿体色素提取液不能混浊。
可在710nm或750nm波长下测量吸光度,其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时吸光度值的5%,否则应重新过滤。
(3)用分光光度计法测定叶绿素含量,对分光光度计的波长精确度要求较高。
如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%,叶绿素b为19%,使用前必须对分光光度计的波长进行校正。
(4)在使用低档型号分光光度计(722型、721型等)测定叶绿素a、b含量时,因仪器的狭缝较宽,分光性能差,单色光的纯度低,与高中档仪器如岛津UV-120、UV-240等测定结果相比,叶绿素a的测定值偏低,叶绿素b值偏高,a/b比值严重偏小。
因此,使用时必须用高档分光光度计对低档分光光度计进行校正。
实验六植物体内过氧化物酶对污染物的响应
一、目的与要求
学习运用愈创木酚法研究有机污染物对植物的影响,以深入了解有机物在环境中对植物产生的危害。
掌握生物监测的一个测试手段。
二、原理
过氧化物酶(EC1.11.1.7)属氧化还原酶,在动物、植物以及微生物中广泛存在。
在植物体内主要有两方面的作用,一方面与植物正常的形态发生和形态建成有关,在植物的生长、发育过程中起作用;另一方面与植物的抗逆性有关,包括抗旱、抗寒、抗盐、抗病等,是植物保护酶系的重要保护酶之一。
过氧化物酶能以过氧化氢或烷基过氧化物作为电子受体,催化底物脱氢,脱下的氢将过氧化物还原为水,并生成醌类化合物,醌类化合物进一步缩合或与其他分子缩合,产生颜色较深的化合物。
(过氧化物酶)
H2O2+AH2(底物)--------—→A+H2O
当底物为愈创木酚时,过氧化物酶可使底物氧化生成茶褐色产物,此产物在波长470nm处有最大光吸收。
三、设备与材料
1、设备
研钵;普通台式离心机;天平;9200型分光光度计;移液管;试管;恒温水浴;定时器。
2、试剂
Tris-硼酸缓冲液(0.01mol/LTris
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