第1课动物疫病防控技能操作规范.docx
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第1课动物疫病防控技能操作规范
动物疫病防控技术操作规范
一、采血
(一)鸡翅静脉采血
操作步骤:
(1)侧卧保定,睁开翅膀,露出腋窝部,拔掉羽毛,在翅下静脉处消
毒。
先用碘酊(即2%碘酒),再用75%酒精脱碘,采纳点状螺旋式消毒。
(2)拇指压逼近心端,待血管怒张后,用装有细针头的注射器,平行
刺入静脉,放松对近心端的按压,慢慢抽取血液,采血量许多于2ml。
(3)采血完成实时用干棉球压迫采血处止血,防止形成淤血块。
(二)鸡心脏采血
操作步骤:
(1)雏鸡心脏采血:
选定采血部位先用碘酊(即2%碘酒),再用75%酒精脱碘,以点状螺旋式消毒;左手抓鸡,右手手持采血针,平行颈椎
从胸腔前口插入,回抽见有回血时,即把针芯向外拉使血液流入采血针,采血量许多于2ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
(2)成年禽类心脏采血:
成年禽类采血可取侧卧或仰卧保定。
侧卧保定采血:
助手抓住禽两翅及两腿,右边卧保定,在涉及心搏动显然处,或胸骨脊前端至背手下凹处连线的1/2处消毒(先用2%碘酒,
再用75%酒精脱碘,以点状螺旋式消毒),垂直或稍向前面刺入2~3厘米,回抽见有回血时,即把针芯向外拉使血液流入采血针,采血量许多于2ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
仰卧保定采血:
胸骨向上,用手指压离嗉囊,露出胸前口,消毒术部(先
用2%碘酒,再用75%酒精脱碘,以点状螺旋式消毒),用装有长针头的注射器,将针头沿其锁骨俯角刺入,顺着体中线方向水平穿行,直到刺入心脏,采血量许多于2ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
注意事项:
(1)确安心脏部位,切忌将针头刺入肺脏。
(2)顺着心脏的跳动频次抽取血液,切忌抽血过快。
(三)猪耳静脉采血操作步骤:
(1)将猪站立或横卧保定,或用保定用具保定。
(2)耳静脉局部消毒(先用2%碘酒,再用75%酒精脱碘,以点状螺旋
式消毒)。
(3)用手指捏压耳根部静脉血管处,使静脉充盈、怒张(或用酒精棉频频局部涂擦以惹起其充血)
(4)术者用左手把持耳朵,将其托平并使采血部位稍高
(5)右手持连结针头的采血器,沿静脉管使针头与皮肤呈30°~45°角,
刺入皮肤及血管内,轻轻回抽针芯,若有回血即证明已刺入血管,再将
针管放平并沿血管稍向前伸入,抽取血液许多于1ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
(四)猪前腔静脉采血
操作步骤:
(1)仰卧保定,把前肢向后方拉直;
(2)选用胸骨端与耳基部的连线上胸骨端旁2cm的凹陷处,消毒(先用2%碘酒,再用75%酒精脱碘,以点状螺旋式消毒);
(3)用装有20号针头的注射器刺入消毒部位,针刺方向为向后内方与地面呈60°角刺入2~3cm,当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯;刺入血管时即可见血进入管内,采血量许多于5ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
(五)牛颈静脉采血
操作步骤:
(1)保定好动物,使其头部稍前伸并稍倾向对侧;
(2)对颈静脉局部进行剪毛、消毒(先用2%碘酒,再用75%酒精脱碘,以点状螺旋式消毒);
(3)看清颈静脉后,采血者用左手拇指(或食指与中指)在采血部位稍下方(近心端)压迫静脉血管,使之充盈、怒张;
(4)右手持采血针头,沿颈静脉沟与皮肤呈45°角,快速刺入皮肤及血管内,如见回血,即证明已刺入;使针头后端凑近皮肤,以减小此间
的角度,近似平行地将针头再伸入血管内1~2厘米;
(5)松开压迫脉管的左手,采集血液5ml。
采完后,以干棉球压迫局部并拔出针头,再以5%碘酊进行局部消毒。
(六)牛尾静脉采血操作步骤:
1、采血者左手抓住牛尾巴往上翘,手离尾根部约30厘米。
2在离尾根10厘米左右中点凹陷处,先消毒(先用2%碘酒,再用75%
酒精脱碘,以点状螺旋式消毒),而后用注射器针头垂直刺入(约1厘米深。
)
3针头涉及尾骨后再退出1毫米进行抽血。
4采血量许多于5ml,拔出针头后用干棉球压迫止血。
注意事项:
牛尾静脉与牛尾中动脉的解剖部位在牛尾腹侧中线处并行,浅部位的为
尾静脉,深部的为尾中动脉。
进行牛尾采血的详细部位为离尾根10厘米左右,第4、5尾椎骨交界中点凹陷处,静脉血颜色暗、量少,动脉血颜色鲜红、量多。
二、鸡体解剖与采样
操作步骤及次序以下:
1、将鸡不放血致死;
2、将处死鸡浸于消毒水中使羽毛浸润,洗去尘垢、污物;
3、先将腹壁和大腿内侧的皮肤切开,使劲将大腿按下,使髋关节脱臼,
将两大腿向外睁开,进而固定尸体;
4、再于胸骨尾端后方将皮肤横切,与双侧大腿的竖切口连结,而后将
胸骨尾端后方的皮肤拉起,向前使劲剥离到头部,使整个胸腹及颈部的
皮下组织和肌肉充足裸露;
5、而后在胸骨后腹部横切穿透腹壁,从腹壁双侧沿肋骨头关节处向前
方剪断肋骨和胸肌,而后握住胸骨使劲向上向前翻拉,去掉胸骨露出体
腔;
6、对剪刀和镊子消毒;
7、采集肺脏;
8、对剪刀和镊子消毒;
9、采集;肝脏
10、对剪刀和镊子消毒;
11、采集;脾脏
12、对剪刀和镊子消毒;
13、采集肾脏;
14、从口腔下剪,剪开颈部皮肤肌肉,使喉头裸露;
15、对剪刀和镊子消毒;
16、采集喉头、气管;
17、剪开头部皮肤,翻开头骨;
18、对剪刀和镊子消毒;
19、采集脑。
注意:
采集样品时剪刀和镊子的消毒采纳火焰消毒法。
三、牛羊O-P液采集
牛羊O-P液指牛羊食道-咽部分泌物,被检动物在采样前禁食(可饮少
量水)12h,免得胃内容物返流污染O-P液。
操作步骤
1、采样探杯在使用前经0.2%柠檬酸或1%~2%氢氧化钠溶液浸泡5分钟,
再用与动物体温一致的清水冲刷后使用。
2、采样时动物应站立保定,将探杯随吞咽动作送入食道上部10~15cm
处(食道和咽部的联合处),轻轻往返抽动2~3次,而后将探杯拉出。
3、拿出5~8mlO-P液倒入含有等量细胞培育液(0.5%水解乳蛋白
-Earle液)或磷酸缓冲液(0.04%摩/升、PH7.4)的灭菌广口瓶中,充
分摇匀加盖封口。
4、采完一头动物,探杯要按步骤2从头进行消毒并充足冲刷。
5、采集的样品放冷藏箱实时送检,未能实时送检应置-30℃冷冻保留。
四、血凝试验
利用血凝试验考证64单位抗原。
(一)操作步骤:
1、在96孔V型微量反响板的1-8排的1-10孔均加入25微升生理盐水
稀释液,换Tip头(此中第10孔设为空白比较);
2、汲取25微升已配制好的64单位抗原加入每排的第一孔中,混匀;
3、从第1孔中汲取25微升混淆液加入第2孔,混匀后汲取25微升加入第3孔,这样倍比稀释至第9孔,从第9孔吸出25微升弃去,换Tip头;
4、每孔再加入25微升生理盐水,换Tip头;
5、每孔均加入25微升体积分数为1%鸡红细胞悬液(已配制好的),
将鸡红细胞悬液充足摇匀后加入;
6、振荡混匀,在室温(20-25℃)下静置40分钟后察看结果。
(二)结果判断(比赛时由评委一致判断):
将微量反响板倾斜,察看红细胞有无成泪滴状流淌。
完整血凝(不流淌)
的抗原最高稀释倍数代表一个血凝单位。
比较孔(第10孔)红细胞呈显然的纽扣状沉到孔底(即不凝聚)则试
验建立;假如64单位抗原配制正确而且血凝试验操作正确,那么应当
在每排的前6孔(64=26)出现完整凝聚而第7、8、9孔则不出现凝聚。
7排(含7排)以上结果正确为合格。
五、ELISA试验
依照标准为《猪伪狂犬病免疫酶试验方法》NY/T678-2003,采纳IDEXX
生产的猪伪狂犬病毒gpⅠELISA抗体检测试剂盒。
(一)样品稀释
用样品稀释液将被查验样品、阳性和阴性比较稀释2倍(比如:
60μL
样品稀释液中加60μL待检血清)。
(二)操作步骤
使用前全部试剂应恢复至室温。
试剂应轻轻旋转或震荡予以混淆。
1、拿出抗原包被板,并将样品地点正确记录在记录表上。
2、向
A1、B1和
C1孔中分别加入
100μL稀释好的阴性比较,
D1、E1
孔中分别加入
100μL稀释好的阳性比较,在其他的孔内加入
100μL
已稀释好的被检血清。
3、室温下孵育1小时或2~7℃孵育留宿(能够将微量反响板用封条封
闭)。
4、在洗板机上用配制好的清洗液清洗板孔,重复3~5次。
注意应防止
包被板孔干燥。
5、每孔加入100μL辣根过氧化物酶标志抗PRVgpI抗体。
室温下孵育
20分钟。
6、重复步骤4。
7、每孔加入100μLTMB底物液,室温下孵育15分钟。
8、每孔加入50μL停止液,使反响停止。
立刻用酶标仪于650nm测定
各孔吸光度(OD)值。
(三)结果判断
1、阴性比较OD值的均匀值减去阳性比较OD值的均匀值一定大于或等
于0.3,试验方能有效。
假如试验无效,应重做。
2、待检样品能否含有针对gE抗原的抗体取决于每个样品的S/N值,S/N
等于样品OD值除以阴性比较OD均值。
3、假如样品的S/N值小于或等于0.60,样品应判断为PRVgpI抗体阳
性。
4、假如S/N值大于0.60但小于或等于0.70,样品应重测。
假如试验
结果不变,三周后应从头采样检测。
5、假如S/N值大于0.70,样品应判断为PRVgpI抗体阴性。
(四)注意事项
1、全部试剂应在2~7℃储藏,使用前恢复到室温,使用后放回2~7℃。
2、不要使用超出有效限期的试剂,不一样批次试剂盒的成分不得混用,
使用试剂时应防备试剂污染。
3、TMB底物和停止液对皮肤有刺激性。
4、TMB不要裸露于强光和任何氧化剂,使用干净的玻璃或塑料容器盛
装TMB底物液。
5、包被板拆封后防止受潮或沾水(未用的包被板放于加干燥剂自封袋
中,应赶快置于4℃)。
6、在操作过程中移液时,切忌将气泡加入检测板孔中。
7、全部的荒弃液应在抛弃前合理办理免得污染环境。
六、细菌镜检
操作步骤:
1、翻开显微镜电源开关;
2、把镜筒上涨约1.5厘米,再把油镜转到工作地点;
3、在细菌涂片上所要察看的地点滴一小滴香柏油,放入载物台上并将
标本移到适合地点;
4、仔细拧动粗调焦螺旋,使镜筒慢慢降落。
这时要认真察看物镜前端
与标本之间的距离,先使物镜前端与油滴接触,而后再慢慢降落镜筒,
至物镜前端凑近而没有遇到玻片为止。
这步操作要特别当心,防备油镜
压碎标本或破坏油镜。
5、眼睛看目镜中,拧动细调焦螺旋,使镜筒慢慢上涨到能看清标本。
这步操作要特别注意不要把细调焦螺旋的方向拧错,以防压碎标本。
6、察看并记录结果。
7、察看后,提高镜筒约1厘米,改换标本片;
8、察看完成后,提高镜筒约1厘米,取下标本片,把油镜转离光轴,
封闭电源,实时做洁净工作。
先用干的擦镜纸擦一、二次,把大多数油
去掉,再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦两次,最后再用干擦镜纸擦一次。
擦
拭时要顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆周擦。
擦抹要仔细,动作要
轻,不行使劲擦。
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- 动物 疫病 技能 操作 规范